某尿液流水線審核報告流程的驗證及改進

陳雅斌，葉玉華，陳 楠，張 立，張志珊，苗 杰△

1.福建醫(yī)科大學附屬泉州第一醫(yī)院檢驗科，福建泉州 362000；2.聯(lián)勤保障部隊第九七○醫(yī)院檢驗科，山東威海 264200

尿液常規(guī)檢測主要包括尿液干化學檢測和尿液有形成分檢測。建立恰當?shù)膶徍藞蟾媪鞒淌菍嶒炇夷蛞簷z測能夠發(fā)出正確報告的重要一環(huán)。其中復檢規(guī)則的建立和驗證亦是ISO15189實驗室認可中體液學領域的重要內(nèi)容[1]。目前，已經(jīng)有不少研究針對不同的尿液流水線進行了復檢規(guī)則的建立和驗證[2-4]。日本Sysmex公司的UC3500尿干化學分析儀(簡稱UC3500)聯(lián)合UF5000尿液有形成分分析儀(簡稱UF5000)尿液流水線是新一代產(chǎn)品，正在國內(nèi)外各大實驗室逐步推廣，目前研究主要集中于尿路感染的篩查[5-6]，其智能審核的建立和驗證亦有1～2篇文獻，其中WANG等[7]建立的審核報告流程在6家大型醫(yī)院，共計3萬多例尿液標本中經(jīng)過驗證，顯示出良好的臨床適用性[8]。為了驗證該尿液審核流程是否適用于本實驗室，本研究選取了1 300例尿液標本進行審核規(guī)則的驗證和性能評價，以期為各實驗室建立或驗證審核報告的流程提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年9-11月就診于泉州市第一醫(yī)院的門診和住院患者，以及健康體檢人員共1 300例，其中男677例，女623例，年齡9個月至97歲，中位年齡50歲。標本來源于腎內(nèi)科、泌尿外科、兒科、婦產(chǎn)科、內(nèi)分泌科、呼吸科、感染科等各個臨床科室以及體檢中心。

1.2儀器與試劑 UC3500和UF5000為日本Sysmex公司產(chǎn)品。試劑均為原廠配套試劑，且均在有效期內(nèi)使用。離心機為上海盧湘儀離心機儀器有限公司的TD4N型尿液低速離心機，已經(jīng)過校準，離心機轉(zhuǎn)速符合規(guī)定；顯微鏡采用日本Olympus光學工業(yè)株式會社生產(chǎn)的CX23(升級版)雙目顯微鏡，定期進行保養(yǎng)。

1.3方法

1.3.1儀器檢測 按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程(第4版)》[9]要求，規(guī)范留取中段尿液標本10 mL，嚴格按照標準化操作流程(SOP)在UC3500和UF5000尿液流水線上進行檢測。儀器已經(jīng)過定期校準及性能驗證(包括干化學分析儀陰陽符合率、有形成分分析儀精密度、攜帶污染率、可報告范圍等)，符合廠家和ISO15189的規(guī)定。確保每日質(zhì)控在控后再進行尿液標本的檢測。每日隨機選取30例，記錄每例標本UC3500的白細胞酯酶(LEU)、隱血(BLD)、尿蛋白(PRO)以及UF5000的紅細胞計數(shù)(RBC)、白細胞計數(shù)(WBC)、管型計數(shù)(CAST)、病理管型(Path.CAST)、真菌(YLC)等檢測結(jié)果，所有原始數(shù)據(jù)均備份留檔。

1.3.2人工鏡檢 尿液流水線檢測完畢后離心(400×g，5 min)，棄上清液，留取0.2 mL沉渣重新混勻，取適量混勻后的沉渣滴于載玻片上，并加蓋蓋玻片。由2名具有主管技師職稱的檢驗師采用雙盲法進行人工鏡檢。先用低倍鏡(10×10)觀察全片，再用高倍鏡(10×40)仔細觀察。觀察至少20個低倍鏡視野，以及10個高倍鏡視野，并記錄低倍鏡下CAST，高倍鏡下紅細胞、白細胞等有形成分的每視野平均數(shù)量。以2名檢驗師的均值作為最終結(jié)果。2名檢驗師已事先按照ISO15189規(guī)定進行人員比對，比對結(jié)果符合規(guī)定。每份尿液標本均在2 h內(nèi)完成留取、上機檢測、離心鏡檢工作。

