雙歧桿菌三聯(lián)活菌對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者輔助性T細(xì)胞17/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡的調(diào)節(jié)作用

慕奕彤, 楊思賢, 牛福玉

(遼寧省營(yíng)口市中心醫(yī)院 消化科, 遼寧 營(yíng)口, 115003)

潰瘍性結(jié)腸炎(UC)主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、血便等，患者病情易反復(fù)，臨床治愈難度大，且具有較高的癌變率[1]。目前, UC的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但已有研究[2-3]證實(shí)腸道菌群失調(diào)所導(dǎo)致的腸黏膜異常免疫應(yīng)答在UC的發(fā)生與發(fā)展中起著重要的作用。輔助性T細(xì)胞17 (Th17)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)均屬于T淋巴細(xì)胞亞群，其中Th17可通過(guò)促進(jìn)下游炎癥因子分泌加重腸道炎癥反應(yīng), Treg則在維持機(jī)體免疫耐受和免疫平衡中發(fā)揮著重要作用，并可抑制腸道炎癥反應(yīng), Th17/Treg失衡是UC的重要發(fā)病機(jī)制[4]。近年來(lái)研究[5]顯示，腸道菌群變化對(duì)Th17/Treg平衡有重要影響，目前該方向已成為炎癥性腸病領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。雙歧桿菌三聯(lián)活菌是治療UC的常見(jiàn)益生菌制劑，可改善UC患者腸道菌群失調(diào)現(xiàn)象，有效提高臨床療效，且安全性較高[6], 然而其能否對(duì)患者Th17/Treg平衡起到調(diào)節(jié)作用尚未明確。本研究分析了雙歧桿菌三聯(lián)活菌對(duì)UC患者Th17/Treg平衡的影響，探討雙歧桿菌三聯(lián)活菌治療UC的可能機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月—2020年4月本院收治的UC患者116例作為研究對(duì)象，年齡22～61歲，平均(40.15±9.38)歲，男68例，女48例。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 符合UC診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]者; ②處于輕、中度活動(dòng)期者; ③自愿參與本次研究且簽署知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 合并腸穿孔、腸梗阻等其他腸道疾病者; ② 合并其他自身免疫性疾病、惡性腫瘤、嚴(yán)重感染、血液系統(tǒng)疾病者; ③ 存在心、肝、腎、腦等重要器官功能障礙者; ④ 妊娠期或備孕、哺乳期婦女; ⑤ 近3個(gè)月有益生菌制劑使用史者; ⑥ 服藥依從性差，未能按醫(yī)囑服用藥物者。采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者分為對(duì)照組和觀察組，每組58例。2組患者一般資料如性別、年齡、病程、體質(zhì)量指數(shù)、疾病活動(dòng)度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見(jiàn)表1。本研究已獲得本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

