酶聯免疫吸附分析及其在食品安全檢測中的應用

□ 馬杰華 平南縣公共檢驗檢測中心

酶聯免疫吸附測定法（ELISA）是以酶標記抗體技術為基礎，在實際應用中，可通過酶標抗體及待測標本的未標記抗原進行檢驗，并分離游離的已經結合的標記抗原進行酶活性測定與分析，從而得到待測抗原的含量。ELISA具有選擇性好、靈敏度高、檢測結果比較準確、實用性強等優點，被廣泛應用于臨床醫學、生物學及化學分析等領域中。基于此，研究及分析ELISA在食品安全檢測中的應用，對進一步實現食品安全檢驗水平提升有積極作用[1]。

1 酶聯免疫吸附的基本原理

ELISA是將抗原或抗體以不損壞免疫活性的條件，結合到固相載體的表面。在進行測定的過程中，可根據檢驗標準對抗原、抗體的反應過程、復合物等進行檢測分析。在反應過程中，固相載體上酶標抗原或抗體被結合量等進行統計與分析，洗滌處理后，去除反應液中的其他物質，在加入酶反應底物后，底物可通過酶催化轉變為有色產物，最后，采用定性或定量分析的方式，對有色產物量進行檢驗與分析[2]。ELISA在實際應用中，其基本應用原理如圖1所示。

圖1 操作步驟

ELISA在實際應用中，其可以采用直接法、間接法兩種方式進行檢驗分析。其中，直接法則是酶標記抗體與待檢測樣本中固相抗原直接產生作用，并在加入底物后，出現顏色變化。間接法則是以已知抗原為基礎，吸附在固相載體上，與待檢測樣本中的抗體作用為主，加入酶標記抗同種動物抗體的免疫球蛋白，并加入酶底物，顯色。ELISA在實際應用中，可通過直接、間接的方式進行檢驗與分析，并結合最終的顯色，從而判定最終的檢驗結果。

2 ELISA操作的影響因素分析

ELISA的實際應用中，需對ELISA測定結果的影響因素進行分析。①抗原包液的質量對ELISA的測定結果會產生直接的影響。將抗原固定在聚苯乙烯微量反應板中，其效果對抗原-抗體反應等會產生直接的影響。②非特異性反應的干擾。在設置稀釋液空白、陽性及陰性參比血清的基礎上，需采用包埋、封閉等方式進行預處理。如在抗原包液中加入牛血清白蛋白、明膠和吐溫-20等，從而達到減少非特異性反應的目的。③高選擇性的單克隆抗體可代替多克隆抗體，這對提高ELISA特異性方面有積極作用。④在實際操作中，選擇表面積相對較大的固相載體，可提高ELISA的敏感性以及操作性。⑤酶合交聯劑對ELISA的操作會產生直接的影響。在利用免疫法或化學法的過程中，HRP與抗體的交聯可采用高碘酸鈉氧化法進行處理，從而達到檢驗與操作的目的。酶底物本身要求無色，在反應后可出現顏色變化。大多HRP是以鄰苯二胺為酶底物，AKP則是以硝基苯磷酸鹽為ELISA檢驗的酶底物[3]。

3 酶聯免疫吸附在食品安全檢測中的應用分析

3.1 細菌檢測

沙門氏菌是食品安全檢測中的關鍵指標，可采用制備單克隆抗體的ELISA方法對沙門氏菌進行檢測，最低檢測量可達到500 cfu/g，時間為22 h，可實現全自動檢測。在利用BADot-ELISA對食品中的李氏桿菌進行檢驗的過程中，其檢驗的敏感性可達到104個/mL，而且節省時間。以蘇丹紅1號為研究對象，在對其抗原序列進行分析時，通過抗原可實現溶解劑的制備。在對食品中的病原微生物進行檢驗時，強化ELISA檢測程序，可提高吸附的靈敏性。單核細胞的檢驗，可采用細菌分離的方式，但檢驗周期較長，所以，可建立重組單細胞ELISA檢測方法，提升單細胞細菌的檢驗 效果[4]。

3.2 生物毒素檢驗

真菌毒素對人體健康產生直接的影響，毒性相對較強，有致癌作用，如黃曲霉毒素的毒性較強，對人體的傷害性較大，具有一定的免疫抑制性，較低的含量就會導致各類疾病。可利用ELISA對真菌毒素進行檢驗與分析，如在利用ELISA檢驗黃曲霉毒素B+G標準品的過程中，檢驗的最低濃度為0.13 ng/mL，最低的檢出量為 50 μg/kg，利用校正曲線分析，線性范圍為0.25～20 ng/mL。可通過ELISA檢驗，對生物毒素含量及吸附敏感性等方面進行檢驗與分析，從而滿足食品安全檢驗的實際需求。ELISA對真菌毒素的檢驗與分析，包括黃曲霉素、抗原體及特異性抗體等方面，ELISA的應用穩定性較高，測量結果較準確。

3.3 藥物材料檢測

利用ELISA可對食品中的藥物殘留進行檢測與分析，如有害殘留成分、禁用獸用殘留成分等。以肉制品為研究對象，利用ELISA可對生鮮肉的血清蛋白和熟食肉制品的肌肉抗原進行檢測。在檢測瘦肉精時，可對食品的可食用性、安全性等進行檢驗與分析，如果食用的肉制品瘦肉精含量超標，易導致人們出現頭疼、四肢麻木等癥狀。而且，ELISA可對動物脂肪中的孕激素殘留量進行檢驗，如果殘留量超標，則說明食品質量不達標[5]。

3.4 轉基因食品監測

在對轉基因食品的研發、食用等方面進行綜合分析時，可通過ELISA技術對基因序列、目的蛋白質等進行檢驗與分析，通過雙夾心ELISA法的應用，可對轉基因成分進行評估與分析，有助于提高食品安全質量。以轉基因大豆為例，通過ELISA的應用，可對抗草甘膦轉基因大豆中的CP4EPSPS蛋白進行檢驗，而且，在檢驗的過程中，可檢測出不同轉基因大豆中的蛋白含量，這對提高轉基因食品安全檢驗水平有積極作用。

4 結語

綜上所述，探究酶聯免疫吸附分析法的實際應用，對酶聯免疫吸附在轉基因食品、藥物材料、生物毒素等檢測中的應用進行研究，酶聯免疫吸附的應用方式不同，食品檢驗與分析效果方面也存在一定的差異。但是，在酶聯免疫吸附的實際應用中，強化自動檢測儀器的開發與應用對提高酶聯免疫吸附分析法在食品安全檢測中的實際應用效果有積極作用。