生活飲用水檢驗中兩種微生物檢驗方法的比較分析

劉柳影（廣東省普寧市疾病預防控制中心,廣東 普寧 515300）

水是人體所需必不可少的一部分，維持人類正常生活所需。水的含量在人體中可達到70%以上，對人體起著重要作用，水調節著人體血液循環、新陳代謝以及酸堿平衡。對于地球上的其他生物而言，水也是不可或缺的[1]。由于水具有流動性，局部地區水源污染會導致其他地方的水污染，而水污染的擴散又影響著人們正常的生產生活。所以，水中微生物安全檢驗顯得十分重要。目前，我國飲用水的處理方法有過濾、沉淀、添加氯進行再處理[2]，這些處理方法可以有效減少水污染中的雜質和沉淀物，但是水中微生物含量還需要進一步檢驗。現對2019年1-12月收集的400份飲用水樣品和未處理的水樣采取回顧性分析，比較多管發酵檢驗和濾膜檢驗方法的檢驗結果，詳細報告如下。

1 一般資料和方法

1.1 一般資料 將2019年1-12月從不同水廠收集的生活飲用水和未處理水樣400份作為本次研究對象，每份飲用水各100mL，生活飲用水200份，未處理用水200份，分別用濾膜檢驗和多管發酵檢驗方法檢驗水樣細菌情況，對比兩組檢查方法檢查水樣中細菌情況和水樣合格率情況。

1.2 方法

1.2.1 濾膜檢驗 準備檢測用品：試劑（乳糖蛋白）、鑷子、過濾儀器、培養基（品紅亞硫酸鈉）。將待檢測生活飲用水放入到微孔濾膜中進行過濾，微孔濾膜孔徑0.45微米，再將過濾完畢的濾膜紙放置在含有乳糖的培養基上進行培養，培養溫度37℃，培養時間2d。具體操作方法：首先，將生活飲用水樣本進行殺菌處理，用無菌鑷子將過濾完畢的濾膜放置在裝有蒸餾水的燒杯中，蒸餾水煮至沸騰，進行3次沸煮，每次時間15min，將前兩次煮沸后的水及時清理，避免留下殘留物，保證被測樣本無其他雜質干擾。其次，樣本過濾，用無菌鑷子夾住濾膜放置于儀器的無菌濾床上，濾膜粗糙的一面放置在上方，加固過濾器，將100mL生活飲用水放入過濾器，打開閘門，氣壓0.05設定，進行抽濾。最后，將過濾完畢的濾膜取出，無菌鑷子夾住濾膜邊緣，保證被測菌落的完整性，放置入含有品紅硫酸鈉的培養皿中，濾膜平整放入培養皿中，避免氣泡產生，培養皿倒置放入設定恒溫37℃的培養箱中，培養時間2d左右。檢驗完生活飲用水水樣后，再對未處理的水樣進行濾膜檢驗，按照上述步驟進行。

1.2.2 多管發酵檢驗 準備檢測用品：培養皿、天平、載玻片、顯微鏡、導管、分度吸管。多管發酵檢驗原理，大腸桿菌經過放置發酵產生酸和氣體，按照其原理進行檢驗試驗。具體操作如下，取1mL水樣分別放于10mL的單料乳糖蛋白胨和9mL的生理鹽水中，充分混勻后各自取出1mL分別放入5份稀釋濃度不同的水樣中。再從不同濃度的水樣中取出1mL分別接種到雙料培養基上放入培養箱，溫度35℃-37℃，時間2天。判定標準，培養過程中，如果未出現酸和氣體，則樣品中大腸桿菌為陰性；如果產生酸和氣體，則大腸桿菌為陽性，還需將樣品再檢驗。將樣品放置在伊紅美藍瓊脂板上放入培養箱，溫度35℃-37℃，時間在1d內，不低于18h，定時觀察瓊脂板情況，將菌落完整的瓊脂板進行革蘭氏染色，用顯微鏡觀察瓊脂板。生活用水水樣檢驗完畢后，再對未處理水樣進行多管發酵檢驗，操作步驟如上所述。

