血清高遷移率族蛋白B1、CC修飾趨化因子11與慢性乙型肝炎患者肝纖維化程度的相關性

陳雨

（鄭州市第二人民醫院 消化內科，河南 鄭州 450000）

肝纖維化是慢性乙型肝炎（CHB）患者向肝硬化發展的必經步驟，也是影響CHB 患者預后的重要環節，據報道，肝纖維化的進展可以是快速、散發或緩慢的，同時也是可逆的［1］。因此，早期評估CHB 患者的肝纖維化程度尤為必要。肝活檢組織病理學檢查為CHB 患者肝纖維化的金標準，但因其為有創檢查，有一定并發癥發生風險，同時檢查費用較高，有一定局限性［2］。相關研究指出，肝纖維化發生的起點為肝臟的反復損傷和修復［3］。血清高遷移率族 蛋 白B1（high-mobility group box 1,HMGB1）可通過主動或被動方式以生物信號分子形式參與機體的組織損傷與修復、炎性反應等活動［4］。而CC 修飾趨化因子11（C-C motif chemokine ligand 11,CCL11）屬于CC 趨化因子家族之一，主要表達于嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞、T 細胞中［5］。且有研究指出，CCL11 水平升高，可使嗜酸性粒細胞細胞到達肝臟受損部位，加重肝臟的炎癥程度［6］。結合上述，猜測血清HMGB1、CCL11 可能與肝纖維化存在一定關系，但具體關系尚未明確，且相關研究較少。基于此，本研究將重點觀察CHB 患者肝纖維化程度與血清HMGB1、CCL11 的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

鄭州市第二人民醫院倫理委員會已審核本研究方案，并批準實施，患者及家屬均知曉本研究方案，且簽署知情同意書，前瞻性納入2018 年6 月至2019 年9 月醫院收治的92 例CHB 患者。納入標準：①符合《慢性乙型肝炎防治指南》［7］中關于CHB 的診斷標準；②存在不同程度肝纖維化。排除標準：①活檢穿刺前接受抗病毒治療或服用其他抗炎、保肝、抗氧化等藥物；②合并其他病毒性肝炎；③HBsAg 陽性>6 個月；④合并高血壓、糖尿病；⑤長期酗酒；⑥合并血友病；⑦合并膿毒癥或冠脈病變及肺炎等可能影響血清HMGB1、CCL11 水平的疾病；⑧排除無肝纖維化或肝硬化（S0、S4 期）的患者。92 例患者中男55 例，女37例；年齡40～65 歲，平 均（50.31±3.10）歲；CHB 病程2～6 年，平均（3.24±0.88）年。

1.2 方法

1.2.1 CHB 患者肝纖維化程度評估方法 經B 超定位，常規消毒右腋前線第8 肋間，經皮采用16G穿刺針快速穿刺，獲取肝組織，采用4%甲醛溶液固定標本，常規制片，網狀纖維及蘇木精-伊紅染色，病理診斷纖維化分期參照《病毒性肝炎防治方案》［8］中標準分為S1～3 期（本研究已排除S0、S4 期）。S1：局限小葉內竇周內纖維化；S2：小葉結構保留，匯管區周圍纖維化、纖維間隔形成；S3：無肝硬化，纖維間隔伴小葉結構紊亂。

1.2.2 基線資料統計 包括性別（男、女）、年齡、病程、吸煙史（有、無）、體重指數（body mass index,BMI）［BMI=體重（kg）/身高（m）2］。

1.2.3 血清指標檢測 入院時，采集患者靜脈血3 mL，3 000 r/min 離心10 min 后，離心半徑為10 cm，分離上層血清，采用點將（上海）科技股份有限公司PUZS-300 全自動生化分析儀測定丙氨酸轉氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、天冬氨酸轉氨酶（aspartate transaminase,AST）、膽固醇（cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平，采用上海酶聯生物科技有限公司生產的試劑盒以酶聯免疫法測定血清HMGB1、CCL11 水平。

1.3 統計學方法

采用SPSS 24.0 軟件，全部計量資料均經Shapiro-Wilk 正態性檢驗，以均數±標準差（）表示符合正態分布數據，三組間比較采用單因素方差分析，兩兩間比較采用SNK-q檢驗；計數資料用百分率（%）表示，若期望值<5，采用連續校正χ2檢驗；CHB 患者血清HMGB1 與CCL11 水平之間的相關性采用雙變量Pearson 直線相關性檢驗；采用Kendall's tau-b 相關性分析檢驗血清HMGB1、CCL11 水平與CHB 患者肝纖維化程度的關系；繪制受試者工作曲線（ROC），并計算曲線下面積（AUC），檢驗血清HMGB1、CCL11預測CHB 患者肝纖維化程度的價值，0.5～0.7 表示預測性能較差，0.71～0.90 表示有一定預測性能，AUC 值>0.9 表示預測性能較高。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝纖維化程度評估結果

92 例CHB 患者經病理診斷結果顯示，纖維化分期S1 期30 例，占比32.61%，S2 期38 例，占比41.30%，S3 期24 例，占比26.09%。

2.2 不同分期肝纖維化CHB 患者基線資料比較

S1 期肝纖維化CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平均低于S2、S3 期肝纖維化患者，差異有統計學意義（P<0.05）；而S2 期與S3 期CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平比較，差異無統計學意義（P>0.05）；組間其他資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 不同分期肝纖維化CHB 患者基線資料比較

