急性淋巴細胞白血病患兒細胞因子水平與疾病狀態的關系研究*

宋曉梅，李 化，舒莉萍△

1.貴州醫科大學細胞工程生物醫藥技術國家地方聯合工程實驗室/貴州省再生醫學重點實驗室/貴州醫科大學基礎醫學院免疫學教研室,貴州貴陽 550004;2.貴州省貴陽市婦幼保健院檢驗科，貴州貴陽 550004；3.中國醫學科學院成體干細胞轉化研究重點實驗室，貴州貴陽 550004

白血病是一種造血干細胞異常增生性腫瘤，急性白血病可分為急性淋巴細胞白血病和急性非淋巴細胞白血病兩大類，其中急性淋巴細胞白血病較易治療。根據病情輕重,人們將急性淋巴細胞白血病分為低危、中危和高危3種。骨髓移植是通過移植正常的造血干細胞到患兒體內來治療白血病的一種可行的方法[1-2]，其最為關鍵的步驟是找到與患兒匹配的造血干細胞。兒童急性淋巴細胞白血病具有較高的病死率，盡管臨床醫師在白血病患者體內細胞因子變化方面已有諸多研究，但大部分是以成人為主，部分研究覆蓋兒童群體，但病例選擇年齡偏大。近年來，兒童急性白血病發病率呈逐年增高的趨勢，患兒表現為不同程度貧血、出血及關節浸潤等，病情進展速度快、復發率高[3-4]。既往研究發現，細胞免疫功能在急性淋巴細胞白血病發病機制中有著重要的作用[4]，為探討急性淋巴細胞白血病患兒細胞因子水平與疾病狀態的關系，本研究收集急性淋巴細胞白血病患兒212例進行相關研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年12月貴陽市婦幼保健院收治的212例急性淋巴細胞白血病患兒納入急性淋巴細胞白血病組，根據患兒不同的疾病狀態將其分為初診組(128例)、緩解組(84例)，并將同期在該院進行常規體檢的200例健康兒童納入對照組，同期收治的50例急性髓細胞白血病患兒納入急性髓細胞白血病組。初診組：男76例，女52例；年齡1～13歲，平均(7.38±1.25)歲；其中116例為B型，12例為T型。緩解組：男52例，女32例；年齡1～14歲，平均(7.35±1.22)歲；其中76例為B型，8例為T型。對照組：男120例，女80例；年齡1～14歲，平均(7.34±1.26)歲。急性髓細胞白血病組：男29例，女21例；年齡1～12歲，平均(7.21±1.35)歲；其中M0型12例，M1型10例，M2型17例，M3型5例，其他類型6例。4組研究對象年齡、性別等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象家屬對研究目的、注意事項表示了解，均簽署知情同意書。

1.2患兒納入與排除標準 納入標準：(1)兒童急性淋巴細胞白血病診斷參照中國抗癌協會血液腫瘤專業委員會發布的《淋巴漿細胞淋巴瘤/華氏巨球蛋白血癥診斷與治療中國專家共識(2016年版)》[3]相關標準，急性髓細胞白血病診斷參照《急性髓系白血病(復發難治性)中國診療指南(2011年版)》[4]相關標準。(2)患兒臨床資料及病史、檢查記錄等資料完整。排除標準：(1)合并肝、腎疾病患兒；(2)神志不清或精神障礙患兒；(3)經過病原學檢測及臨床檢查診斷為合并感染患兒；(4)合并其他類型血液系統疾病患兒；(5)存在語言交流溝通障礙、聽力障礙以及無法配合研究者；(6)預計生存期≤3個月患兒。

1.3方法 于清晨空腹狀態下采集各組研究對象靜脈血3 mL，室溫環境下靜置直至血細胞凝固，3 000 r/min離心5～10 min，將血清分離后，于-80 ℃冰箱中保存待測。采用ELISA雙抗體夾心法對研究對象白細胞介素(IL)-2、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)-α等細胞因子進行檢測。靜脈采血2 mL，采用Sysmex XS-500i全自動五分類血液分析儀測定各項血常規指標。

1.4觀察指標[5](1)對比急性淋巴細胞白血病組、急性髓細胞白血病組及對照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及白細胞計數(WBC)水平。(2)比較初診組、緩解組及對照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。(3)隨訪6個月，根據急性淋巴細胞白血病患兒是否復發分為復發組與未復發組。比較兩組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。實驗室參考值范圍如下：IL-2 0～7.5 pg/mL，IL-10 0～12.9 pg/mL，TNF-α 0～16.5 pg/mL，WBC (4～12)×109/L。

1.5急性淋巴細胞白血病危險程度分型 WBC>10×109/L，屬于高危。WBC<10×109/L，血小板計數>40×109/L，屬于低危。WBC<10×109/L，血小板計數<40×109/L，屬于中危[6]。

2 結 果

2.1各組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較 急性淋巴細胞白血病組TNF-α、IL-10、WBC水平高于急性髓細胞白血病組與對照組，IL-2水平低于急性髓細胞白血病組與對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較

2.2初診組、緩解組、對照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較 初診組IL-2水平低于緩解組及對照組，TNF-α、IL-10、WBC水平高于緩解組及對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 初診組、緩解組、對照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較

2.3血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細胞白血病患兒臨床特征的關系 初診急性淋巴細胞白血病患兒血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與患兒年齡、性別以及肝大無關(P>0.05)，與患兒疾病危險程度分型有關(P<0.05)，見表3。

表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細胞白血病患兒臨床特征的關系

續表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細胞白血病患兒臨床特征的關系

2.4復發組與未復發組IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比較 急性淋巴細胞白血病患兒復發72例，未復發140例。與未復發組相比，復發組血清IL-2水平降低，IL-10、WBC以及TNF-α水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 復發組與未復發組IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比較