表1 2組患者一般資料比較

1.2 治療方法

2組患者均根據(jù)《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(jiàn)(2018年·北京)》[7]中的治療準(zhǔn)則采用氨基水楊酸制劑美沙拉嗪腸溶片(國(guó)藥準(zhǔn)字H20020211, 恒誠(chéng)制藥集團(tuán)淮南有限公司，規(guī)格0.4 g/片)進(jìn)行常規(guī)治療, 2片/次, 4次/d, 治療8周。治療期間飲食以清淡食物為主，忌食辛辣、生冷、油膩、刺激性食物，戒煙戒酒。觀察組在此基礎(chǔ)上聯(lián)用雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊(國(guó)藥準(zhǔn)字S10950032, 上海上藥信誼藥廠有限公司，規(guī)格0.21 g/粒)治療, 2粒/次, 3次/d, 治療8周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 臨床療效: 治療8周后根據(jù)結(jié)腸鏡檢查結(jié)果和患者的臨床癥狀評(píng)估療效，分為緩解、有效、無(wú)效3個(gè)等級(jí)[7]。若結(jié)腸鏡檢查顯示黏膜無(wú)活動(dòng)性炎性反應(yīng)，已基本恢復(fù)正常，且臨床癥狀消失，改良Mayo評(píng)分相對(duì)于基線值的降幅≥30%以及≥3分，便血的分項(xiàng)評(píng)分降幅≥1分或該分項(xiàng)評(píng)分為0或1分，可判定為緩解; 若結(jié)腸鏡檢查可見(jiàn)黏膜尚存在炎癥反應(yīng)，但輕于治療前，且患者臨床癥狀較治療前有所改善，改良Mayo評(píng)分變化達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)，可判定為有效; 若結(jié)腸鏡檢查結(jié)果和臨床癥狀較治療前均無(wú)明顯改善，改良Mayo評(píng)分無(wú)明顯變化，可判定為無(wú)效。總有效率=(緩解例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.3.2 腸道菌群情況: 治療前后對(duì)2組患者的腸道菌群情況進(jìn)行檢測(cè)，行結(jié)腸鏡檢查時(shí)取少量黏膜組織，采用熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)黏膜組織中的乳酸菌屬、雙歧桿菌屬、大腸埃希菌、梭菌屬、擬桿菌屬等菌群的分布情況，在熒光顯微鏡下(視野為200 μm×200 μm)進(jìn)行計(jì)數(shù)，取3次計(jì)數(shù)的平均值作為最終結(jié)果。

1.3.3 外周血Th17、Treg細(xì)胞情況: 治療前后抽取所有患者的空腹外周血5 mL, 予以肝素鈉抗凝，采用流式細(xì)胞儀(BD FAC-S Calibur)檢測(cè)外周血Treg、Th17水平，并計(jì)算Th17/Treg值，檢測(cè)結(jié)果采用Flowjo 7.6軟件進(jìn)行分析。

1.3.4 不良反應(yīng): 記錄患者治療過(guò)程中的不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 臨床療效

觀察組的總有效率為94.83%, 高于對(duì)照組的82.76%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見(jiàn)表2。

表2 2組患者臨床療效比較[ n(%)]

2.2 腸道菌群變化

治療前, 2組乳酸菌屬、雙歧桿菌屬、大腸埃希菌、梭菌屬、擬桿菌屬數(shù)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 治療后，2組乳酸菌屬、雙歧桿菌屬數(shù)量較治療前增加，大腸埃希菌、梭菌屬、擬桿菌屬數(shù)量較治療前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 治療后，觀察組乳酸菌屬、雙歧桿菌屬數(shù)量多于對(duì)照組，大腸埃希菌、梭菌屬、擬桿菌屬數(shù)量少于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 2組患者腸道菌群變化比較 個(gè)/視野

2.3 外周血Treg、Th17變化

治療前, 2組外周血Treg、Th17水平以及Th17/Treg比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 治療后, 2組外周血Treg水平高于治療前, Th17水平和Th17/Treg低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); 治療后，觀察組外周血Treg水平高于對(duì)照組, Th17水平和Th17/Treg低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 2組患者治療前后外周血Treg、Th17情況比較

2.4 不良反應(yīng)

治療過(guò)程中，對(duì)照組出現(xiàn)惡心嘔吐1例，胃腸脹氣1例，頭痛1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為5.17%(3/58)。觀察組出現(xiàn)惡心嘔吐2例，胃腸脹氣2例，不良反應(yīng)發(fā)生率為6.90%(4/58)。2組不良反應(yīng)發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討 論

UC是炎癥性腸病的主要類型之一，目前臨床尚缺乏有效的根治手段，病情易反復(fù)發(fā)作，給患者帶來(lái)較大的痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[8]。目前，臨床對(duì)于緩解期UC患者多采用維持治療，而對(duì)于輕、中度活動(dòng)期UC患者通常采用氨基水楊酸制劑治療，但臨床療效還有待提升。近年來(lái)，研究[9-11]認(rèn)為腸道菌群與腸道天然免疫及獲得性免疫之間存在著密切關(guān)系，且其對(duì)維持腸道穩(wěn)態(tài)平衡有重要的作用。益生菌是臨床常用的UC輔助治療藥物，既往研究[12-13]認(rèn)為，益生菌可輔助治療UC的主要作用機(jī)制是調(diào)節(jié)腸道菌群和減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，但較少研究涉及到益生菌對(duì)UC患者免疫系統(tǒng)方面的影響。

