辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響

王良剛，成 靜，謝小東，季 露，孫鈺博，胡庭俊，韋英益，覃志彪

（廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧530005）

南美白對(duì)蝦是一種甲殼類動(dòng)物，缺乏完整的特異性免疫機(jī)制。當(dāng)南美白對(duì)蝦受到有害刺激時(shí)，機(jī)體的免疫應(yīng)答主要依靠非特異性免疫反應(yīng)完成[1]。南美白對(duì)蝦的甲殼和表皮構(gòu)成了第一道非特異性屏障，細(xì)胞免疫和體液免疫協(xié)同完成機(jī)體的免疫應(yīng)答。因南美白對(duì)蝦體內(nèi)缺乏免疫球蛋白，其體液免疫主要依靠非特異性的酶或者其他免疫因子共同完成[2-3]，南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞則承擔(dān)著十分重要的免疫保護(hù)職責(zé)。酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、酚氧化酶（PO）和超氧化物歧化酶（SOD）等是幾種典型的非特異性免疫酶，能夠反映細(xì)胞的免疫能力。辣蓼的主要化學(xué)成有黃酮類、揮發(fā)油、糅質(zhì)類、脂肪酸、三萜類、蒽醌、糖苷和蓼酸等。研究表明，辣蓼主要成分黃酮具有生物抗氧化性、清除自由基、殺蟲(chóng)、抑菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗癌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛止血等多種生物活性[4]。本研究通過(guò)體外分離和培養(yǎng)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞后，將不同濃度的辣蓼黃酮提取物添加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，觀察其對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞存活率的影響，并測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ACP、AKP、PO和SOD等非特異性免疫酶的活性，探討辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

健康的南美白對(duì)蝦600尾，體長(zhǎng)為12～15 cm，購(gòu)自廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院南美白對(duì)蝦良種基地。

1.2 試驗(yàn)材料

辣蓼黃酮提取物，為廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室采用醇沉法提取后制成的制劑，測(cè)定其黃酮含量約為7.51%。

黃芪多糖，淡黃色粉末，購(gòu)自北京生泰爾生物有限公司，總糖含量為70%。

1.3 試劑及儀器

胎牛血清購(gòu)自Biological industries；DMEM購(gòu)自Gibco公司；DMSO和左旋多巴（L-DOPA）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶等試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）購(gòu)自碧云天。

MCO-170AICDL-PC二氧化碳培養(yǎng)箱（Panasonic）、EnSpire多功能酶標(biāo)儀（Perkin Elmer）、CD-UPT-II-20L純水儀（成都越純科技有限公司）、5430R高速冷凍臺(tái)式離心機(jī)（EPPENDORF）。

1.4 試劑配制

1.4.1 DMEM完全培養(yǎng)液

DMEM按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制后，加入胎牛血清（10%）、青霉素（1%）和鏈霉素（1%）。

1.4.2 不同濃度辣蓼黃酮提取物培養(yǎng)液

使用終濃度為0.5%DMSO溶解辣蓼黃酮提取物，然后使用DMEM完全培養(yǎng)液將其稀釋成濃度為1 600μg/mL的辣蓼提取物，15 000 r/min，離心30 min，棄去沉淀；濾過(guò)除菌后再加入DMEM完全培養(yǎng)液進(jìn)行倍比稀釋為不同濃度（800、400、200、100、50、25、12.5μg/mL）。

1.4.3 對(duì)照藥物培養(yǎng)液

使用DMEM培養(yǎng)液溶解黃芪多糖至濃度為1 600μg/mL，濾過(guò)除菌后再加入DMEM培養(yǎng)液倍比稀釋為 不 同 濃 度（800.0、400.0、200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μg/mL）的黃芪多糖培養(yǎng)液。

1.4.4 0.5%DMSO培養(yǎng)液

向DMEM培養(yǎng)液中添加0.5%體積的DMSO。

1.5 南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的體外分離與培養(yǎng)

取健康南美白對(duì)蝦，清洗體表，在0.01%的高錳酸鉀溶液中浸泡5 min，雙蒸水沖洗。用酒精棉球消毒頭胸甲與腹部交界處，使用無(wú)菌注射器吸取適量抗凝劑（5%檸檬酸三鈉），血竇采血，將其注射到15 mL無(wú)菌Ep管中（每管約盛10 mL），輕輕混勻，加少量抗凝劑調(diào)整配平；4℃條件下，1 500 r/min離心10 min，棄上清液，加入DMEM完全培養(yǎng)液吹打均勻重懸沉淀細(xì)胞，稀釋細(xì)胞濃度至8×106個(gè)/mL。