1.3.3審核規(guī)則的驗證 引用文獻[7-8]建立智能審核規(guī)則時報道的UF5000的參考范圍，RBC、WBC檢測項目的等級，以及鏡檢的陽性標準。以人工鏡檢結(jié)果作為金標準，上述文獻中的智能審核規(guī)則為依據(jù)，分析1 300例標本中觸發(fā)各審核規(guī)則的例數(shù)，以及各性能評估指標包括復檢率、人工審核率、真陽性率、真陰性率、假陽性率、假陰性率等。并進一步分析假陰性標本中腎臟相關疾病的具體情況。

1.4統(tǒng)計學處理 使用儀器自帶軟件Labman UriAccess 3.0、Microsoft Excel 2007軟件進行統(tǒng)計分析。評價指標包括復檢率、人工審核率、真陽性率、真陰性率、假陽性率和假陰性率(漏診率)。復檢率=觸發(fā)復檢規(guī)則的標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%；人工審核率=觸發(fā)人工審核規(guī)則的標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%；真陽性率=真陽性標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%；真陰性率=真陰性標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%；假陽性率=假陽性標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%；假陰性率=假陰性標本例數(shù)/總標本例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1智能審核規(guī)則驗證的性能評價 1 300例標本中觸發(fā)智能審核規(guī)則的有558例(42.92%)，其中觸發(fā)規(guī)則1～8的復檢率為18.85%(245/1 300)，觸發(fā)規(guī)則9～19的人工審核率為24.08%(313/1 300)，具體觸發(fā)的各規(guī)則例數(shù)見表1。以人工鏡檢結(jié)果作為金標準，計算UF5000檢測結(jié)果和人工鏡檢結(jié)果的符合率。未觸發(fā)RBC、WBC、CAST人工鏡檢(規(guī)則1～8)的標本共1 055例，真陽性率為17.00%(221/1 300)，真陰性率為55.38%(720/1 300)，假陽性率為4.46%(58/1 300)，假陰性率為4.31%(56/1 300)。

表1 觸發(fā)智能審核規(guī)則情況

2.2假陰性標本分析 56例假陰性標本中43例未觸發(fā)審核規(guī)則，13例觸發(fā)人工審核規(guī)則。腎內(nèi)科或泌尿外科尿液標本10例，包括未觸發(fā)審核規(guī)則6例和觸發(fā)人工審核規(guī)則4例。假陰性以WBC多見，鏡下范圍在4～8個/高倍鏡。RBC、CAST的假陰性標本其鏡檢結(jié)果均在臨界值范圍，見表2。

表2 腎內(nèi)科/泌尿外科假陰性標本分析

2.3審核規(guī)則的改進和分析 表1可見各審核規(guī)則中鏡檢規(guī)則8、10、14、15符合率為95.00%以上，根據(jù)表1情況，以及本實驗室的工作需求對審核規(guī)則進行修改(表3)。并對改進后的規(guī)則重新進行性能評價，結(jié)果顯示，修改后復檢率為16.92%(220/1 300)、人工審核率為16.07%(209/1 300)、真陽性率為19.31%(251/1 300)、真陰性率為55.46%(721/1 300)、假陽性率為4.15%(54/1 300)、假陰性率為4.15%(54/1 300)。修改審核規(guī)則后可見54例假陰性標本，其中腎內(nèi)科或泌尿外科尿液標本8例，為表2中的病例1～8，而病例9、10由于規(guī)則15的修改進行鏡檢。

表3 審核規(guī)則修改

3 討 論

本研究對文獻[7-8]建立的審核規(guī)則進行了驗證，1 300例尿液標本的假陰性率僅為4.31%，符合ISO15189實驗室認可的規(guī)定和通用評估標準[1，10-11]，說明該審核規(guī)則是適用于本實驗室的。但在結(jié)果分析中發(fā)現(xiàn)，雖然復檢率為18.85%，但人工審核率卻為24.08%。因此，針對驗證結(jié)論，以及本實驗室的實際工作需求，對部分規(guī)則進行了修改。

