CD4+效應型記憶性T細胞及NLR與特發性面神經麻痹的相關性研究

楊婷婷 黃小雨 李鳳展 劉 壇 王瑩瑩 耿德勤 張 勇

特發性面神經麻痹又稱貝爾麻痹，是一種常見的顱神經病變，為非特異性炎癥導致的周圍性面癱[1]。研究表明面部表情肌的癱瘓往往對患者的生活質量及心理健康造成很大的影響[2,3]。因此，積極尋找發生特發性面神經麻痹的早期預測指標對特發性面神經麻痹患者的管理及預防具有十分重要的意義。目前該疾病病因尚不十分明確，可能與免疫系統失衡密切相關[4]。記憶性T細胞(memory T cell，Tm)是參與機體免疫防御和抗原清除的一類重要免疫細胞亞群，可以針對外來及異種抗原產生迅速且高效的免疫應答，一直以來在抗感染及疫苗研制領域受到廣泛關注[5]。然而，目前關于記憶性T細胞亞群在特發性面神經麻痹中的研究較少。本研究旨在探究特發性面神經麻痹患者外周血CD4+記憶性T細胞亞群表達變化，并分析其對特發性面神經麻痹的診斷價值。

對象與方法

1.對象：選取2017年8月～2020年10月徐州醫科大學附屬醫院神經內科住院的53例特發性面神經麻痹患者作為實驗組。實驗組納入標準：①符合中國特發性面神經麻痹診治指南2016版的診斷標準[6]；②所有患者發病在1周以內。排除標準：①近3個月有活動性耳科疾病者；②顱內占位、吉蘭巴雷等引起的繼發性面神經麻痹；③中樞性面神經麻痹；④高血壓、糖尿病、心力衰竭、肝臟、腎臟功能損害；⑤近期細菌感染；⑥合并結締組織病等自身免疫病患者。選擇同時期的50例健康對照者作為對照組。對照組納入標準：①各項體檢指標無異常；②半年內無外傷及其他疾病史；③無其他合并癥。本研究經徐州醫科大學附屬醫院醫學倫理學委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

2.方法：所有研究對象均于入院第2天清晨空腹抽取2ml EDTA抗凝靜脈血，采用人淋巴細胞分離液(天津灝洋生物公司)通過密度梯度離心法分離得到外周血單個核細胞(PBMC)，經PBS洗滌離心后加入鼠抗人CD3-APC-Cy7抗體、鼠抗人CD4-APC抗體、鼠抗人CD45RA-V450抗體、鼠抗人CCR7-BV510抗體(美國BD公司)，同時設同型對照管，室溫避光孵育15min后，采用LSRF ortessa型流式細胞儀(美國BD公司)檢測CD4+TCM及CD4+TEM細胞，其表型分別為CD3+CD4+CD45RA-CCR7+和CD3+CD4+CD45RA-CCR7-[7]。同時收集患者血常規檢驗中淋巴細胞、中性粒細胞及血小板計數，計算NLR與PLR值。

結 果

1.一般資料比較：實驗組與對照組性別、年齡、血小板計數、淋巴細胞計數及PLR比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，實驗組中性粒細胞計數及NLR值更高，差異有統計學意義(P<0.05，表1)。

表1 實驗組與對照組一般資料比較

2.實驗組與對照組外周血CD4+記憶性T細胞亞群比較：實驗組CD4+TCM細胞百分率為30.06%±9.48%，對照組CD4+TCM細胞百分率為33.06%±8.53%，兩組比較差異無統計學意義(t=1.686,P=0.095)；實驗組CD4+TEM細胞百分率為55.70%±12.63%，對照組CD4+TEM細胞百分率為34.57%±8.80%，兩組比較差異有統計學意義(t=-9.896,P=0.000，圖1)。

圖1 實驗組與對照組外周血CD4+TCM細胞及CD4+TEM細胞百分率比較A.CD4+CD45RA-CCR7+中央型記憶T淋巴細胞(CD4+TCM)及CD4+CD45RA- CCR7-效應型記憶T淋巴細胞(CD4+TEM)流式細胞術設門圖；B.實驗組與對照組外周血CD4+TCM細胞及CD4+TEM細胞百分率柱狀圖分析