本研究結(jié)果顯示，觀察組的臨床療效優(yōu)于對(duì)照組，提示在常規(guī)治療基礎(chǔ)上聯(lián)用雙歧桿菌三聯(lián)活菌可有效提升治療效果，與相關(guān)研究[14]結(jié)果一致。Th17在UC的發(fā)病中發(fā)揮著雙重作用，其可以通過(guò)維持免疫微環(huán)境的平衡保護(hù)腸道黏膜，但其更主要的作用是通過(guò)分泌白細(xì)胞介素-17 (IL-17)來(lái)促進(jìn)炎癥及加重組織損傷[15]。林道潑等[16]研究證實(shí)，在增加Th17細(xì)胞比例和活性后, UC動(dòng)物模型的疾病活動(dòng)指數(shù)增高，同時(shí)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增多。Treg是一種發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用的CD4+T細(xì)胞亞群，可通過(guò)分泌白細(xì)胞介素-10(IL-10)等效應(yīng)因子來(lái)抑制炎癥性腸病的炎癥反應(yīng)[17]。Th17/Treg失衡可導(dǎo)致腸道免疫炎癥反應(yīng)加重，進(jìn)而促進(jìn)UC的發(fā)生與發(fā)展，因此治療UC時(shí)調(diào)節(jié)Th17/Treg平衡具有重要的作用。腸道菌群失調(diào)是UC的重要發(fā)病機(jī)制，目前已有多個(gè)研究證實(shí)腸道菌群可直接影響Th17/Treg平衡。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[18]發(fā)現(xiàn)，對(duì)炎癥性腸病模型采用益生菌干預(yù)后, Th17水平會(huì)有所下降，同時(shí)模型的腸道炎癥有所緩解; 普拉梭菌可激活Foxp3+受體，從而促進(jìn)初始T細(xì)胞分化成Treg[19]; 分節(jié)絲狀菌可通過(guò)調(diào)節(jié)樹突細(xì)胞抗原以及腸上皮細(xì)胞中的血清淀粉樣蛋白A的表達(dá)促進(jìn)初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化[20]。由此推測(cè)，腸道菌群失調(diào)引起的Th17/Treg失衡可能會(huì)對(duì)UC的疾病進(jìn)展起到重要的推進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示，雙歧桿菌三聯(lián)活菌可增加乳酸菌屬、雙歧桿菌屬等有益菌的數(shù)量，減少大腸埃希菌、梭菌屬、擬桿菌屬等有害菌的數(shù)量，有效調(diào)節(jié)腸道菌群。本研究還發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌三聯(lián)活菌可有效增高外周血Treg水平，降低Th17水平和Th17/Treg值。由此推測(cè)，雙歧桿菌三聯(lián)活菌可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群影響Th17/Treg平衡，進(jìn)而改善UC患者的腸道免疫炎癥反應(yīng)，從而起到輔助治療作用。此外，本研究治療過(guò)程中，2組患者均未出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，僅有輕微的腸胃道反應(yīng)和頭痛，未接受治療自行緩解，提示2種治療方案的安全性均較高。

綜上所述，雙歧桿菌三聯(lián)活菌可調(diào)節(jié)UC患者的腸道菌群和Th17/Treg平衡，有效提升臨床治療效果。通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群而影響Th17/Treg平衡可能是雙歧桿菌三聯(lián)活菌治療UC的作用機(jī)制之一，未來(lái)有待進(jìn)一步開展相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)加以驗(yàn)證。