氣相色譜法測定復方豬油膏中異龍腦含量的效果分析

舒 娟，石玉梅，徐曉芳，袁景祥

（1. 銅仁市檢驗檢測院，貴州 銅仁 554300 ；2. 銅仁市袁家寺骨科醫院，貴州 銅仁 554300）

復方豬油膏是袁氏家族的祖傳秘方，屬于我國地道的民族民間藥物。2003 年袁氏家族創建了銅仁袁家寺骨科醫院，并在院內新建了10 萬級層流凈化豬油膏制劑室。2014年2 月該院復方豬油膏的制作通過了省、市食品藥品監督管理局的現場評審。復方豬油膏由冰片、自然銅、黃丹、麝香、龍骨、滑石粉、豬油七味中藥組成，可祛膿拔毒、生肌、鎮痛、促進骨痂的生長和組織細胞的修復、縮短骨折愈合的時間。用此藥治療跌打損傷、瘀血腫痛、痛風、關節腫痛、風濕熱痹的療效顯著，且對急慢性骨髓炎（骨蝕）也有一定的療效[1-2]。此藥的原質量控制標準過于簡單，不能有效地控制其質量。為了加強對復方豬油膏進行質量控制，應對此藥中藥物活性成分的含量進行有效的測定[3-5]。本文主要是探討用氣相色譜（gas chromatography，GC）法測定復方豬油膏中異龍腦含量的效果。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

分析純為乙酸乙酯（由天津市富宇精細化工有限公司提供）和水楊酸甲酯（由天津市光復精細化工研究所提供），異龍腦（由111512-201904 中國食品藥品檢定研究院提供），16 個不同批次的復方豬油膏樣品（由銅仁袁家寺骨科醫院提供），復方豬油膏陰性對照品（由銅仁袁家寺骨科醫院提供）。

1.2 儀器

島津GC2014 氣相色譜儀，AOC20i 自動進樣裝置，METTLER TOLEDO-XPE56 百萬分之一天平，METTLER TOLEDO-XPE105 十萬分之一天平，KQ-500E 超聲波清洗器。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 內標溶液的制備 精密量取水楊酸甲酯5 mL，置于1000 mL 的量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為內標溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取異龍腦對照品適量，加入內標溶液制成每l mL 含異龍腦1.26970 mg 的溶液（即對照品溶液）。吸取對照品溶液1 μL，注入氣相色譜儀內，計算校正因子。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密稱取復方豬油膏1 g，置于具塞錐形瓶中，加入內標溶液10 mL，稱定重量。對溶液進行5 min 的超聲處理，放冷后再稱定重量，并用內標溶液補足減失的重量。將溶液搖勻后進行濾過處理，取續濾液過0.45 μm 的濾膜，即制得供試品溶液。

2.1.4 陰性對照溶液的制備 將復方豬油膏處方中的冰片去除，余藥按復方豬油膏的制備工藝進行制備，制成陰性對照品，按 2.1.3 項下的方法制備成陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱為以Rtx?-1701 為固定相的毛細管柱（柱長為30 m，內徑為0.32 mm，膜厚度為0.25 μm），柱溫為120℃，進樣口溫度為200℃，火焰離子檢測器（flame ionization detector，FID）的溫度為200℃，進樣方式為分流式進樣，分流比為20:1。理論板數為水楊酸甲酯峰不低于2500。

2.3 線性關系考察

精密稱取異龍腦對照品適量，加入內標溶液制成每l mL含異龍腦3.17425 mg 的溶液（即對照品溶液）。精密吸取對照品溶液0.8 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分別置于10 mL 的量瓶中，加入內標溶液稀釋至刻度。精密吸取各濃度對照品溶液1 μL，注入氣相色譜儀中進行檢測（色譜條件如上），以峰面積A 對濃度（mg/mL）進行線性回歸計算，得到線性回歸方程 y=719359x+267526，R2=0.999。這表明，異龍腦在0.25394 ～3.17425 mg/mL范圍內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取對照品溶液1 μL，重復進樣6 次，計算得到相對標準偏差（RSD）為0.87%。這表明，該檢測方法的精密度良好。

2.5 樣品穩定性試驗

取復方豬油膏樣品（批號20190803），按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液，分別于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h 進樣測定（色譜條件如上）異龍腦的峰面積并計算其平均含量。測定的結果顯示，異龍腦的RSD 為1.18%。這表明，供試品溶液在24 h 內的穩定性良好。

2.6 重復性試驗

取復方豬油膏樣品（批號20190803），按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。將供試品溶液平均分成6 份，用GC 法并按照上述色譜條件對6 份供試品溶液進行測定，分別記錄其峰面積并計算其平均含量。結果顯示，異龍腦的RSD 為1.36%。這表明，該檢測方法的重復性良好。

2.7 回收率試驗

采用加標回收法，精密稱取6 份已知含量的復方豬油膏樣品（批號為20190803，異龍腦的含量為16.80 mg/g），置于10 mL 的容量瓶中，精密加入異龍腦對照品溶液（濃度為1.2697 mg/mL）4 mL。采用2.1.1 項下的方法制成內標溶液，將溶液稀釋至刻度。按2.1.3 項下的方法制成供試品溶液，并采用GC 法按上述色譜條件對內標溶液進行測定。測定的結果顯示，異龍腦的平均回收率為94.43%，RSD 為0.70%（n=6）。詳見表1。這表明，該檢測方法具有良好的回收率。

表1 復方豬油膏加樣回收率試驗結果（n=6）

2.8 樣品測定

取16 批次復方豬油膏樣品，將其按照2.1.3 項下的方法制成供試品溶液。采用GC 法按上述色譜條件對供試品溶液進行測定，每批次樣品均測定3 次，16 批次樣品中異龍腦含量的測定結果見表2。

表2 復方豬油膏樣品的測定結果

2.9 專屬性試驗

按2.1.4 項下的方法制備陰性對照溶液。分別吸取陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液各1 μL，采用GC法按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖見圖1。

圖1 陰性對照溶液、對照品溶液與供試品溶液的色譜圖

3 討論

復方豬油膏屬于我國地道的民族民間藥物。在100 余年的使用過程中，復方豬油膏被證實具有續筋接骨、活血化瘀、祛腐生肌的功效，同時對水、火燙傷也有一定的治療作用。本文建立了復方豬油膏的質量控制方法。復方豬油膏處方中的冰片（合成龍腦）為君藥，具有開竅醒神、清熱止痛之功效，其主要藥物活性成分為異龍腦[6-8]。GC法是一種以氣體為流動相的色譜分析方法，主要用于分離分析易揮發的物質。本研究在采用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦的含量時，在上述色譜條件下陰性樣品在異龍腦吸收峰位置無干擾峰，這說明采用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦含量的重現性良好，結果準確度高。

綜上所述，用GC 法測定復方豬油膏中異龍腦的含量具有精密性、重復性、穩定性良好及加樣回收率高等優點，可用于對復方豬油膏進行質量控制。