結(jié)核分枝桿菌核糖體蛋白丙氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶過表達菌株的構(gòu)建及分析

陳潤，白嘉誠，狄玉昌，錢嘉寧，畢靜，張雪蓮，2

1. 復(fù)旦大學生命科學學院遺傳工程國家重點實驗室，上海 200433； 2. 復(fù)旦大學上海工業(yè)菌株工程技術(shù)研究中心，上海 200433

結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，M.tb)是結(jié)核病的病原菌，具有潛伏感染率高和廣泛耐藥等特點，導(dǎo)致結(jié)核病治療成為世界性難題[1]。此外，從新的角度揭示結(jié)核分枝桿菌致病機制也一直是研究難點。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌重要毒力因子異檸檬酸裂解酶(isocitrate lyase，ICL)的酶活性受其第322位和第392位賴氨酸的乙?；秸{(diào)控，進而影響結(jié)核分枝桿菌的碳源代謝[2]，而潛伏感染相關(guān)因子DosR的第182位賴氨酸乙?；烧{(diào)控其結(jié)合DNA的能力并進一步調(diào)控下游靶基因的轉(zhuǎn)錄[3]，提示乙?；鹊鞍追g后修飾在病原菌致病中發(fā)揮重要作用。

結(jié)核分枝桿菌基因組中有20多個具有編碼乙酰轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域的基因，其蛋白乙?；揎椃譃镹-ε-乙酰化修飾和N-α-乙?；揎?，但后者在原核生物中研究較少。核糖體蛋白丙氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶 (ribosomal-protein-alanine acetyltransferase，RimI)屬于GCN5相關(guān)N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(GCN5-relatedN-acetyltransferase，GNAT)家族，攜帶保守的Q/RxxGxG/Ac CoA結(jié)合基序，先后在鼠傷寒沙門菌、大腸埃希菌(Escherichiacoli，E.coli)和結(jié)核分枝桿菌中被定性為N-α-乙酰轉(zhuǎn)移酶[4]。RimI的編碼基因Rv3420c、GroEL1的編碼基因Rv3417c和GroES的編碼基因Rv3418c同位于結(jié)核分枝桿菌alr-groEL1操縱子，GroEL1和GroES是與結(jié)核分枝桿菌毒力密切相關(guān)的重要伴侶蛋白[5]，但RimI的生物學特性及其與結(jié)核分枝桿菌致病性的相關(guān)研究尚未見報道。

為探索RimI的生物學特性，本研究利用穿梭質(zhì)粒pMV261在恥垢分枝桿菌(Mycobacteriumsmegmatis，M.sm)中過表達結(jié)核分……