血清Bcl-2、Cox-2水平與FP方案治療食管鱗癌患者預(yù)后的相關(guān)性

吳菁菁 董賈中 王利慧

食管鱗狀細(xì)胞癌(ESCC)是食管癌常見類型，多數(shù)ESCC患者就診時(shí)病情已進(jìn)展至中晚期，錯(cuò)失最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)[1]。受個(gè)體差異影響，部分ESCC患者化療效果不佳，而有效評(píng)估患者預(yù)后，對(duì)調(diào)整治療方案，改善患者預(yù)后意義重大[2]。既往臨床多采用腫瘤標(biāo)志物診斷ESCC，如糖類抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)等，此類標(biāo)志物雖有一定敏感度及特異性，但用化療前血清水平預(yù)測(cè)預(yù)后準(zhǔn)確率較低，應(yīng)用存有局限[3]。B細(xì)胞淋巴瘤2(Bcl-2)是新發(fā)現(xiàn)的癌基因，該基因具有抑制細(xì)胞凋亡作用，研究指出，Bcl-2對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展具有促進(jìn)作用[4]。環(huán)氧合酶2(Cox-2)是細(xì)胞內(nèi)前列腺素(pG)合成誘導(dǎo)型酶，具有促進(jìn)pG生成作用，相關(guān)研究表明，Cox-2可促進(jìn)腫瘤血管新生，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[5]。結(jié)合Bcl-2、Cox-2機(jī)制猜測(cè)，二者可能與ESCC患者FP方案治療預(yù)后存在一定關(guān)系，但與之相關(guān)研究較少。鑒于此，本研究通過觀察ESCC患者血清Bcl-2、Cox-2表達(dá)，旨在分析血清Bcl-2、Cox-2表達(dá)與FP方案治療ESCC患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究實(shí)施獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)同意。前瞻納入2018年9月至2020年4月接受FP方案治療的97例ESCC患者為研究對(duì)象，患者及家屬對(duì)此次研究的實(shí)施知情，并簽署研究知情同意書。97例患者男性56例，女性41例；年齡43～67歲，平均(55.65±3.60)歲；腫瘤直徑3.7～10.6 cm，平均(7.14±1.12)cm；TNM分期：Ⅱ期31例，Ⅲ期40例，Ⅳ期26例。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：ESCC符合《現(xiàn)代腫瘤學(xué)(第三版)》[6]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；卡氏評(píng)分(Karnofsky，KPS)[7]>60分；首次接受化療；精神正常，可配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：治療前接受手術(shù)治療或既往有腫瘤切除史；合并胃癌、結(jié)直腸癌等其他惡性腫瘤；合并肝衰竭、先天性心臟病等重要臟器疾病；合并感染性肺炎、乙型肝炎等感染性疾病；白細(xì)胞<4×109/l，或血小板<80×109/l。

1.3 方法

1.3.1 FP方案化療方法 化療d1～5，靜脈滴注氟尿嘧啶(天津金耀藥業(yè)，生產(chǎn)批號(hào)：20180812，規(guī)格：250 mg)750 mg/m2，靜脈滴注24 h；化療d1，靜脈滴注順鉑(德州德藥制藥，生產(chǎn)批號(hào)：20180726，規(guī)格：20 mg)80 mg/m2；3周為1個(gè)化療周期，共化療6個(gè)周期。

1.3.2 預(yù)后評(píng)估及分組 于化療6個(gè)周期，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[8]評(píng)估患者預(yù)后，完全緩解(CR)：全部病灶消失，各項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物水平恢復(fù)正常，且無新病灶出現(xiàn)，維持時(shí)間≥4周；部分緩解(PR)：全部病灶最長直徑總和減少≥30%，維持時(shí)間≥4周；疾病穩(wěn)定(SD)：全部病灶最長直徑總和減少<30%，或增加<20%；疾病進(jìn)展(PD)：全部病灶最長直徑總和增加≥20%，或出現(xiàn)新病灶。將化療療效達(dá)SD、PD患者判定為預(yù)后不良，納入預(yù)后不良組，反之則納入預(yù)后良好組。

