DNA倍體定量分析、TCT及HR-HPV檢測在宮頸上皮病變中的應用評估*

盧 葵，徐艷超，姚俊霞

(復旦大學附屬中山醫(yī)院青浦分院病理科，上海 201799)

宮頸上皮病變是常見的婦科疾病，宮頸癌是宮頸病變最嚴重的情況，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌，且呈逐年上升趨勢。有調(diào)查顯示[1]，子宮頸癌呈現(xiàn)發(fā)病年齡日趨年輕化的新特點。但宮頸癌前病變到宮頸癌有較長的過程，因此，早期篩查能降低宮頸癌的發(fā)病率及死亡率。目前DNA倍體定量分析作為一種新的光電自動檢測技術(shù)在宮頸癌篩查中具有優(yōu)越性，與一般細胞形態(tài)學的檢測相比，更加敏感、客觀。本研究旨在探討DNA倍體定量分析單獨或聯(lián)合液基薄層細胞學(thinprep cytologic test，TCT)、高危型人乳頭瘤病毒(high risk human papillomavirus，HR-HPV)檢測在宮頸病變診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月至2020年1月于醫(yī)院門診或住院行宮頸病變篩查并行陰道鏡活檢的婦女資料，選擇608例有DNA倍體分析、TCT、HR-HPV檢測結(jié)果的病例為研究對象，年齡22～70歲，平均(42.3±7.3)歲，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 薄層液基細胞學

采集標本前24h內(nèi)禁止性生活、陰道鏡檢查、陰道灌洗或上藥，采用特制的頸管刷在子宮頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)5圈，收集宮頸口及宮頸管的脫落上皮細胞，并將收集到標本的毛刷放入保存瓶中，在振蕩儀上混勻，將混勻的標本緩慢倒入盛有約4mL清潔液的離心管，使用1 000g離心力的離心機離心10min，快速棄除上清液保留試管底部上皮細胞團，再加入適量細胞基液，充分混勻成細胞懸液，用微量加樣器吸50mL細胞懸液，加到清潔載玻片上涂片，制成直徑15mm 的均勻薄層細胞涂片。自然干燥或恒溫箱烘干，95%乙醇固定，巴氏染色，封片。判讀方法采用2014版TBS診斷報告系統(tǒng)，TCT結(jié)果為ASCUS及以上為陽性。

1.2.2 DNA倍體定量分析

制片同上，采用Feulgen染色、封片。經(jīng)Motisavant全自動細胞圖像分析系統(tǒng)(麥克奧迪醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司生產(chǎn))，進行宮頸細胞DNA倍體分析，每張片上所有細胞核進行掃描測定，并進行細胞核積分光密度值(IOD)及核面積的測定、DNA指數(shù)(DNA index，DI)分析，DNA倍體分析異常是指發(fā)現(xiàn)DI值≥2.5的細胞。

1.2.3 HPV檢測

使用安徽同科生物科技公司的HPV分型檢測試劑盒檢測(國械注準20183400412)，采用PCR多色熒光法，可檢測15種高危HPV亞型，包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。檢測結(jié)果只要任一亞型陽性即作為HPV陽性。

1.2.4 陰道鏡活檢及病理診斷

陰道鏡檢查依據(jù)改良Reid評分標準進行評分[2]，0分在3、6、9、12點活檢，1分及以上者，在陽性區(qū)活檢，病理診斷標準依據(jù)第四版《女性生殖器官腫瘤分類》(2014)的分類診斷原則[3]，分為慢性宮頸炎、低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)、宮頸癌。

1.3 觀察指標

以病理診斷為標準，分別計算DNA倍體定量分析、TCT、HR-HPV檢測的靈敏度、特異度。靈敏度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%，特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用醫(yī)學統(tǒng)計軟件SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 宮頸組織活檢結(jié)果

在608例活檢組織中，病理診斷為正常或慢性宮頸炎183例(30.1%)；LSIL 354例(58.2%)；HSIL 46例(7.6%)；宮頸癌25例(4.1%)。

2.2 DNA倍體定量分析、TCT和HR-HPV檢測在宮頸LSIL病變及以上的診斷結(jié)果

在608例活檢結(jié)果中，LSIL及以上病變共425例(69.9%)，TCT診斷為ASCUS及以上為385例(63.3%)，DNA倍體定量分析陽性412例(67.8%)，HR-HPV陽性434例(71.4%)。見表1。

