沙棘果實(shí)和葉片中黃酮類物質(zhì)測(cè)定方法研究進(jìn)展

□ 郝 娟 烏魯木齊譜尼測(cè)試科技有限公司

我國是世界上沙棘資源最豐富的的國家，沙棘具有耐寒、耐旱和耐鹽堿的特性，主要分布于我國新疆、西藏、青海和山西等地區(qū)。近年來，沙棘中含有豐富的化學(xué)物質(zhì)，特別是總黃酮具有抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗運(yùn)動(dòng)性疲勞等作用，是醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)[1-2]。沙棘分布廣泛且品類豐富，不同品種間營養(yǎng)成分含量差異較大，因此，準(zhǔn)確、高效地測(cè)定沙棘中黃酮類物質(zhì)，成為目前研究沙棘功效及評(píng)價(jià)沙棘質(zhì)量的重要 內(nèi)容。

1 沙棘果實(shí)和葉片中黃酮類物質(zhì)測(cè)定方法

1.1 紫外分光光度法

紫外分光光度法主要有NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法、AlCl3-CH4O顯色法，新鮮的沙棘果實(shí)需用無水乙醚或石油醚反復(fù)提取除去色素和脂類物質(zhì)，再進(jìn)行回流提取，或通過離心除去油脂才可進(jìn)行測(cè)定。NaNO2-Al（NO3）3- NaOH顯色法、AlCl3-CH4O顯色法測(cè)定沙棘中的總黃酮，無法測(cè)定其中單一組分含量，受反應(yīng)時(shí)間影響較大，穩(wěn)定性不是非常理想，易受雜質(zhì)干擾，定量準(zhǔn)確性差，重現(xiàn)性低。具體測(cè)定方法分別見表1、表2。多項(xiàng)研究表明，沙棘葉片中總黃酮含量明顯高于沙棘果實(shí)。

表1 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法測(cè)定沙棘中總黃酮含量

表2 AlCl3-CH4O顯色法測(cè)定沙棘中總黃酮含量

1.2 高效液相色譜法

目前，測(cè)定沙棘中黃酮組分普遍使用的是高效液相色譜法，測(cè)定方法見表3，主要測(cè)定槲皮素、山奈素（山奈酚）和異鼠李素。槲皮素是一種多羥基黃酮類化合物，具有多種生物活性，如抗氧化、清除自由基、抗炎、抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等作用；山奈酚作為黃酮類物質(zhì)，具有抗癌防癌、抗炎和抗糖尿病等作用；異鼠李素在抑制脂肪分化、耐缺氧和抗腫瘤等方面具有較好的作用。高效液相色譜法分離度高、準(zhǔn)確、快速，但只能對(duì)少數(shù)幾種黃酮類化合物進(jìn)行定量，并不能滿足同時(shí)測(cè)定多種黃酮類物質(zhì)的需求。

表3 高效液相色譜法測(cè)定沙棘中各黃酮單體含量

目前，以新鮮沙棘果作為直接測(cè)定樣品的研究較少，一般會(huì)將樣品低溫或冷凍干燥脫水后才開始樣品處理。這主要是因?yàn)樾迈r沙棘果皮薄，汁液豐富，易破損造成營養(yǎng)元素破壞和流失。如果取樣不均一或放置時(shí)間過長，都可能導(dǎo)致檢測(cè)數(shù)據(jù)存在偏差。黃酮類物質(zhì)含有大量酚羥基，易被氧化，加熱或高溫烘干都不可會(huì)造成黃酮損失，因此冷凍干燥對(duì)提取物中活性成分的保留具有明顯 優(yōu)勢(shì)。

1.3 高效液相色譜-質(zhì)譜法

2020版《中國藥典》主要以高效液相色譜法測(cè)定干燥的沙棘果實(shí)中蘆丁和異鼠李素，雖然蘆丁和異鼠李素是沙棘果實(shí)中最具有代表性的黃酮類物質(zhì)，但不能反映沙棘果中所有的黃酮成分，沙棘黃酮組分不明確，制約了沙棘黃酮藥用機(jī)制的深入研究。大量研究發(fā)現(xiàn)，沙棘果中含有豐富的黃酮組分。陳燕玲[11]通過不斷優(yōu)化色譜和質(zhì)譜條件，以沙棘籽、沙棘果渣和沙棘葉為研究對(duì)象，成功建立了能同時(shí)檢測(cè)蘆丁、兒茶素、楊梅素、山奈酚、槲皮素和異鼠李素這6種黃酮組分的高效液相色譜方法和LCMS/MS方法，對(duì)不同部位的沙棘黃酮組分實(shí)現(xiàn)了完整分析，并確定了檢測(cè)限和定量限。蔡爽等人[12]以沙棘種子和葉片為研究對(duì)象，建立了槲皮素、異鼠李素、山奈酚、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素沒食子酸酯、蘆丁、柚皮素、表兒茶素沒食子酸酯、木犀草素、柚皮苷和表兒茶素等11種黃酮組分的LCMS/MS測(cè)定方法，該方法具有靈敏度高，快速準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，可發(fā)現(xiàn)沙棘果中微量目標(biāo)成分。丁麗娜等[13]通過超臨界CO2萃取技術(shù)獲得沙棘果油，分離鑒定出18種黃酮類化合物，其中芹菜素-6-C-葡萄糖苷-8-C-木糖苷、兒茶素-7-吡喃葡萄糖苷、苜蓿素、紫羅蘭素、刺槐黃素這5種黃酮首次被發(fā)現(xiàn)存在于沙棘中。具體測(cè)定方法見表4。

表4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定沙棘中各黃酮組分

2 結(jié)語

沙棘總黃酮測(cè)定一般選擇分光光度法，單一組分測(cè)定可選擇高效液相色譜色譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜法，槲皮素、異鼠李素和山奈素等單一組分測(cè)定方法較成熟，沙棘中很多新的黃酮物質(zhì)正在被逐漸發(fā)現(xiàn)，研究方法也逐漸成熟，高效液相色譜-質(zhì)譜法將成為同時(shí)測(cè)定多種組分的較為有效準(zhǔn)確的方法。測(cè)定沙棘中總黃酮時(shí)，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器設(shè)備的實(shí)際條件選擇合適的方法評(píng)價(jià)沙棘質(zhì)量。