1.3.3 血清Bcl-2、Cox-2檢測(cè) 于患者化療前、化療6個(gè)周期，取其清晨空腹肘靜脈血5 ml，以4000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，采集血清用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法測(cè)定Bcl-2、Cox-2水平，檢測(cè)試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，檢驗(yàn)流程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.4 基線資料調(diào)查 設(shè)計(jì)基線資料調(diào)查表，詢問并記錄ESCC患者基線資料，內(nèi)容包括：一般資料[性別(男、女)、年齡、腫瘤直徑、TNM分期(Ⅱ～Ⅳ期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(經(jīng)CT增強(qiáng)掃描可見病變四周存在低密度環(huán)狀強(qiáng)化淋巴結(jié)，或均勻強(qiáng)化淋巴結(jié))、分化程度(高分化、低分化)]、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)(CEA，取患者清晨空腹肘靜脈血5 ml，以4000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，采集血清用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定CEA水平)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 97例ESCC患者化療前后血清Bcl-2、Cox-2水平比較

97例ESCC患者化療6個(gè)周期Bcl-2、Cox-2水平較化療前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 97例ESCC患者化療前后血清Bcl-2、Cox-2水平比較

2.2 ESCC患者FP方案治療預(yù)后情況

97例ESCC患者32例預(yù)后不良，占32.99%(32/97)。

2.3 預(yù)后不良、預(yù)后良好ESCC患者相關(guān)基線資料比較

預(yù)后不良ESCC患者化療前CEA、Bcl-2、Cox-2均高于預(yù)后良好患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組間其他基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 預(yù)后不良、預(yù)后良好ESCC患者相關(guān)基線資料比較

2.4 各主要指標(biāo)與ESCC患者FP方案治療預(yù)后的關(guān)系回歸分析

將比較差異有意義的變量納入作為自變量，將ESCC患者FP方案治療預(yù)后情況作為因變量(1=預(yù)后不良，0=預(yù)后良好)，經(jīng)二元Logistic回歸分析后，將全部資料納入，建立多元回歸模型，結(jié)果顯示，化療前CEA、Bcl-2、Cox-2表達(dá)與ESCC患者FP方案治療預(yù)后有關(guān)，各指標(biāo)的過表達(dá)可能是ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子(OR>1，P<0.05)(表3)。

表3 各主要指標(biāo)與ESCC患者FP方案治療預(yù)后的關(guān)系回歸分析結(jié)果

2.5 血清Bcl-2、Cox-2水平預(yù)測(cè)ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值分析

繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)(圖1)，Bcl-2、Cox-2預(yù)測(cè)ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良的AUC分別為0.863、0.876，均有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，且在二者cut-off值分別取16.345 ng/l、74.895 mg/l時(shí)，預(yù)測(cè)價(jià)值最佳，見表4。

表4 血清Bcl-2、Cox-2水平預(yù)測(cè)ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值分析結(jié)果

圖1 血清Bcl-2、Cox-2水平預(yù)測(cè)ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值的ROC曲線圖

3 討論

FP作為中晚期食管癌常用化療方案，其中氟尿嘧啶是1種光譜抗腫瘤藥物，可抑制腫瘤細(xì)胞形成脫氧核糖核酸；順鉑是一種細(xì)胞周期非特異性藥物，可結(jié)合腫瘤DNA，抑制腫瘤DNA合成，兩種藥物結(jié)合應(yīng)用可取得較好干預(yù)效果[9]。但研究發(fā)現(xiàn)，仍有部分ESCC患者化療效果不佳，預(yù)后不良[10]。因此，需尋求ESCC患者預(yù)后有效評(píng)估指標(biāo)，以調(diào)整治療方案，降低預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)。

CEA是1種具有人類癌胚抗原特性的酸性蛋白，胚胎期主要在肝臟、胰腺等臟器中合成，通常情況下，CEA在機(jī)體低表達(dá)[11]。相關(guān)研究表明，CEA在結(jié)直腸癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中均呈高表達(dá)，且對(duì)各類消化系統(tǒng)惡性腫瘤均具有一定診斷價(jià)值[12]。馬雪芹等[13]研究顯示，食管癌患者CEA水平遠(yuǎn)高于健康人，且經(jīng)多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析發(fā)現(xiàn)，CEA是食管癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)合上述猜測(cè)，CEA可能也與ECSS患者FP方案治療效果有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良ESCC患者CEA水平高于預(yù)后良好患者，說明預(yù)后不良ESCC患者CEA表達(dá)較高；經(jīng)二元Logistic回歸分析后建立多元回歸模型，結(jié)果顯示，CEA過表達(dá)可能是ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子，證實(shí)上述猜測(cè)。但CEA帶來的影響不急Bcl-2、Cox-2，因此本研究并未將其作為主要分析指標(biāo)，未來還需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