1.2.3 微生物檢測評價標準 我國現行飲用水標準規定細菌總數在100個/mL內，因為現在使用的日常用水往往經過物理處理和化學處理后再使用，但是水中還是殘存一定數量的細菌菌落數，存在飲用水微生物不達標或者水質較渾濁的現象時，水中大腸桿菌數量不符合既定標準。此外，飲用水處理過程中，還存在其他原因導致處理后的水再次遭受污染，如供水管管壁破裂，或者供水管使用時間較長導致管壁微生物滋生等。所以，對飲用水做好檢驗和抽查就顯得非常重要了。

1.3 觀察指標 根據國家飲用水標準，每毫升水細菌總數不超過100個，檢測指標有大腸桿菌、雜菌、耐熱大腸桿菌、大腸埃希氏菌，計算出檢測樣本結果，比較兩組水樣的合格率。

1.4 統計學處理 研究數據運用SPSS20.0軟件進行處理，計數資料以n(%)表示，行χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組水樣檢驗合格情況比較 對200份生活飲用水檢測中，多管發酵檢驗水樣總合格195份，合格率97.5%，而濾膜檢驗水樣總合格169份，合格率84.5%，多管發酵檢驗合格率顯著高于濾膜檢驗合格率（P＜0.05），具有統計學意義，見表1。

表1 兩組水樣檢驗合格率結果

2.2 兩組水樣中細菌指數比較 在對未處理水樣的檢測中，多管發酵檢驗大腸桿菌、雜菌、耐熱大腸菌群、大腸埃希菌檢出率均顯著高于濾膜檢驗檢出率（P＜0.05），具有統計學意義，見表2。

表2 兩組水樣中細菌檢出率結果

3 討論

生活用水事關民生，通過檢驗生活用水中的微生物，可判斷生活用水合格情況[3-4]，保障用水安全。通過實驗中回顧性方法研究，在200份未處理被測樣品水中，多管發酵檢驗檢出大腸桿菌174份、雜菌168份、耐熱大腸桿菌182份、大腸埃希菌190份，檢出率93.5%；而濾膜檢驗檢出大腸桿菌148份、雜菌144份、耐熱大腸桿菌158份、大腸埃希菌168份，檢出率78%，多管發酵檢驗細菌菌落檢出率顯著高于濾膜檢驗（P＜0.05），有統計學意義。濾膜檢驗出廠水合格水樣69份，管網末梢水合格水樣70份，二次供水合格水樣30份，總合格水樣份數169份，合格率84.5%；而多管發酵檢驗出廠水合格水樣78份，管網末梢水合格水樣79份，二次供水合格水樣38分，總合格水樣195份，合格率97.5%。多管發酵檢驗總合格率顯著高于濾膜檢驗（P＜0.05），有統計學意義，對比兩種方法的檢驗原理，多管發酵檢驗將樣本水樣稀釋后進行菌落培養，按照不同的稀釋濃度分別進行菌落觀察，觀察各個稀釋度菌落的單位體積數[5]。而濾膜檢驗將樣品水樣經過過濾器過濾，把濾膜放置于培養基上進行培養，觀察培養基上濾膜大腸桿菌單位體積[6]。兩種方法各有優點，多管發酵檢驗較濾膜檢驗水樣合格率較高，而濾膜檢驗操作簡便，檢驗結果較快，兩種方法均可適用。不過，對比檢驗結果，未處理的水樣檢測中，多管發酵檢驗細菌檢出率高于濾膜檢驗，而生活飲用水檢測中，多管發酵檢驗的水質合格率高于濾膜檢驗水質合格率。說明多管發酵檢驗有較高的靈敏度，能夠準確檢驗出細菌菌落，經過多管發酵檢驗的水樣，其合格率較濾膜檢驗較高。

生活中存在各種細菌，這些細菌以生活用水為載體，人們食用這些細菌含量超標的飲用水容易導致各種疾病滋生。由于細菌引起的各種疾病成為人們研究的重點，水資源的污染，嚴重影響人們的生命健康。從而加強水質檢驗尤為重要，涉及公共衛生安全，國家相關部門應加大對水質檢驗的抽樣檢查[7]，環保部門加大對水源污染的監管，基層加大對水資源保護的宣傳和保護，將水源保護放在首位，減少水源垃圾污染、供水管道破壞污染水源等。全社會共同營造保護水資源，愛護水資源，減少水污染的意識，相關部門加大對生活用水相關知識的科普，定期抽查檢驗，保障群眾用水安全。

綜上所述，在水樣檢驗中，多管發酵檢驗較濾膜檢驗更好[8-9]，具有較高的細菌檢出率，值得推廣應用。