4 886例生殖異常患者的染色體變異情況分析

倪香，藺美娜，李歡，陳薪任，姜淼

1遼寧省計劃生育科學研究院附屬醫院優生遺傳科，沈陽110001；2中國醫科大學附屬生殖醫院優生遺傳科

臨床上生殖異常包括夫妻雙方出現不孕不育、流產死胎或既往有異常兒生育史（新生兒死亡、先天畸形、智力低下等）［1］。近年來，生殖異常發病率逐漸增高，其發病原因包括內分泌紊亂、免疫失調、生殖道感染、環境因素、遺傳因素等，其中遺傳因素中染色體異常是導致生殖異常的主要原因［2］。染色體多態性是指在正常人群中，染色體存在著各種恒定微小變異，主要表現為同源染色體之間在形態結構、帶紋寬窄和著色強度等方面的明顯差異，染色體多態性涉及所有染色體［3］。染色體畸變是指體細胞或生殖細胞內染色體發生的異常改變，分為數目異常和結構異常［4］。不同類型的染色體變異的臨床表型和引起的后代遺傳模式不同，后續的治療措施也會有差別。本研究對4 886例患者的外周血染色體核型進行回顧性分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料回顧性分析收集2014年1月—2017年12月遼寧省計劃生育科學研究院附屬醫院就診的生育異常患者4 886例資料，男2 544例、女2 342例，年齡20～48歲，女性患者包括不孕不育、習慣性流產、胚胎停育、畸形胎，男性患者主要是精液常規表現為少、弱、無精子，包括一胎和二胎生育智力障礙或別的異常孩等。

1.2 染色體多態性檢測采集患者外周血2～3 mL，肝素鈉抗凝。無菌條件下，取0.5～0.6 mL外周血接種于含20%胎牛血清的RPMI1640培養基中，37℃恒溫箱中培養70 h；其余外周血留在抗凝管中待用。加入20 μg/mL秋水仙素1滴（5號注射器），繼續培養2 h，1 500 r/min離心10 min，收集淋巴細胞。加入0.075 mol/L氯化鉀低滲溶液8 mL，用吸管吹打成細胞懸液，置37℃水浴處理25 min，加入固定液（甲醇∶冰乙酸為3∶1）1 mL預固定5～10 min，離心去除上清液，反復2次置冰箱4℃過夜。在離心管中滴入固定液0.5 mL，用吸管將淋巴細胞吹打成細胞懸液。取干凈玻片，每片滴加懸液2滴，室溫老化24 h。加入0.025%胰酶消化25 s，Giemsa染液染色3 min，自來水沖洗。10倍鏡下尋找分裂相，然后100倍鏡下進行計數，拍照。每例患者隨機分析20～30個分散良好的染色體中期分裂相，共分析5個核型，進行細胞遺傳學診斷。檢查染色體的數目和結構是否存在異常，如果出現異常，計數雙倍的核型及逆行分析。

2 結果

2.1 染色體變異的分布情況4 886例患者中，檢出染色體變異636例（13.02%），其中染色體多態性改變529例、染色體畸變107例。

2.2 染色體多態性檢出情況529例染色體多態性中，Y染色體變異85例、染色體次縊痕增加322例、D/G組隨體變化321例、9號臂間倒位31例。見表1。

表1 染色體多態性的發生率及構成比（%）

2.3 染色體畸變檢出情況107例染色體畸變中，性染色體數目異常43例、平衡易位29例、羅伯遜易位17例、倒位10例、其他8例。見表2。

表2 染色體畸變的發生率及構成比（%）

3 討論

生殖異常包括男性原因引起的無精、少弱精、外生殖器異常導致的不育，女性卵巢功能衰弱或月經不調引起的不孕，遺傳異常引起的流產、死胎，生殖異常畸形，智力低下等多發畸形或五官、四肢、軀體、內臟方面的畸形等。國內研究顯示，染色體多態性在人群中的檢出率約為2.6%［5-6］。染色體的多態性變異是按孟德爾方式遺傳的，包括第1、9、16號染色體次溢痕的有無或長短的差異變異，9號染色體的著絲粒異染色質區倒位，D/G組近端著絲粒染色體的短臂、隨體及隨體柄部次溢痕區的變異，Y染色體的長度變異等［3］。染色體變異主要發生在具有高度重復DNA結構的異染色質區，既往研究認為，此區域內的DNA序列不具有轉錄活性，染色體多態屬正常變異，不具有臨床意義［7］。近年研究發現，染色體異染色質區的變異可能與生殖功能異常有關［8-9］，主要的涉及的分子機制為異染色質區的變異可能干擾減數分裂過程、表觀遺傳學改變、基因位置效應等。馬芳芳等［10］報道，福建地區生殖異常患者中染色體多態性的檢出率為4.84%；全超等［11］報道，無錫地區生殖異常患者中染色體多態性檢出率為5%；謝德純［12］報道，廣西地區的染色體多態性的檢出率為11.74%。本研究4 886例生殖異常患者中，染色體多態性占比10.83%，高于一般人群，并且高于以前文獻報道，這可能與研究對象的納入種類、所屬區域、年齡等情況不同有關。

染色體是遺傳物質基因的主要載體，由DNA和蛋白質組成。染色體畸變的實質是染色體或染色體上基因群的增減或移位，使遺傳物質發生了改變，打亂了基因之間的相互作用，影響了相應蛋白質的功能。遺傳學上生育異常的夫婦染色體異常的檢出率為3%～6%［4］。洪寶麗等［13］報道，安徽地區8 084例生育異常的患者中，異常染色體檢出率為3.96%；宋娟等［14］報道，銀川地區1 099例回族和漢族生殖異常男性中，異常染色體檢出率為19.45%；李莉等［15］報道，寧夏地區600例生殖異常患者中，染色體異常檢出率為11.5%。本研究4 886例生殖異常患者中，染色體畸變107例，發生率為2.19%，其中性染色數目異常占比最高，占染色體畸變總數的40.19%；其次是平衡易位，占染色體畸變總數的27.10%。本研究結果與既往文獻報道［16］存在差異，其原因可能與研究對象的男女比例、民族差異、地區差異等，以及納入的標準和樣本數量有關。

綜上所述，本研究對我院4 886例生殖異常的患者進行外周血染色體核型分析，發現生殖異常的患者染色體核型異常的比率較高，因此在生殖功能異常患者的病因分析中，應該重視對染色體異常的分析，對患者的后續診療具有重要作用。根據患者的染色體異常情況，針對性的進行治療，幫助患者選擇合適的輔助生殖策略。