具體修改規(guī)則如下。(1)規(guī)則8存在以下兩種情況時依然選擇人工鏡檢。①CAST≤1.96個/微升(男)或≤1.62個/微升(女)，但該病例為腎臟相關疾病，如腎功能不全，以及高血壓、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、糖尿病等可能累及腎臟的疾病[12-14]；②同時出現(xiàn)CAST≥1.96個/微升(男)或≥1.62個/微升(女)。原因在于規(guī)則8僅對PRO進行了規(guī)定，但并未對CAST進行定義。而在驗證中規(guī)則8鏡檢符合率為95.75%，即表明UF5000中CAST的計數(shù)結(jié)果和人工鏡檢的符合率極高。因此，本研究認為不需要對每例標本，特別是CAST計數(shù)陰性的標本均進行人工鏡檢，但為了不漏檢腎臟相關疾病，對于此類標本還是有必要進行人工鏡檢。同時對于PRO和CAST雙陽性的標本，仍然有因干擾因素的存在而導致假陽性的情況，因此也進行了人工鏡檢。(2)刪除規(guī)則10和規(guī)則14。這兩個規(guī)則分別表現(xiàn)為紅細胞、白細胞檢測項目在UC3500和UF5000上雙陽性，但級差較大的情況。在驗證中發(fā)現(xiàn)僅有17例出現(xiàn)了這種情況，而且符合率為100.00%，雖然也有幾例存在干擾因素，但UF5000計數(shù)結(jié)果依然和人工鏡檢結(jié)果相吻合，因此本研究認為可以不考慮級差問題，直接發(fā)放審核報告。(3)規(guī)則15對腎臟相關疾病的標本進行了人工鏡檢。修改原因和規(guī)則8類似，UF5000的CAST和人工鏡檢的符合率極高，因此可以直接放行，但為了避免漏診腎臟相關疾病，單獨定義此類標本進行人工鏡檢。(4)規(guī)則19由人工審核修改為人工鏡檢。這是出于本實驗室的工作需求，筆者認為YLC也是尿路感染的主要病原體之一[15]，且該規(guī)則鏡檢符合率極低，僅為20.83%，YLC的假陽性結(jié)果勢必會對臨床醫(yī)生的診療造成干擾，因此對于所有YLC陽性的標本全部進行復檢。(5)其余未修改的人工審核規(guī)則，由于UF5000檢測結(jié)果和鏡檢結(jié)果并非完全一致，因此人工審核時應根據(jù)標本具體情況和臨床需要決定是否鏡檢。

采用修改后的審核規(guī)則重新對1 300例標本進行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示人工審核率從修改前的24.08%降低至16.07%，有8%左右的標本直接放行，臨床工作量降低。另一方面，修改后的復檢率、真陽性率、真陰性率、假陽性率、假陰性率均與修改前持平，并未出現(xiàn)明顯波動，其中假陰性率仍然在要求的5%以內(nèi)，依然是符合ISO15189實驗室認可的規(guī)定和通用評估標準的。這表明修改后的審核規(guī)則在減少工作量的同時并沒有導致工作效率下降。因此，本研究認為修改后的審核規(guī)則適用于本實驗室。然而不同的實驗室應根據(jù)自己實驗室的具體情況，驗證并分析適合自己實驗室的審核規(guī)則。

10例腎內(nèi)科或泌尿外科的假陰性標本中，在修改審核規(guī)則后有2例因觸發(fā)了修改后的規(guī)則15而進行了鏡檢，避免了漏診。病例1～8依然被漏診，但從表2中可以看出，這些漏診標本的RBC、WBC、CAST均在臨界值范圍。因此，本研究認為小概率的漏診可以接受。

綜上所述，本研究驗證并改進的審核規(guī)則，其假陰性率<5%，符合ISO15189實驗室認可的規(guī)定和通用評估標準，可以應用于本實驗室。同時，修改后的審核規(guī)則在人工審核率上有所降低，減輕了臨床的工作量。本研究為其他實驗室驗證并改進該尿液流水線審核規(guī)則提供了一定的參考資料。