2.3 血清HMGB1 與CCL11 水平之間的相關性分析

采用雙變量Pearson 直線相關性分析結果顯示，CHB 患者血清HMGB1 與CCL11 水平之間呈正 相 關（r=0.303,P=0.003）。相關性散點圖見圖1。

圖1 血清HMGB1 與CCL11 水平之間的相關性分析散點圖

2.4 血清HMGB1、CCL11 水平與CHB 患者S2、S3 期肝纖維化關系分析

經Kendall's tau-b 相關性分析，CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平與S2、S3 期肝纖維化呈正相關（r>0,P<0.05）。見表2。

2.5 CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平預測肝纖維化程度價值分析

將CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平作為檢驗變量，肝纖維化程度作為狀態變量（1=S2、S3 期，0=S1 期），繪制ROC 曲線（見圖2）結果顯示，CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平預測S2、S3 期肝纖維化的AUC 均>0.80，預測價值均較理想，且以聯合檢測價值最佳。各指標對應特異度、靈敏度、最佳閾值及約登指數，見表3。

圖2 血清HMGB1、CCL11 水平預測CHB 患者肝纖維化程度價值的ROC 曲線圖

表3 CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平預測肝纖維化程度效能分析結果

3 討論

肝纖維化是各種病因引起的慢性反復肝損傷后修復反應，若不能及時接受治療，可發展為失代償性肝硬化，甚至進展為終末期肝病［9］。本研究結果顯示，92 例CHB 患者中病理診斷纖維化分期S1 期30 例，S2 期38 例，S3 期24 例，說明CHB 患者均伴有不同程度的肝纖維化，部分患者甚至已經發生進展。因此在早期預測CHB 患者肝纖維化程度尤為必要。

肝穿刺為臨床判斷肝纖維化程度的重要途徑，但因穿刺為有創檢查，患者接受度較差；除肝穿刺活檢外，還有包括腹部超聲、CT、核磁共振等檢查方法，但這些方法對肝纖維化程度判定的準確性相對較差［10］。近年來，在肝纖維化診斷中無創診斷技術受到廣泛關注，但缺乏準確性高的血液學標志物。既往研究指出，肝臟損傷后的炎癥細胞外基質沉淀和免疫反應、自我修復過程是肝纖維化的發生源，炎癥反應是肝纖維化的始發節段及動因［11］。HMGB1 作為核心晚期炎性因子，具有導致炎癥發生和結合DNA 功能，且有較強的促炎作用［12］；并有研究指出，以信號分子形式的HMGB1，可直接介導炎性因子釋放，刺激單核、巨噬等細胞遷移，繼而對炎性反應造成影響［13］。作為CC 趨化因子家族一員，CCL11 可與CCR3 受體結合，在嗜酸性粒細胞的黏附、募集、脫落中發揮作用［14］。且有研究將CCL11 對肝臟疾病中炎癥過程進行研究，結果顯示，CCL11 在肺部炎癥中呈高表達［15］。由此，推測CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平不僅參與CHB 患者的炎癥反應，還可能與CHB 患者的肝纖維化程度密切相關。

本研究結果顯示，S1 期肝纖維化CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平均低于S2、S3 期肝纖維化患者，說明在S2、S3 期肝纖維化CHB 患者中血清HMGB1、CCL11 表達增加，血清HMGB1、CCL11 水平的高表達可能與S2、S3 期肝纖維化相關。分析原因，適量水平的HMGB1 可引發有益的免疫反應，緩解組織損傷，若HMGB1 水平升高，其免疫應激反應過激，造成機體反噬作用，引起嚴重的炎癥反應，加重肝纖維化程度［16-17］。在CHB 患者肝纖維化過程中，炎癥過程中浸潤的白細胞可釋放CCL11，是S2、S3 期肝纖維化CHB患者血清CCL11 高表達的主要原因［18-19］。同時本研究結果顯示，S2、S3 期肝纖維化CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平比較，差異無統計學意義，這一結果可能與S2、S3 期肝纖維化均為顯著肝纖維化有關，經Kendall's tau-b 相關性分析，CHB 患者的血清HMGB1、CCL11 水平與S2、S3期肝纖維化呈正相關，進一步繪制ROC 曲線發現，CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平單獨及聯合評估肝纖維化程度為S2、S3 期的AUC 均>0.80，預測價值均較理想，且以聯合檢測價值最佳。上述結果證實CHB 患者S2、S3 期肝纖維化與血清HMGB1、CCL11 水平過表達有關，檢測兩者水平可作為CHB 患者肝纖維化程度的輔助評估指標，若早期檢測CHB 血清HMGB1、CCL11 過表達，建議可及時實施治療，或可對阻止肝硬化進展有一定價值。此外本研究還對CHB 患者血清HMGB1、CCL11 水平進行相關性分析，結果顯示，CHB 患者的HMGB1 水平與CCL11 水平之間呈正相關，說明CHB 患者的血清HMGB1 水平與CCL11 水平之間可能相互影響，可能與兩者均參與CHB 患者的炎癥反應有關，但具體的關系還需要進一步證實。

綜上所述，CHB 患者的血清HMGB1、CCL11水平異常表達與肝纖維化程度有一定聯系，兩者過表達可能提示肝纖維化程度為S2、S3 期肝纖維化，可早期通過檢測患者上述指標水平，以輔助評估肝纖維化程度，可能對指導早期診斷與治療有積極意義。