基于谷氨酸脫羧酶65的口服疫苗對鏈脲佐菌素誘導的1型糖尿病小鼠的治療作用

吳伊玲，尤 琪，吳 潔

（中國藥科大學生命科學與技術學院，南京 211198）

1型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）是一種自身免疫性疾病，表現為機體對胰腺抗原成分免疫欠耐受，自身反應性T細胞對胰腺β細胞產生免疫性破壞，導致胰島素分泌絕對不足［1-2］。一旦發病，患者需要終身使用外源胰島素并定期監測血糖水平。重建機體對自身抗原的免疫耐受是研制相關疫苗防治T1D的關鍵。

在疫苗開發方面，抗原表位的選擇十分重要，需要選擇相關抗原分子上合適的抗原肽。谷氨酸脫羧酶65（glutamic acid decarboxylase 65，GAD65）為T1D自身抗原，谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）是T1D最早出現且陽性率最高的自身抗體，是非肥胖性糖尿?。∟OD）小鼠由外周胰腺炎發展為內部浸潤的關鍵靶點［3］。給雌性NOD小鼠注射外源性GAD65，可以明顯降低其T1D發病率［4］。GAD65敲除的NOD小鼠發生T1D的概率顯著降低且發病時間明顯推后［5］。臨床研究顯示，GAD65明礬制劑（或聯合維生素D）免疫可以維持患者β細胞功能，改善T1D的臨床指標［6-7］。

實驗室前期選擇GAD65中與疾病發生相關的關鍵表位肽段（p217~236，p524~538，p290~306）形成的靶抗原組合肽GADIII作為分子組分，使用霍亂毒素B亞基（cholera toxin subunit B，CTB）作為佐劑分子，成功構建得到原核表達重組菌株E.coliBL21-pET28a：CTB-GADIII［8］，誘 導 表 達 獲得的融合蛋白CTB-GADIII滴鼻免疫NOD小鼠可以顯著降低T1D發病率。

臨床上疫苗的給藥方式大多為注射，其次為滴鼻，而口服制劑由于胃腸道復雜的生理環境限制了其開發，但近年來也有很多成功的嘗試和報道［9-10］。

海藻酸鈉（sodiumalginate，SA）分子中含有大量的羧基，具有一定的生物黏附性，屬于黏膜黏附性納米材料，能夠保護多肽蛋白不受胃酸的破壞。……