動態(tài)生化組織分析在人癌組織發(fā)展中的應(yīng)用

李賢，蘇秀蘭

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 臨床醫(yī)學(xué)研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010050）

0 引言

越來越多的證據(jù)表明，循環(huán)腫瘤細(xì)胞上的L-選擇素配體通過與白細(xì)胞上的L-選擇素結(jié)合而促進(jìn)轉(zhuǎn)移。常用的檢測組織中L-選擇素配體的方法，如免疫染色，是在靜態(tài)、無血流條件下進(jìn)行的。目前，免疫染色是檢測組織中表達(dá)的選擇素配體的標(biāo)準(zhǔn)方法，但這種方法不能確定選擇素配體是否具有功能。也就是說，在平衡條件下用靜態(tài)(無力)免疫染色法檢測所稱的選擇素配體，并不要求反應(yīng)抗原在非平衡條件下能夠介導(dǎo)細(xì)胞與血流動力學(xué)的結(jié)合。由于缺乏足夠的檢測方法，功能選擇素配體作為生物標(biāo)記物的相關(guān)性目前尚不清楚[1]。針對這些不足，我們提出了一種新的組織檢測方法，即動態(tài)生化組織分析(Dynamic biochemical tissue analysis，DBTA)，在微流控制裝置中，可以原位檢測功能選擇素配體[2]。動態(tài)生化組織分析可以檢測在乳房、結(jié)直腸、肝臟、肺、卵巢、胰腺、前列腺和胃癌組織上表達(dá)的功能選擇素配體[1]。

1 人癌組織

在轉(zhuǎn)移過程中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCS)上表達(dá)的唾液酸糖基化葡聚糖(CTCS)介導(dǎo)了與血液中造血細(xì)胞表達(dá)的選擇素分子的粘附。選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附(由活化的內(nèi)皮細(xì)胞、活化的血小板和白細(xì)胞表達(dá))與腫瘤細(xì)胞表達(dá)的選擇性選擇素配體結(jié)合可能與轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。因此，對人體組織中表達(dá)的選擇素配體進(jìn)行表征的方法可以作為一種有價值的檢測方法。檢測在人體組織上表達(dá)的功能選擇素配體的創(chuàng)新方法，該方法采用動態(tài)方法，允許對探針與目標(biāo)分子之間的鍵施加力進(jìn)行控制。動態(tài)生化組織分析是指在血流動力學(xué)條件下，用L-選擇素包裹的微球?qū)δ苓x擇素配體進(jìn)行原位檢測。使用選擇素包被探針的DBTA，能夠檢測在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移部位的多種腫瘤組織中表達(dá)的功能選擇素配體[4]。

然而，這種分析不能測定功能性的L-選擇素配體，特別是那些在剪切流動條件下促進(jìn)粘附的配體。因此，用DBTA探針可以檢測L-選擇素配體活性的人結(jié)腸組織。選擇素/選擇素配體相互作用參與介導(dǎo)循環(huán)腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中對遠(yuǎn)處部位的粘附。并證明了靜態(tài)生化組織分析(SBTA)在檢測組織上表達(dá)的功能性選擇素配體時的局限性。

2 結(jié)腸癌組織

E-，P-，L-選擇素(分別由活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞、活化的血小板和白細(xì)胞表達(dá))與它們各自的配體(由癌細(xì)胞表達(dá))之間的粘附作用促進(jìn)了轉(zhuǎn)移。例如，與結(jié)腸癌模型中野生型對照相比，敲除P-選擇素小鼠表現(xiàn)出明顯較低的轉(zhuǎn)移速率，通過肝素治療的選擇素抑制降低了小鼠的轉(zhuǎn)移[4]。此外，人頭頸部癌細(xì)胞還能在低淋巴FOW條件下表達(dá)，與L-選擇素結(jié)合L-選擇素配體相關(guān)[5]。病理組織中的L-選擇素配體的原位檢測傳統(tǒng)上是通過免疫染色等組織學(xué)技術(shù)，如免疫組織化學(xué)(IHC)或免疫熒光技術(shù)來實(shí)現(xiàn)的。因此，應(yīng)用動態(tài)生物化學(xué)組織技術(shù)(DBTA)分析原位表達(dá)功能L-選擇素配體，這種技術(shù)彌補(bǔ)傳統(tǒng)組織分析方法檢測配體的不足[6]。為了確定DBTA是否可用于檢測在原發(fā)腫瘤、轉(zhuǎn)移瘤、發(fā)炎組織和增生組織中表達(dá)的功能性L-選擇素配體，選用51例結(jié)腸組織進(jìn)行了功能性L-選擇素配體檢測[7]。結(jié)果證實(shí)DBTA產(chǎn)生了檢測功能L-選擇素配體所需的條件，這些配體與結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移過程中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)[8]。非癌組織和癌組織在內(nèi)的多種類型結(jié)腸組織的連續(xù)切片可以定量評價DBTA法的敏感性和重復(fù)性。DBTA不僅可重復(fù)檢測病變組織中的功能性L-選擇素配體，如癌變或發(fā)炎的組織，還揭示了結(jié)腸癌組織中功能L-選擇素配體的異質(zhì)分布[6]。

3 應(yīng)用前景和展望

隨著標(biāo)準(zhǔn)的組織分析方法，如免疫熒光（IF）、免疫組織化學(xué)（IHC）和熒光原位雜交(FISH)，DBTA可能被用作癌癥的診斷或預(yù)后工具，因?yàn)樵谶@種癌癥中，高表達(dá)的功能選擇素配體與轉(zhuǎn)移和不良的患者預(yù)后有關(guān)[9]。雖然小鼠研究表明，L-選擇素或L-選擇素配體的表達(dá)降低，減少了腫瘤與白細(xì)胞的相互作用，減少了腫瘤的轉(zhuǎn)移[10]，但L-選擇素/配體介導(dǎo)的人類轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍不清楚。使用動態(tài)生化組織分析能夠檢測在主要和轉(zhuǎn)移部位的多種癌癥類型的組織上表達(dá)的功能選擇素配體。因此，功能選擇素配體在人組織上的特征不再是難以理解的，這種方法可以被納入新的復(fù)用組織試驗(yàn)中。更廣泛地說，功能粘附分子的表征（例如，選擇素配體、整合素等）在人體組織上表達(dá)可作為有價值的診斷和預(yù)后試驗(yàn)。