Anti-PD-L1&CXCR4雙特異性納米抗體的純化與活性

徐舒怡，李雅賢，胡 海，張 莉，邊延林，朱建偉，吳明媛*

（1上海交通大學藥學院細胞工程及抗體藥物教育部工程研究中心，上海 200240；2上海交通大學分析測試中心，上海 200240）

納米抗體（nanobody，Nb），即重鏈單域抗體（variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody，VHH），是在駱駝體內發現的一種納米尺寸的天然抗體，相對分子質量約為15 kD，是常規抗體的十分之一［1］。納米抗體僅含有3個互補決定區（CDR），其中CDR3區域呈明顯的長環狀結構，有利于與隱蔽的抗原表位結合［2］。納米抗體的尺寸較小，可以穿過機體組織生理屏障或者狹小區域到達靶器官；具有良好的熱穩定性和水溶性，可在大腸埃希菌、酵母等表達系統中大規模生產［3］；同時，納米抗體制備簡單，可用于構建多種分子結構，包括具有雙特異性或雙功能的抗體，能夠避免重鏈和輕鏈的錯配，從而簡化分離、純化步驟以提高質量和產率［4］，已成為抗體藥物研發領域的熱點。2018年，第1個納米抗體藥物Caplacizumab獲歐洲藥物管理局批準上市，由針對血管性血友病因子的VHH二聚體組成，用于治療成人獲得性血栓性血小板減少性紫癜（aTTP）［5］。

過去數十年中，免疫檢查點抑制劑改寫了腫瘤治療的歷史，將晚期腫瘤的藥物治療向前推進了一大步。免疫檢查點療法的靶點主要包括細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4（CTLA-4）、程序性死亡蛋白-1及其配體（PD-1/PD-L1）［6］。PD-1由活化T細胞表達，而PD-L1常在腫瘤細胞上表達。腫瘤細胞會利用其表面過表達的PD-L1，抑制T細胞的活化，引起T細胞凋亡，從而躲避免疫監視和免疫攻擊［7］。拮抗負調控信號PD-1/PD-L1，有利于T細胞持續活化，殺傷或抑制腫瘤細胞生長［8-9］。……