禿瘡花外用噴劑制劑的篩選試驗

張莉敏，常攀峰，馬志宏，孫春香，茍想珍，黨 巖

(甘肅省畜牧獸醫研究所，甘肅 平涼 744000)

禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)是罌粟科(Papaveraceae)禿瘡花屬(Dicranostigma) 的植物，在我國主要分布于甘肅、西藏、青海、陜西和四川等地。據文獻記載：味苦、澀、性寒，涼，有小毒；有清熱解毒、消腫止痛、殺蟲、治療扁桃體炎、結核、疥癬、外傷、羊口瘡等疾病。從上世紀80年代開始，我國許多研究者對禿瘡花的化學成分和禿瘡花的藥理作用進行了研究。1980年李鎮從禿瘡花中分離出異紫堇堿；1981年暢行若等從禿瘡花中提取了4種結晶，經鑒定分別為：異紫堇堿、原阿片堿、紫堇堿、二十九碳醇；盧賢昭等研究表明，禿瘡花對結核病有良好的治愈作用，治愈療效79.5%以上. 陳正山、龔艷妮等的研究證明禿瘡花對動物免疫系統和腫瘤均有作用。

以甘肅隴東特色藥用植物禿瘡花(俗稱紅荗草，勒馬回)為藥材，研制具有抗菌消炎及抗病毒的獸醫臨床制劑，項目以禿瘡花制劑生物學功能為指標，用物理化學提純法、細菌計數法和正交試驗設計等對制劑進行篩選，并開展了禿瘡花制劑工藝、藥效學、藥物代謝動力學以及化學成分的研究工作和臨床應用試驗。本文僅就禿瘡花外用噴劑的篩選實驗進行論述，其它實驗部分另文發表。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 電熱培養箱 、電子分析天平等使用甘肅省畜牧獸醫研究所中心實驗室儀器。

1.1.2 菌株 副傷寒沙門氏菌為甘肅省畜牧獸醫研究所實驗室保存的標準菌株 。

1.1.3 藥材 禿瘡花采自于甘肅省平涼市，由中國科學院蘭州化學物理研究所天然藥物實驗室鑒定；連翹、魚腥草、黃芩、黃柏、金銀花、大青葉、甘草和蒼術采購于甘肅省醫藥公司，由中國科學院蘭州化學物理研究所天然藥物實驗室鑒定。

1.1.4 實驗試劑 牛肉膏 、葡萄糖、蛋白胨、磷酸氫二鉀 、瓊脂 、酚紅 、N aO H 、N aCl購自于上海生工 ，其余試劑均為國產或進口分析純 ；禿瘡花唇膚康噴劑B液由甘肅省畜牧獸醫研究所制備。

1.2 方法

1.2.1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗 以正交實驗表L16(45)為水平因素組合進行不同制劑配制，將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養肉湯中，37℃或24℃培養24 h后，分別用平皿計數法進行計數配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養肉湯按1∶1的比例制備的培養肉湯中,37℃培養16 h后用平皿計數法進行計數。最后計算抑制率。

1.2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術交互作用篩選試驗 在連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗的基礎上，以連翹50 g、魚腥草25 g、黃芩37.5 g和黃柏37.5 g為基礎藥，用上面的正交實驗表L16(45)為水平因素組合進行不同制劑配制，將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養肉湯中，37℃或24℃培養24 h后，分別用平皿計數法進行計數配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養肉湯按1∶1的比例制備的培養肉湯中,37℃培養16 h后用平皿計數法進行計數。最后計算抑制率。

1.2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗 以禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結果表中的配方，進行不同配方制劑配制，將不同配方的藥物配成400 mL的水溶液用于實驗。將實驗用的副傷寒沙門氏菌株進行純化后，接種于THB營養肉湯中，37℃或24℃培養24 h后，分別用平皿計數法進行計數配制成10 000 cfu/mL的菌株懸液；將菌株懸液100 μL,分別加入6 mL各制劑與THB營養肉湯按1∶1的比例制備的培養肉湯中,37℃培養16h后用平皿計數法進行計數。最后計算抑制率。

2 結果

2.1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用篩選試驗結果

從連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗結果可以看出：從因素上講，連翹>黃芩>黃柏>魚腥草；從水平上講，連翹的第4水平最好，黃芩的第2水平最好，黃柏的第3水平最好，魚腥草第3水平最好。根據正交實驗的原則，我們選擇連翹50g、魚腥草25g、黃芩37.5g和黃柏37.5g為進一步進行禿瘡花唇膚康噴劑A液篩選的比例基礎。

