食管癌患者放療前后血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg變化及臨床意義

羅楠， 鐘萍， 凌華， 賴瓊， 趙文靜， 楊暢， 楊婧， 樊汶露， 吳歡

(成都市第三人民醫院 腫瘤二科， 四川 成都 610031)

在我國食管癌死亡的人數占全國惡性腫瘤死亡率的21.8%，在各類消化道惡性腫瘤中僅次于胃癌，位居第二[1]。約有80%以上的食管癌在確診時已為中晚期，無法通過手術切除，主要采用放射治療以及其他綜合治療[2]。放射治療作為惡性腫瘤局部治療重要手段，一方面通過射線殺滅患者腫瘤細胞，另一方面又抑制患者機體免疫功能、使未完全消滅的腫瘤細胞重新生長、導致腫瘤復發和(或)轉移[3]。血清微管解聚蛋白(Stathmin)是細胞增殖與分化過程中高度保守的細胞內可溶性蛋白質，在多種腫瘤中呈現高表達，可調節微管系統動力學平衡來控制細胞周期，從而改變細胞增殖、分化及活性等[4]；血管內皮生長因子-C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)是近年來發現的VEGF家族中和淋巴管的生成以及腫瘤淋巴結轉移相關的因子；人體血液中的鱗狀上皮細胞癌相關抗原(squamous cell carcinoma associated antigen, SCCAg)水平和腫瘤的負荷、腫瘤細胞活躍程度等密切相關，其在血液中生物半衰期僅有數十分鐘，腫瘤一旦根治性切除后，異常升高的SCCAg可迅速降低至正常水平[5]。本研究通過比較放療前后食管癌患者血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平變化，分析食管癌患者放療前后血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平與放療效果及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1研究對象 收集2017年4月—2019年5月初治的106例食管癌患者作為食管癌組，其中男55例、女51例，年齡42～77歲、平均(60.36±6.02)歲，腫瘤部位頸段食管癌37例、胸上段食管癌30例、胸中段食管癌20例及胸下段食管癌19例，臨床分期Ⅰ期7例、Ⅱ期39例、Ⅲ期42例及Ⅳ期18例。納入標準：(1)經病理活檢證實為原發性食管鱗狀細胞癌，于本院初治，通過放射治療；(2)KPS評分≥70分；(3)無其他腫瘤病史，既往未接受過放化療治療。排除標準：(1)合并嚴重臟器功能不全、器質性疾病影響治療者；(2)合并系統性紅斑狼瘡、類風濕等損害免疫功能的慢病疾病；(3)有近期感染史；(4)食管穿孔形成；(5)合并其他惡性腫瘤。另選取健康體檢者30例作為對照組，其中男16例、女14例，年齡43～78歲、平均(61.05±5.97)歲。兩組受試者性別、年齡資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.1.2主要試劑和儀器 CT機模擬定位采用飛利浦16排大孔徑螺旋CT模擬機Brilliance TM Big Bore CT，放療采用瓦里安Clinac iX 直線加速器；血清Stathmin、VEGF-C、SCCAg檢測試劑盒分別為Stathmin試劑盒(美國R&D公司)，VEGF-C、SCCAg試劑盒(上海滬震實業有限公司)，酶標儀為BIO-RAD公司生產的型號為MOD-EI 550酶標儀。

1.2 放療方法

食管癌組患者均通過CT機模擬定位，給予三維適形放療。依照患者影像學和食管鏡檢查結果確定腫瘤體積，包括管壁增厚體積與短徑≥1 cm淋巴結，臨床靶體積為確定腫瘤體積前后往外延0.6～0.8 cm、上下伸展2.5～3.0 cm 以及相應淋巴引流區域，計劃靶體積是臨床靶體積基礎上外放0.5 cm。所有患者均使用6 MVX射線，放療頻次與劑量為1.8～2.0 Gy/次，5次/周，每位患者總劑量55.0～65.0 Gy。

