ELISPOT診斷結核性胸膜炎的臨床價值

吳佳南，劉 洋

（黑龍江省佳木斯市中心醫院 檢驗科，黑龍江 佳木斯 154002）

結核性胸膜炎屬于肺外結核病，是結核桿菌以及其自溶產物或者代謝產物進入到機體的胸膜腔，所引起的炎癥[1]。大部分的結核性胸膜炎屬于急性病，主要表現為結核的全身中毒癥狀或者胸腔積液所致的局部癥狀。可見，給予結核性胸膜炎患者科學有效的診斷十分必要，對臨床治療提供重要參考。目前臨床診斷該病的主要方法仍是通過胸膜活檢，這也是疾病診斷的金標準，但是其具有一定弊端，如該種方式是有創操作，具有一定風險，故尋求一種靈敏度較高的替代法成為臨床研究重點[2]。酶聯免疫斑點檢測（enzyme linked immunospot assay，ELISPOT） 具有快速、靈敏等特點，目前被臨床廣泛應用，但目前對其研究并不多見。鑒于此，本研究旨在探討ELISPOT診斷結核性胸膜炎的臨床價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年8月-2019年8月本院收治的74例疑似為結核性胸膜炎患者為研究對象，其中男40 例，女34 例；年齡21 ～65 歲，平均年齡（42.56±3.65） 歲；體 質 量45 ～69kg，平 均（56.54±2.51） kg。本研究經醫學倫理委員會批準。納入對象：所有患者均符合《肺結核門診診療規范（2012年版）》[3]中診斷標準；患者及家屬知情并簽署知情同意書。排除標準：合并嚴重心、肝、腎等重要臟器病變者；合并惡性腫瘤者。所有患者均經經皮穿刺胸膜活檢檢查。

1.2 方法

⑴標本采集：采集所有患者空腹靜脈血4～5mL，通過肝素納抗凝，分離血清，及時送檢；并進行經皮胸腔穿刺，留取新鮮胸腔積液100mL，按照要求送檢。⑵試劑及方法：腺苷脫氨酶（adenosine deaminase，ADA） 檢測通過酶法的連續監測法，采用Faith-3000 型的生化儀，采用PBT-X2 型生物芯片閱讀儀及試劑，嚴格按照操作說明書進行檢測，結果由芯片閱讀儀設定的參數自動判別。陽性判斷標準：血清ADA≥25U/L。ELISPOT：采用T-Spot-TB試劑盒，采用ELISPOT計數儀進行斑點閱讀分析結果，每個斑點代表一個活性淋巴細胞，當任意一個檢測孔達到下面標準則判定為陽性。①空白對照孔斑點數＜5，檢測孔的斑點數減空白對照孔≥6；②或空白對照孔≥6，檢測孔斑點數＞空白對照孔的2 倍。

1.3 評價指標

統計2 種檢查方式的診斷結果，以經皮穿刺胸膜活檢為金標準，比較兩種檢查手段診斷結核性胸膜炎的價值，并分析其與胸膜活檢結果的一致性。

1.4 統計學方法

采用SPSS20.0 統計學軟件，計數資料以百分數和例數表示，采用χ2檢驗；一致性采用Kappa檢驗（Kappa＞0.75 表明一致性極好，0.4～0.75 表明一致性較為理想，＜0.4 表明一致性差），以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 經皮穿刺胸膜活檢檢查結果

74 例疑似為結核性胸膜炎患者中，經經皮穿刺胸膜活檢檢查確診為結核性胸膜炎61 例，占82.43%（61/74）。其中細菌性肺炎23 例，類肺炎性胸腔積液17 例，惡性胸腔積液例15 例，其他6 例。

2.2 ADA，ELISPOT 檢查與活檢檢查結果對比

依據經皮穿刺胸膜活檢檢查結果，ELISPOT檢查出60 例陽性患者，陽性檢出率為98.36%；ADA 檢查出53 例陽性患者，陽性檢出率為86.89%。ELISPOT 診斷的陽性檢出率高于ADA 檢查，差異有統計學意義（χ2＝4.319，P＝0.015）。ELISPOT 檢查與經皮穿刺胸膜活檢檢查結果具有極好的一致性（Kappa＝0.864），ADA 檢查與經皮穿刺胸膜活檢檢查結果具有理想的一致性（Kappa＝0.549），見表1、2。

表1 ADA 檢查與活檢檢查結果對比（n）

表2 ELISPOT 檢查與活檢檢查結果對比（n）

2.3 ADA，ELISPOT 對結核性胸膜炎的診斷價值

ELISPOT 檢查的靈敏度、準確度、陰性預測值均高于ADA 檢查，差異有統計學意義（P＜0.05）；且特異度、陽性預測值略高于ADA 檢查，但差異不顯著（P＞0.05），見表3。

表3 ADA、ELISPOT 對結核性胸膜炎的診斷價值［n（%）］

3 討論

目前臨床診斷結核性胸膜炎的金標準是胸膜活檢或者細菌培養，雖然具有較高的診斷準確率，但均有一定弊端，如胸膜活檢具有較大創傷，在臨床應用中具有一定限制；通過培養結核分枝桿菌，陽性率較低[4]。因此，尋求一種快速且敏感性高的診斷指標對診斷結核性胸膜炎至關重要。

ADA 是一種嘌呤代謝中的重要的多肽酶，其在胸腺、脾等組織中具有較高的活性，且廣泛存在于人體全身各組織細胞中，特別是在T 淋巴細胞中具有較高的含量[5]。臨床研究結果顯示，ADA活性增高與T 淋巴細胞的增殖以及分化具有十分密切的關系。當患者患有結核性胸膜炎時，T 細胞受到抗原的刺激，導致ADA 在胸腔積液中的含量升高，故ADA 可作為診斷結核性胸膜炎診斷的重要輔助方式之一[6]。但其診斷具有一定局限性，如血清中的ADA 具有較低活性，單獨使用血清ADA檢測診斷結核性胸膜炎靈敏度及特異度較低，并無太大診斷價值。ELISPOT 是一種免疫細胞功能的新型方法，具有靈敏度高、穩定性高等優點，其是通過檢測經抗原刺激后分泌細胞因子的效應T淋巴細胞的數量進行診斷，目前已被廣泛應用于醫學研究中[7]。ELISPOT 具有較強的免疫原性以及免疫反應性，這種保護性效果可以維持在整個疾病過程中，且患者在康復之后，也可持續較長一段時間[8]。本研究結果顯示，ELISPOT 診斷的陽性檢出率高于ADA 檢查，且其診斷靈敏度、特異度、準確度、陽性預測值以及陰性預測值均優于ADA 檢查；此外，ELISPOT 檢查與經皮穿刺胸膜活檢檢查結果具有極好的一致性，表明ELISPOT方法在結核性胸膜炎診斷中具有更高的診斷價值，可作為診斷該病的重要指標，且與胸膜活檢具有極好的一致性，可應用到臨床診斷中。有學者表示，ADA 與ELISPOT 聯合檢測可進一步提高結核性胸膜炎的診斷價值，但該結論仍待證實。

綜上所述，ELISPOT 診斷結核性胸膜炎具有較高的敏感性，診斷價值高，與胸膜活檢具有極好的一致性，可作為早期診斷結核性胸膜炎的重要手段。