用HPLC法測定紅茴香注射液中槲皮苷的含量

成 程，陳向梅，馬 健，趙 氚 （中國人民解放軍總醫院醫療保障中心藥劑科，北京 100048）

紅茴香注射液是由紅茴香根皮經提取制成的滅菌水溶液，具有消腫散瘀，活血止痛作用。臨床用于腰肌勞損，關節或肌肉韌帶傷痛等。總黃酮是紅茴香注射液的主要成分。原標準以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定總黃酮的量，專屬性不強。故筆者參考《中國藥典》[1]，以槲皮苷為測定對象，采用HPLC法測定紅茴香注射液中槲皮苷的含量[2-5]獲得滿意結果, 現報告如下。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1100系列型高效液相色譜儀；HPChemstation色譜工作站。

1.2 試藥

乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。槲皮苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供 (批號：111538-200301，含量測定用), 紅茴香注射液由浙江泰康藥業有限公司提供(批號：20040730)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Dikma C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(25∶75)，流速1.0 ml/min，柱溫 30 °C，檢測波長256 nm，進樣量為10 μl。色譜柱的理論塔板數按槲皮苷峰計算大于3 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取槲皮苷對照品(120 ℃減壓干燥至恒重)適量, 加甲醇制成每1 ml含0.1 mg 的溶液, 搖勻, 即得。

2.2.2 供試品溶液

精密吸取本品3 ml，置25 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液

取輔料作為缺樣空白樣品，按“2.2.2”項下方法制備。

2.3 專屬性試驗

分別取陰性對照溶液，對照品溶液及供試品溶液適量，濾過取續濾液 10 μl 注入 HPLC 儀，分別記錄色譜圖。實驗結果表明，該方法專屬性良好，陰性對照無干擾，結果見圖1。

2.4 線性關系考察

精密稱取經減壓干燥24 h的槲皮苷對照品適量，加甲醇配成每l ml含槲皮苷0.215 0 mg的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖，以槲皮苷峰面積的積分值為Y，進樣量為X(μg)，回歸得線性方程Y=1 515.9X+57.088 2，r=0.999 8，表明在0.215～3.225 μg范圍內呈良好線性關系。

2.5 重復性試驗

取同一批供試品6份（批號：20040730），分別按供試品溶液制備法制備，按“2.1”項色譜條件測定。結果表明含量值分別為：1.187、1.189、1.197、1.196、1.196、1.198 mg/ml，RSD為0.40%（n=6），表明此方法重復性較好。

2.6 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液（批號：20040730）10 μl，重復進樣6次, 按“2.1”項下色譜條件測定。峰面積分別為2 214.51、2 217.06、2 232.75、2 236.86、2 250.09、2 190.69，RSD為0.86%（n=6），結果表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

精密吸取同一批號供試品溶液（批號：20040730）10 μl，分別于0、0.5、1、2、8、12、24 h測定峰面積值，結果為2 220.96、2 223.36、2 230.08、2 235.78、2 246.88、2 200.44、2 227.17，平均峰面積為2 226.38，RSD為0.64%（n=6），結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

取已測定含量的樣品6份，每份3 ml，分別加入槲皮苷對照品溶液10 ml（濃度為0.225 4 mg/ml），按供試品溶液的制備方法操作，進行回收率測定，結果分別為100.49%、99.33%、98.14%、99.82%、98.89%、99.65%，平均加樣回收率為99.39%，RSD為0.82%（n=6）。

2.9 樣品含量測定

分別取3批不同批號的紅茴香注射液樣品，按“2.2”項下制備供試品溶液，樣品測定結果見表1。

3 討論

3.1 測定波長的選擇

取對照品溶液依法操作，在200～400 nm的波長范圍內掃描，結果在256.6 nm處有最大吸收，因此選擇256 nm作為測定波長(圖2)。

圖2 槲皮苷對照品紫外掃描圖

3.2 溶劑的選擇

槲皮苷易溶于甲醇、乙醇, 用甲醇作溶劑的峰形比用乙醇作溶劑的峰形好, 因此選擇用甲醇作為溶劑。