表1 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用水平因素表 g

表2 連翹、魚腥草、黃芩和黃柏交互作用實驗結果表

2.2 金銀花、大青葉、甘草和蒼術交互作用篩選試驗結果

從金銀花復方中藥外用制劑中的金銀花、板藍根、甘草和蒼術交互作用實驗結果可以看出：從因素上講，金銀花>大青葉>甘草>蒼術；從水平上講，金銀花的第4水平最好，大青葉的第4水平最好，甘草的第3水平最好，蒼術第3水平最好但與第2水平差別不大。根據正交實驗的原則，結合連翹、魚腥草、黃芩、黃柏交互作用實驗結果和金銀花、大青葉、甘草和蒼術交互作用實驗結果，我們篩選出：連翹3-4份、魚腥草2-3份、黃芩3-4份、黃柏3-4份、金銀花3-4份、大青葉3-4份、甘草2-3份和蒼術2-3份為禿瘡花唇膚康噴劑A液的基礎比例配方。

表3 金銀花、大青葉、甘草和蒼術交互作用水平因素表

表4 禿瘡花唇膚康噴劑A液交互作用實驗結果表

2.3 禿瘡花噴劑相互作用篩選試驗結果

為確保實驗結果明顯，本實驗將應用濃度進行了2倍的稀釋，雖然抑菌率低但能更清楚地看出各配方的抑菌率之間的差異。從禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結果看，禿瘡花唇膚康噴劑(禿瘡花唇膚康噴劑A液+禿瘡花唇膚康噴劑B液)抑制副傷寒沙門氏菌的效果比禿瘡花唇膚康噴劑B液和禿瘡花唇膚康噴劑A液好；禿瘡花唇膚康噴劑配方4抑制副傷寒沙門氏菌的作用最好，因此將配方4篩選為禿瘡花唇膚康噴劑的基礎比例配方。

表5 禿瘡花唇膚康噴劑相互作用實驗結果表

3 討論

目前在我國綠色環保戰略實施的背景下，社會廣泛關注食品安全，呼喚無公害產品及綠色畜產品生產，尤其是應用于食源性動物藥品迅速轉向低毒、無殘留、高效等方面發展。本項目以傳統中草藥特有的低毒易代謝的藥物成分解決動物外用消炎藥物的環境污染問題；以傳統中草藥特有的抗微生物的成分及作用的多樣性和協同性解決病原微生物的藥物耐藥性問題；以傳統中草藥特有的藥物有效成分的安全性和對動物機體外損組織的免疫調節功能解決動物皮膚損傷組織細胞的快速修復生長問題。

金銀花、蒼術、連翹、黃芩、黃柏、大青葉、魚腥草和甘草多是清熱解毒類中草藥，這些中草藥中多含有有機酸、生物堿、苷類或甙類、多糖、黃酮、甾醇、揮發油和微量元素等，均有抗微生物和抗炎的作用，同時這些中草藥之間有較好的協同作用。上述這些中草藥不僅具有良好抗微生物作用，而且有調節動物機體免疫系統的機能從而促使動物機體的傷口愈合。中草藥中的成分易于分解代謝，對人類的綠色環保和公共衛生有重要的意義。試驗結果表明，金銀花、蒼術、連翹、黃芩、黃柏、板藍根、魚腥草、甘草和禿瘡花制劑共用有良好的抗微生物、抗炎和促進傷口愈合協同作用。我所多年從事禿瘡花等中草藥的研究工作，在研制禿瘡花沖劑、針劑、擦劑和口服膠囊的基礎上，研制禿瘡花唇膚康噴劑，以解決獸醫臨床操作困難，使治療在確保療效的基礎上變的省時省力。

按中草藥君臣佐使的復方原則，禿瘡花唇膚康噴劑用清熱解毒抗微生物類藥禿瘡花為君；以清熱解毒抗微生物類藥金銀花、連翹、黃芩為臣，使禿瘡花唇膚康噴劑的解毒抗微生物作用范圍增大和作用效果增強；以清熱解毒抗微生物類藥黃柏、魚腥草為臣使禿瘡花唇膚康噴劑的抗炎癥抗潰瘍及抗微生物作用效果增強；以利濕消炎類藥蒼術為佐，與黃柏等協同增強復方的利濕抑酸抑瘍及保護粘膜作用，以溫性清熱解毒類藥甘草為使調和君臣佐藥，使復方的抗炎康復作用效果增強及利于藥物有效成分到達病位和保護粘膜。