3.特發性面神經麻痹的危險因素分析：單因素Logistic回歸分析，影響特發性面神經麻痹的危險因素包括CD4+TEM細胞、NLR及中性粒細胞計數(P<0.05，表2)。將上述因素代入多因素Logistic回歸方程，結果顯示，CD4+TEM細胞及NLR是影響特發性面神經麻痹的獨立危險因素(P<0.05，表3)。

表2 特發性面神經麻痹的單因素Logistic回歸性分析

表3 特發性面神經麻痹的多因素Logistic回歸性分析

4.CD4+TEM細胞及NLR兩指標對特發性面神經麻痹的預測價值分析：ROC曲線分析顯示CD4+TEM細胞及NLR的曲線下面積分別為0.910(95%CI: 0.851～0.969，P=0.000)和0.783(95%CI: 0.690～0.875，P=0.000，圖2)。其中CD4+TEM細胞的曲線下面積大于NLR(Z=2.255，P=0.024)。

圖2 CD4+TEM細胞及NLR兩指標對特發性面神經麻痹的診斷價值A.CD4+TEM細胞；B.NLR

討 論

近年來研究顯示，特發性面神經麻痹發病主要歸因于循環免疫細胞介導的免疫炎性反應，其中CD4+T細胞已被證實與特發性面神經麻痹密切相關[4,8]。然而，CD4+T細胞在特發性面神經麻痹中的研究尚不深入，具有一定的局限性，其診斷陽性率有待進一步提高。鑒于特發性面神經麻痹患者恢復過程緩慢，部分患者甚至出現不可逆的面部表情功能喪失，嚴重影響患者的生活質量。因此，尋找新的指標預測特發性面神經麻痹發生對提高特發性面神經麻痹患者的臨床治療療效及預后有著極其重要的臨床意義。

CD4+記憶性T細胞是機體免疫防御和抗原清除系統的重要組成部分，可以針對外來及異種抗原產生迅速且高效的免疫應答，一直以來在抗感染及疫苗研制領域受到廣泛關注[9～12]。Sallusto等[13]首次根據Tm細胞的遷移能力及功能不同分為CD4+的中央型記憶性T細胞(TCM)和效應型記憶性T細胞(TEM)。TCM細胞主要存在于淋巴器官,具有自我更新的能力。在機體受到抗原刺激后，TCM細胞能夠迅速轉化為TEM細胞，并長期存在于外周中，產生IFN-γ、IL-17等炎性因子發揮效應功能[9，10,14]。目前，在結核、病毒等感染性疾病中已有研究報道CD4+TEM表達增加，并且有望成為臨床診斷該類感染性疾病的新型觀察指標[15, 16]。然而尚無關于CD4+Tm細胞亞群在特發性面神經麻痹患者中的表達研究。

本研究對特發性面神經麻痹患者外周血CD4+TCM和CD4+TEM細胞進行了比較分析，發現特發性面神經麻痹患者與健康對照組比較，CD4+TEM細胞表達明顯增加，而CD4+TCM細胞表達兩組比較差異無統計學意義，提示CD4+TEM細胞與特發性面神經麻痹密切相關。除了檢測CD4+Tm細胞亞群表達水平，本研究還分析比較了兩組患者NLR及PLR情況，與既往研究報道一致[17]。本研究發現特發性面神經麻痹患者中性粒細胞計數及NLR顯著高于健康對照組，差異有統計學意義，而兩組PLR比較差異無統計學意義。上述指標經Logistic回歸分析顯示CD4+TEM細胞、NLR為影響特發性面神經麻痹的危險因素。此外，本研究還進一步通過繪制ROC曲線發現CD4+TEM細胞及NLR對特發性面神經麻痹具有較好的預測價值，其中CD4+TEM細胞預測效果更佳。因此早期進行CD4+TEM細胞檢測，同時聯合NLR，有利于特發性面神經麻痹的早期識別，從而早期干預以改善患者的預后。

綜上所述，本研究發現特發性面神經麻痹患者和健康對照組外周血CD4+TEM細胞、NLR比較差異有統計學意義，且對特發性面神經麻痹具有較好的診斷價值，為特發性面神經麻痹的臨床診斷與治療提供一定的理論依據。