紫外及其聯(lián)合褪黑素處理對(duì)發(fā)芽大豆異黃酮富集影響

◎ 古明朗，田 欣，程語(yǔ)軒

(揚(yáng)州大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225127)

大豆（Glycine maxMerr.）是我國(guó)的四大糧油作物之一。目前在大豆中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有12種異黃酮，大豆發(fā)芽后異黃酮的含量顯著提升[1]，表明發(fā)芽大豆適宜富集異黃酮。大豆異黃酮可以預(yù)防更年期綜合癥[2]，減輕骨質(zhì)疏松癥和某些癌癥[3]，受到廣泛關(guān)注[4]。

大豆發(fā)芽期間受到紫外脅迫異黃酮的含量會(huì)顯著增加[5]。但大豆是敏感型作物，其在經(jīng)紫外脅迫后生長(zhǎng)和生物量均受到嚴(yán)重抑制，使得產(chǎn)量大大降低。為提高大豆的生物量及黃酮含量，本研究通過(guò)褪黑素緩解紫外脅迫，研究紫外輻射時(shí)長(zhǎng)、褪黑素濃度以及發(fā)芽時(shí)間對(duì)發(fā)芽大豆生長(zhǎng)和富集異黃酮的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大豆籽粒購(gòu)于2018年，產(chǎn)自東北吉林省，保存于4 ℃。褪黑素購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，其他試劑均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

752N紫外分光光度計(jì)（蘇州嘉仕德科學(xué)儀器有限公司）；發(fā)芽機(jī)（永康市貝欣五金電器廠）；PJX-250D光照發(fā)芽箱（金壇市水北科普實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 大豆發(fā)芽處理

選用100 g優(yōu)質(zhì)大豆種子。經(jīng)去離子水沖洗后于1%（v/v）次氯酸鈉水溶液消毒15 min，之后用去離子水沖洗至pH中性，于30 ℃的去離子水中浸泡6 h；浸泡后的大豆于30 ℃發(fā)芽，進(jìn)行如下處理。①紫外輻射時(shí)長(zhǎng)的影響。發(fā)芽溫度30 ℃，發(fā)芽時(shí)間4 d，25 μmol·L-1褪黑素，紫外輻射時(shí)長(zhǎng)為3～15 h·d-1。②褪黑素濃度的影響。發(fā)芽溫度30 ℃，發(fā)芽時(shí)間4 d，9 h·d-1紫外輻射時(shí)長(zhǎng)，褪黑素濃度為10～70 μmol·L-1。③發(fā)芽時(shí)間的影響。發(fā)芽溫度30 ℃，發(fā)芽時(shí)間為2～6 d，紫外輻射9 h·d-1和25 μmol·L-1褪黑素。每隔12 h噴施培養(yǎng)液。各處理發(fā)芽結(jié)束后分別測(cè)定大豆芽長(zhǎng)及異黃酮含量。

1.3.2 異黃酮含量的測(cè)定

采用紫外分光光度法測(cè)定[6]，以染料木素為標(biāo)準(zhǔn)品，用80%的乙醇配制不同濃度的染料木素溶液，測(cè)定在260 nm下的吸光值，以異黃酮濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為y=0.130 5x+0.009 3，R2=0.999 4。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同紫外輻射時(shí)長(zhǎng)下發(fā)芽大豆形態(tài)和異黃酮含量變化

由圖1可知，與正常發(fā)芽的大豆比較，紫外脅迫下大豆生長(zhǎng)受到抑制，在3～15 h·d-1時(shí)，輻射時(shí)間越長(zhǎng)，大豆受抑制越嚴(yán)重。圖2顯示，紫外輻射3～9 h·d-1時(shí)，異黃酮濃度隨著紫外輻射時(shí)長(zhǎng)的增加而顯著上升（P＜0.05），其后異黃酮含量下降，表明紫外輻射9 h·d-1有利于富集大豆異黃酮。

圖1 紫外處理下大豆形態(tài)圖

圖2 紫外輻射下異黃酮含量變化圖

2.2 不同褪黑素濃度處理下發(fā)芽大豆形態(tài)和異黃酮含量變化

由圖3可知，大豆的生長(zhǎng)抑制隨褪黑素濃度的上升逐漸解除，褪黑素濃度大于55 μmol·L-1后芽長(zhǎng)超過(guò)對(duì)照組。圖4顯示，異黃酮含量隨褪黑素濃度增加而顯著上升（P＜0.05），濃度高于25 μmol·L-1后異黃酮含量降低。經(jīng)25 μmol·L-1褪黑素處理的大豆中異黃酮含量最高，是對(duì)照的1.41倍。

圖3 不同濃度褪黑素處理下發(fā)芽大豆形態(tài)圖

圖4 不同濃度褪黑素處理下異黃酮含量變化圖

2.3 發(fā)芽天數(shù)對(duì)發(fā)芽大豆異黃酮含量的影響

由圖5可知，發(fā)芽2～4 d時(shí)，發(fā)芽大豆中異黃酮含量顯著增加，4 d后其異黃酮含量無(wú)顯著性變化，異黃酮含量最高為766.23 μg·g-1。

圖5 發(fā)芽天數(shù)對(duì)發(fā)芽大豆異黃酮含量的影響圖

3 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，紫外輻射9 h·d-1、褪黑素25 μmol·L-1、培養(yǎng)天數(shù)4 d是發(fā)芽大豆富集異黃酮的最佳條件。