1.3 觀察指標

比較對照組體檢時、食管癌組放療前及放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平，比較食管癌患者不同放療效果(放療有效組、無效組)、不同預后(未復發轉移組、復發轉移組)放療前后血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平及差值。(1)血清指標檢測，對照組于體檢當日，食管癌組于放療前、放療后4周時分別抽取空腹靜脈血4 mL，室溫下3 000 r/min離心5 min分離血清，通過酶聯免疫吸附法檢測血清中Stathmin、VEGF-C、SCCAg水平。(2)療效評價標準，食管癌患者放療4周時復查食管X射線，依照國際抗癌聯盟制定的療效標準和食管X射線掃描結果評定治療效果[6]：放療后患者腫瘤組織完全消失，食管黏膜基本恢復，X射線顯示鋇劑順利通過，管腔狹窄情況明顯改善為完全緩解；放療后患者腫瘤組織減小程度在50%以上，食管黏膜無明顯的扭曲及潰瘍，鋇劑通過較順利，邊緣欠光滑，可見狹窄為部分緩解；放療后患者腫瘤體積減小程度<50%，潰瘍變小，病變食管黏膜扭曲狀態改善為疾病穩定；經放療后患者腫瘤體積未減小，X線造影顯示明顯充盈缺損或狹窄，潰瘍加重為疾病進展；完全緩解與部分緩解為有效，疾病穩定或疾病進展為無效。(3)對患者隨訪1年，觀察其復發與轉移情況，隨訪方式為電話隨訪與門診復查，復發轉移經影像學檢查以及穿刺活檢診斷，術后復發形式為區域復發、區域性復發以及遠處淋巴結轉移。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平

結果顯示，食管癌組患者放療前與放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平均高于對照組(P<0.05)；食管癌組放療后Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平均低于放療前(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與食管癌組放療前和放療4周時血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平比較Tab.1 Comparison of serum Stathmin, VEGF-C， and SCCAg levels between esophageal cancer group (before radiotherapy and at 4 weeks after radiotherapy) and control group

2.2 不同療效食管癌患者放療前與放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平

結果顯示，食管癌組患者放療4周時，治療有效者82例，無效者24例；有效組與無效組放療前血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；有效組放療后血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平低于無效組，放療后與放療前差值大于無效組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同療效食管癌患者放療前與放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平比較Tab.2 Comparison of serum Stathmin, VEGF-C， and SCCAg levels in patients with different efficacy before radiotherapy and 4 weeks after radiotherapy

2.3 不同預后食管癌患者放療前與放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平

106例初次治療的食管癌患者放療后隨訪1年，復發轉移19例，未發生復發轉移87例，復發轉移組與未復發轉移組放療前血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；未復發轉移組放療第4周時血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平低于未復發轉移組，放療后較放療前差值大于復發轉移組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同預后食管癌患者放療前與放療4周時的血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平Tab.3 Comparison of serum Stathmin, VEGF-C， and SCCAg levels in patients with different prognosis before radiotherapy and 4 weeks after radiotherapy

3 討論

食管鱗癌是食管癌最主要的病理類型，約占90%以上[7]。目前，食管鱗癌主要治療方法包括手術、放療、化療等，其中手術為首選治療手段，其中放療是中晚期食管癌最常用的治療手段[8-9]。近年來，雖然放療技術以及設備在不斷發展更新，然而臨床放療效果仍然差強人意，一方面是由于食管鱗癌高侵襲、高轉移性等惡性生物學行為，另一方面也和腫瘤微環境變化有關，腫瘤微環境變化是導致放療抵抗和腫瘤復發及轉移的重要根源[10-11]。