Bcl-2是1種抗細(xì)胞凋亡癌基因，可抑制促凋亡蛋白生成，且可利用多個(gè)位點(diǎn)磷酸化調(diào)控細(xì)胞從G0期向S期轉(zhuǎn)化，從而拮抗腫瘤細(xì)胞凋亡，延長細(xì)胞存活時(shí)間[14]。相關(guān)研究顯示，Bcl-2高表達(dá)還可預(yù)防受損DNA凋亡，從而促進(jìn)新腫瘤細(xì)胞生成及轉(zhuǎn)化[15]。尹博等[16]研究顯示，食管癌患者血清Bcl-2水平高于健康人，且Bcl-2表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等特征均存在一定關(guān)系，可作為食管癌診治標(biāo)志物之一。另有研究顯示，Bcl-2表達(dá)與ESCC的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且Bcl-2可評(píng)估患者化療療效[17]。環(huán)氧化酶(Cox)是花生四烯酸合成pG限速酶，主要分為Cox-1、Cox-2兩種表達(dá)形式，其中Cox-2是pG誘導(dǎo)酶，可促進(jìn)pG生成[18]。通常情況下，Cox-2低表達(dá)，但在炎癥因子、癌基因等刺激下，Cox-2表達(dá)大幅升高，現(xiàn)已有研究證實(shí)Cox-2在鼻咽癌、胃癌等多種惡性腫瘤中均呈過表達(dá)[19]。動(dòng)物研究表明，Cox-2貫穿腫瘤整個(gè)發(fā)展過程，可利用抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤新血管生成等機(jī)制加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖，從而推進(jìn)疾病進(jìn)展，增加治療難度，進(jìn)而影響治療預(yù)后[20]。呂歆[21]研究顯示，Cox-2與ESCC患者手術(shù)療效有關(guān)，有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病灶的患者Cox-2表達(dá)高于原發(fā)病灶患者。結(jié)合上述Bcl-2、Cox-2機(jī)制猜測(cè)，二者可能與ESCC患者FP方案治療預(yù)后有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示， 97例ESCC患者化療6個(gè)周期Bcl-2、Cox-2水平均低于化療前，初步猜測(cè)Bcl-2、Cox-2可能參與了ESCC的發(fā)展；比較預(yù)后良好、預(yù)后不良ESCC患者相關(guān)基線資料后，經(jīng)二元Logistic回歸分析后建立多元回歸模型，結(jié)果顯示，Bcl-2、Cox-2過表達(dá)可能是ESCC患者FP方案治療預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子；進(jìn)一步繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，Bcl-2、Cox-2表達(dá)用于ESCC患者FP方案預(yù)后有較理想的價(jià)值，當(dāng)二者 cut-off值分別取16.345 ng/l、74.895 mg/l時(shí)，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值，且隨著二者水平的升高，預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)增加，證實(shí)猜測(cè)。上述結(jié)果也說明，在未來可在ESCC患者化療前檢測(cè)Bcl-2、Cox-2，針對(duì)Bcl-2、Cox-2表達(dá)異常上調(diào)的患者，提示可能存在化療無效高風(fēng)險(xiǎn)，可考慮在化療實(shí)施的基礎(chǔ)上為患者聯(lián)合放療、抗血管生成靶向藥物使用等，可能對(duì)提高FP方案整體化療效果、改善患者預(yù)后意義重大。

綜上所述，ESCC患者經(jīng)FP方案治療仍有部分患者預(yù)后不佳，可能與Bcl-2、Cox-2過表達(dá)有關(guān)，考慮未來可通過檢測(cè)患者化療前Bcl-2、Cox-2水平，輔助評(píng)估患者化療預(yù)后，指導(dǎo)早期合理治療方案的調(diào)整，可能對(duì)提高整體化療效果、促進(jìn)良性預(yù)后有積極意義。