變異鏈球菌hit基因缺陷菌株的構建

賴揚帆，王鵬，喬里，劉中靜，葉朝陽，梁燕

1.貴州醫科大學附屬口腔醫院牙體牙髓科，貴州 貴陽（550004）；2.貴州醫科大學附屬醫院臨床醫學研究中心，貴州 貴陽（550004）

作為人類口腔中的主要致齲菌，變異鏈球菌大量繁殖形成牙菌斑生物膜附著在牙齒表面，其代謝形成局部酸環境長期作用于牙齒導致其脫礦，進而發生齲病［1］。目前對于變異鏈球菌基因功能研究仍主要集中在與其致齲性相關的生物膜形成、產酸耐酸“毒力因子”及其調控基因方面，如直接毒力侵染因子糖基轉移酶（glucosyltransferases，GTFs）和葡聚糖結合蛋白（glucna-binding proteins，GBPs）。SMU.833糖基轉移酶通過影響葡聚糖合成進而影響生物膜形成［2］，SMU.940則調控葡聚糖結合蛋白C表達來影響生物膜形成［3-4］。變異鏈球菌胞壁（被膜）相關基因不僅可調控胞壁生物合成、細菌生長、分裂繁殖，也間接與致齲生物膜形成、產酸耐酸密切相關，如編碼鼠李糖-葡萄糖胞壁多糖合成酶（rhamnose-glucose polysaccharide G，rgpG），編碼生物膜調控蛋白（biofilm regulatory protein A，brpA）和編碼青霉素結合蛋白5合成抑制蛋白（penicillin-sensitive repressor protein，psr）基因，當三者同時突變時，與標準株相比，三缺陷菌（rgpG/brpA/psr）不僅顯著降低生長速率，還加劇菌體分裂“紊亂”形態（“短桿狀”菌體“腫脹”變大，出現多重非對稱中間隔），嚴重影響生物膜形成［5］。

變異鏈球菌基因組中，hit基因編碼HIT家族蛋白SMU.412c，且該基因與brpA（lytR）基因鄰近［6］。同時，生物信息學分析表明，HIT家族蛋白廣泛存在于原核生物、真核生物、哺乳類動物，而且高度保守，具有重要生理功能［7］。hit基因是否可以調控變異鏈球菌增殖及生長周期尚不清楚。本研究利……