Stathmin 由149個氨基酸組成，在細胞增殖及分化中具有重要調節作用。Stathmin可通過自身位點磷酸及去磷酸化來調節微管系統的動力平衡，控制細胞周期，調節細胞生物學行為[12-13]。Stathmin磷酸化可降低活性，使得微管蛋白聚集；去磷酸化可促進微管蛋白的解聚，降低胞外基質的穩定性，增加細胞侵襲能力[14]。因此，Stathmin表達水平對細胞周期、細胞動力學以及腫瘤的發生與發展過程具有重要意義[15]。本研究探討了食管癌患者與健康人群血清Stathmin水平差異，結果發現，食管癌患者血清Stathmin水平高于健康對照組。進一步比較放療前后食管癌患者血清Stathmin變化，結果顯示患者放療后血清Stathmin水平降低，且放療有效組患者血清Stathmin降低值大于無效組。蘇文兵等[16]通過對不同病理特征的食管癌患者血清Stathmin陽性率研究發現，TNMⅢ+Ⅳ期、低分化、腫瘤直徑超過5 cm、存在淋巴結轉移食管癌患者血清Stathmin陽性率高于TNMⅠ+Ⅱ期、中高分化、腫瘤直徑≤ 5 cm、無淋巴結轉移者，說明Stathmin在食管癌發展和轉移中具有重要作用。本研究比較放療后1年發生復發轉移與未發生復發轉移患者血清Stathmin水平差異，結果顯示未復發轉移組放療后血清Stathmin水平低于復發轉移組。

SCCAg主要包括SCCA1與SCCA2兩個亞型，其中SCCA2主要在胞漿中表達，可抑制組織蛋白酶G活性，參與蛋白水解[17]。研究發現SCCA2 mRNA在皮膚癌、宮頸癌、食管癌組織中均呈現選擇性表達，能夠通過抑制TNF-α活性來減少腫瘤細胞凋亡，加速腫瘤發展，與腫瘤浸潤及轉移密切相關[18-19]。汪萍萍等[20]研究發現宮頸癌患者癌組織SCCAg水平明顯高于正常組織和癌旁組織，血清水平高于健康對照人群。本研究中食管癌患者放療前血清SCCAg水平高于健康對照組，其在食管癌患者中的高表達狀態，與上述宮頸癌患者一致。Kotowicz等[21]研究發現SCCAg表達量與腫瘤術后復發與生存率有關。本研究中未復發轉移組患者放療后血清SCCAg水平低于復發組，較放療前下降值較大，進一步說明SCCAg與食管癌放療后復發有關。

VEGF-C編碼基因定位于4q34，是目前已知的促腫瘤淋巴管生成中活性最強的血管內皮生長因子。VEGF-C可通過激活淋巴管內皮細胞上受體，使受體磷酸化，誘導磷脂酞醇一激酶信號通路，激活激酶和蛋白激酶B信號通道，發生級聯反應，刺激淋巴管內皮增生，引起淋巴內皮細胞增殖、生長，促進淋巴管新生，同時降低淋巴管內皮細胞間黏附，提高淋巴管通透性，使癌細胞更易浸潤至淋巴管內，導致淋巴轉移甚至遠處轉移[22-23]。研究表明惡性腫瘤包括頭頸部腫瘤、皮膚癌、結腸癌、非小細胞肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌等患者VEGF-C均呈現高表達[24]。本研究中食管癌患者血清VEGF-C水平也高于健康對照，放療后水平降低。且放療有效患者血清VEGF-C水平下降幅度高于無效患者。曾蕓珠等[25]研究表明VEGF-C在食管鱗癌組織中高表達，VEGF-C促進食管鱗癌的淋巴結轉移，是影響食管鱗癌患者預后的重要指標。本研究中未復發轉移組放療后血清VEGF-C水平低于復發轉移組，與上述研究結果一致。

綜上所述，食管癌患者血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg呈現高表達，放療后上述血清指標較放療前下降，且有效組降低值明顯高于無效組，食管癌患者隨訪1年復發情況顯示，未復發組放療后血清Stathmin、VEGF-C及SCCAg水平均低于復發組，說明Stathmin、VEGF-C及SCCAg在食管癌患者放療療效及預后評估中具有重要價值。