表1 DNA倍體定量分析、TCT和HR-HPV檢測與LSIL病變及以上的結(jié)果

2.3 DNA倍體定量分析、TCT和HR-HPV檢測對LSIL以上宮頸病變的診斷價值比較

DNA倍體定量分析診斷宮頸LSIL及以上病變的靈敏度是85.8%(365/425)，特異度74.3%(136/183)，TCT檢測的靈敏度是73.8%(314/425)，特異度為61.2%(112/183)，HR-HPV檢測的靈敏度是83.7%(356/425)，特異度57.3%(105/183)。根據(jù)統(tǒng)計分析，DNA倍體定量分析靈敏度比TCT高，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與HR-HPV相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，特異度比TCT、HR-HPV檢測都高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而HR-HPV檢測靈敏度比TCT高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，兩者檢測特異度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.4 DNA倍體分析聯(lián)合其他檢測對LSIL以上宮頸病變的診斷價值評估

DNA倍體分析+TCT、DNA倍體分析+ HR-HPV檢測、TCT+ HR-HPV檢測、DNA倍體分析+TCT+ HR-HPV檢測在診斷LSIL以上宮頸病變的靈敏度分別是90.5%(385/425)、91.3%(388/425)、87.7%(373/425)、92.4%(393/425)，特異度分別是62.8%(115/183)、63.4%(116/183)、60.1%(110/183)、65.6%(120/183)。DNA倍體分析聯(lián)合TCT或HR-HPV檢測在靈敏度上與DNA倍體分析+TCT+ HR-HPV聯(lián)合檢測差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，特異度上與DNA倍體分析+TCT+ HR-HPV聯(lián)合檢測差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，TCT+ HR-HPV檢測在靈敏度上與DNA倍體分析+TCT+HR-HPV聯(lián)合檢測差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，特異度上差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

宮頸上皮內(nèi)病變的常用篩查方法有TCT、HR-HPV檢測、DNA倍體定量分析、陰道鏡、宮頸活檢等。TCT檢查原理基于細胞形態(tài)改變，具有取材方便、無創(chuàng)等特點，但靈敏度及特異度受制片及閱片技術(shù)等影響大，故常與其他檢測方法結(jié)合。我們研究結(jié)果也提示TCT的靈敏度低于DNA倍體分析技術(shù)及HR-HPV檢測的靈敏度，特異度低于DNA倍體分析技術(shù)。HPV感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展的明確病因，目前研究認為高危型HPV的持續(xù)感染與宮頸病變及癌變有密切關(guān)聯(lián)，高危型HPV檢測具有高靈敏度，被世界衛(wèi)生組織推薦用于宮頸癌的篩查。我們的研究提示HR-HPV檢測有較高的靈敏度，但特異度較低只有57.3%，并且HR-HPV檢測只能提示目前狀態(tài)，無法鑒別一過性或持續(xù)性感染，也無法鑒別是否為致病性感染[4]。這時可以考慮將DNA倍體定量分析作為HR-HPV陽性患者的進一步篩查手段[5]。

DNA倍體定量分析是通過對細胞核內(nèi) DNA含量或染色體倍數(shù)測定來判斷細胞生理狀態(tài)和病理改變，在細胞大體形態(tài)無明顯改變即可發(fā)現(xiàn)病變細胞，因此，可對宮頸癌及癌前病變做出早期診斷[6]。我們的研究提示DNA倍體定量分析在診斷宮頸上皮內(nèi)病變中靈敏度85.5%、特異度74.3%，與TCT或HR-HPV檢測聯(lián)合，靈敏度可以達到90%以上，但特異度無改進，可能因該方法在臨床應用時干擾因素較多，如HPV感染、維生素B12缺乏、放射線干擾、激素紊亂的老年婦女可出現(xiàn)異倍體細胞，導致其特異性降低[7]。盡管如此，研究多傾向于DNA倍體定量分析作為其他篩查的必要補充[8]。

綜上，DNA倍體定量分析在宮頸上皮內(nèi)病變的篩查有較高的臨床應用價值，如果聯(lián)合TCT或HR-HPV檢測能提高靈敏度，減少漏診率，受各種條件影響，在臨床工作需選擇合適的篩選方法，另一方面需要不斷總結(jié)經(jīng)驗，提高對宮頸上皮內(nèi)病變的診斷水平。