長鏈非編碼RNA CTC-459F4.3對肝癌細胞干性增殖及凋亡的影響

王波金雯周健坤曹立宇

（1.銅陵職業技術學院醫學護理系，安徽 銅陵 244061；2.安徽醫科大學第一附屬醫院病理科，安徽 合肥 230021）

肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）屬全球高發性惡性腫瘤，病死率位居惡性腫瘤第二位［1］，其早期復發、轉移是影響患者預后生存的關鍵.研究指出，HCC患者中能夠在早期接受有效治療的僅占30%～40%，而針對HCC 早期診斷的臨床腫瘤標記物欠缺敏感性和多樣性［2］.HCC 早期診斷及治療的研究一直以來是科學家們的焦點，因此尋找具有靈敏且特異性強的肝癌目標基因，實現早期診療、提高預后顯得尤為迫切和重要.近年來，長鏈非偏碼RNA（Long non-coding RNA，Lnc RNA）已成為惡性腫瘤生物學行為研究領域的熱點基因.諸多研究顯示［3-5］，Lnc RNA可參與調節惡性腫瘤細胞周期、介導信號調控、影響腫瘤耐藥和微血管生成等，而不同的Lnc RNA在各種臟器或組織中呈特異性表達.本研究旨在觀察并探討Lnc RNA家族新成員CTC-459F4.3表達下調對HCC干性增殖及凋亡的影響，以期為HCC的有效診治提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料來源

HepG2細胞培養于ATCC細胞庫.

1.2 主要試劑與儀器

CTC-459F4.3 shRNA 慢病毒質粒（上海吉凱）；DMEM、RPMI 1640、PBS，pH7.4（Gibco，公司）；胎牛血清（Bio IND，04-002-1A）；Antibiotic-Antimycotic、Trypsin-EDTA（0.05%）、牛血清白蛋白（Lifetechnologies）；PI-Annexin V 試劑盒（日本同仁化學，AD10）；酶標儀（BioTek，EPOCH）；流式細胞儀（ACEN，NovoCyte）等.

1.3 方法

1.3.1 細胞培養與轉染

HepG2細胞系置于10%胎牛血清，5%CO2、37℃的培養箱中，相對濕度90%.0.125%胰蛋白酶作用后，培養基輕洗1次.加入DMEM/RPMI 1640培養基5mL，反復吹打，制成細胞懸液，1：2分瓶置于25mL培養瓶中.于對數期接種于6孔板中，每孔滴入一定滴度的慢病毒轉染48h，收集并觀察細胞轉染效率.

1.3.2 RT-PCR檢測CTC-459F4.3mRNA表達

分別設CTC-459F4.3 敲低組、對照組、空……