3 討 論

兒童腫瘤的發病率為12.2/10萬～17.3/10萬，而白血病的發病率在兒童惡性腫瘤中位列第1，約占全部兒童惡性腫瘤的1/3。在兒童血液系統腫瘤中，白血病是最為常見且最為嚴重的一種[7-9]。兒童白血病治療首選化療方案，針對部分復發、難治、高危的患兒則需要進行骨髓移植。目前，規范化的白血病診治方案在全國各兒童白血病定點醫院已經推廣實施多年，經過規范化的診治，80%以上的急性淋巴細胞白血病患兒可以治愈。以往研究發現：輔助性T淋巴細胞1(Th1細胞)主要分泌的細胞因子包括IL-2、干擾素(IFN)-γ等，Th1細胞在細胞免疫中具有較高的效能；輔助性T淋巴細胞2(Th2細胞)主要分泌的細胞因子包括IL-10、IL-4等，Th2細胞在免疫系統中具有負調控作用。一旦Th1細胞、Th2細胞在人體免疫應答中動態平衡被打破，將會導致免疫功能紊亂，誘發一系列疾病[10-13]。

白血病是對人體危害較大的一種疾病，該病在發展過程中會因為克隆性白血病細胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻等機制而導致白血病細胞在骨髓或者其他造血組織中大量增殖，累積浸潤其他非造血組織與器官，影響正常造血功能，引發一系列相關癥狀。白血病進展時患者會有感染現象，多以細菌入侵為主，而感染發生時身體會出現一系列不良反應。作為細胞免疫主要調節因子，IL-2來源于活化的Th1細胞，其他免疫細胞如B淋巴細胞、樹突狀細胞盡管也能分泌IL-2，但分泌量較少[14-15]。以往學者在研究中對IL-2免疫調節作用進行了如下總結：(1)IL-2對B、T淋巴細胞增殖、分化具有促進作用，且能夠促使B淋巴細胞分泌抗體；(2)IL-2一方面可加強淋巴細胞表面黏附分子的表達，另一方面能夠對細胞殺傷靶細胞起到誘導作用；(3)IL-2刺激CD8+細胞產生，加快TNF、IFN等細胞因子的分泌，強化抗白血病作用機制；(4)在對自然殺傷(NK)細胞產生誘導作用的同時，促使活化的NK細胞殺傷力的提升；(5)對巨噬細胞具有激活作用，能夠促進吞噬及抗原呈遞功能的提升，參與抗腫瘤過程。本研究結果顯示，與對照組相比，初診組、緩解組IL-2水平明顯降低，考慮是由于白血病細胞分泌可溶性白細胞介素-2受體(sIL-2R)，與IL-2R競爭性結合IL-2，導致IL-2水平減少，另外Th1細胞數量減少，其分泌IL-2能力也會下降，進而導致IL-2水平降低。作為一種負向調控的細胞因子，IL-10能夠起到免疫抑制的作用。IL-10能夠對抗原已致敏的CD4+Th細胞(Th0型細胞)向Th1細胞的增殖、分化起到抑制作用，使其向Th2細胞方向增殖、分化，弱化Th1細胞分泌細胞因子的能力，抑制機體免疫功能，在腫瘤性疾病形成中具有參與作用。其次，IL-10能夠對炎性反應起到抑制作用，引起自身免疫性疾病的發生，在IL-10作用下，細胞毒性T淋巴細胞對免疫無應答，更容易發生免疫功能缺陷。當機體出現惡性病變，調節性T細胞(Treg細胞)顯著增多，進而增加IL-10的分泌，血清IL-10水平呈現出升高趨勢。本研究中，與對照組相比，初診組及緩解組患兒IL-10水平均升高，IL-10對機體免疫功能產生抑制作用，降低了免疫監控能力，使得白血病細胞發生免疫逃逸，導致了白血病的發生。TNF-α主要來源于巨噬細胞及活化的單核細胞，具有多種生物活性，抗腫瘤能力強，在多種機體病理反應中有著一定的參與作用。與此同時，該指標還能夠促使細胞凋亡[16]。本研究中TNF-α在急性淋巴細胞白血病患兒中有所升高，且初診組TNF-α水平高于緩解組及對照組(P<0.05)。單純性的WBC升高是不能確診為白血病的，但是白血病患者在進行血常規檢查時，往往出現WBC過高的情況，WBC過高是白血病的一種表現。本研究中初診急性淋巴細胞白血病患兒血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與患兒年齡、性別及肝大等無關，與患兒疾病危險程度分型密切相關，說明上述指標能夠反映患兒疾病狀態，可用于患兒病情及預后的評估。對急性淋巴細胞白血病患兒進行為期6個月隨訪，與未復發組相比，復發組血清IL-2水平降低，IL-10、WBC及TNF-α水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)，提示急性淋巴細胞白血病患兒疾病復發后仍伴隨炎癥因子水平的升高，對急性淋巴細胞白血病患兒給予細胞因子水平監測，能夠掌握患兒腫瘤生長情況及復發風險，以便予以有效的干預措施。但由于樣本量少，本研究可能存在一定偏倚，在后續研究中應加大樣本量，增加隨訪指標，從更多方面探討急性淋巴細胞白血病患兒細胞因子表達變化情況，為臨床提供更可靠的依據。

綜上所述，血清IL-2、TNF-α、IL-10、WBC水平能反映出急性淋巴細胞白血病患兒疾病狀態，其水平變化能夠對患兒免疫功能起到預測作用，在急性淋巴細胞白血病預后及治療進展評估中有著重要的意義。