1.6 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活性的影響

1.6.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，為避免邊緣效應(yīng)，將培養(yǎng)板外圍一圈每孔加入200μL PBS后使用。試驗(yàn)設(shè)置細(xì)胞對(duì)照組、DMSO對(duì)照組、辣蓼黃酮不同劑量組（1 600.0、800.0、400.0、200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μg/mL）和黃芪多糖不同劑量組（1 600.0、800.0、400.0、200.0、100.0、50.0、25.0、12.5μg/mL）。各組每孔各加入200μL的細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)12 h左右（29℃，5%CO2），待細(xì)胞貼壁后小心棄去上清液。向細(xì)胞對(duì)照組加入200μL DMEM培養(yǎng)液；向各藥物組每孔加入200μL不同濃度的辣蓼黃酮提取物培養(yǎng)液或不同濃度的黃芪多糖培養(yǎng)液；向DMSO組加入200μL 0.5%DMSO對(duì)照培養(yǎng)液；每組設(shè)置5個(gè)重復(fù)。

1.6.2 CCK8法測(cè)定細(xì)胞活力

將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱敷育24 h后棄去上清，使用PBS小心對(duì)細(xì)胞進(jìn)行3次洗滌。避光操作下，向每孔加入200μL DMEM培養(yǎng)液及20μL CCK8培養(yǎng)敷育1 h，在450 nm處檢測(cè)吸光值，按以下公式計(jì)算細(xì)胞活力：

1.7 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦細(xì)胞內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響

1.7.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

使用24孔板培養(yǎng)細(xì)胞，每孔加入1.0 mL的細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)預(yù)培養(yǎng)12 h（29℃，5%CO2）。待細(xì)胞貼壁后輕輕吸取并棄去上清液，空白對(duì)照組每孔加入1.0 mL DMEM培養(yǎng)液；對(duì)照藥物組每孔加入1.0 mL濃度為100μg/mL的黃芪多糖培養(yǎng)液；辣蓼藥物組每孔加入1.0 mL相應(yīng)濃度（12.5～100.0μg/mL）的辣蓼黃酮提取物培養(yǎng)液；將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)一段時(shí)間（4、8、12、24 h）。輕輕棄去上清，用PBS小心對(duì)細(xì)胞進(jìn)行3次洗滌，加入1.0 mL PBS溶液，仔細(xì)刮下細(xì)胞，收集備用。

1.7.2 ACP、AKP、PO和SOD酶活性的測(cè)定

細(xì)胞內(nèi)ACP、AKP和SOD等酶活性測(cè)定按照相應(yīng)試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。細(xì)胞內(nèi)PO的活性測(cè)定參照Ashida[7]的方法進(jìn)行調(diào)整，依次向96孔板中加入100μL濃度為0.1 mol/L pH值6.0的磷酸鉀緩沖液、100μL待測(cè)液、100μL 0.01 mol/L的L-DOPA液，在490 nm處測(cè)定OD值，每2 min測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定20 min，以O(shè)D值增加0.001為1個(gè)酶活力單位。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活力的影響（見(jiàn)表1）

由表1可知，與細(xì)胞對(duì)照組相比，0.5%DMSO對(duì)照組的細(xì)胞活力無(wú)顯著差異（P＞0.05）；濃度為12.5～50μg/mL辣蓼黃酮提取物能顯著提高南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活力，其中25μg/mL辣蓼黃酮提取物試驗(yàn)組差異顯著（P＜0.05），50μg/mL辣蓼黃酮提取物試驗(yàn)組差異極顯著（P＜0.01）；辣蓼黃酮提取物濃度為400～1 600μg/mL時(shí)，極顯著減弱對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞活力（P＜0.01）。而黃芪多糖藥物對(duì)照組的濃度為12.5μg/mL和200μg/mL時(shí)，與細(xì)胞對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05），濃度為25～100μg/mL的黃芪多糖極顯著增強(qiáng)細(xì)胞活力（P＜0.01），黃芪多糖濃度為400～1 600μg/mL時(shí)，極顯著減弱細(xì)胞活力（P＜0.01）。結(jié)果表明，一定濃度的辣蓼黃酮提取物可提高南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞活性，并選取濃度為12.5～100.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物作為后續(xù)試驗(yàn)藥物濃度以及100μg/mL黃芪多糖作為后續(xù)試驗(yàn)藥物對(duì)照組的濃度。

表1 南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活力的測(cè)定結(jié)果（n=5）Tab.1 Determination of blood lymphocyteactivity of Penaeusvannamei

2.2 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)免疫相關(guān)酶活性的影響（見(jiàn)表2～表5）

由表2可知，與空白對(duì)照組相比，南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)4 h后，12.5μg/mL辣蓼黃酮提取物能顯著提高細(xì)胞中的ACP活性（P＜0.05），濃度為50μg/mL時(shí)，極顯著提高細(xì)胞中的ACP活性（P＜0.01）；培養(yǎng)8 h后，100μg/mL的黃芪多糖和100μg/mL的辣蓼黃酮提取物能極顯著提高細(xì)胞中的ACP活性（P＜0.01）；培養(yǎng)12 h后，12.5μg/mL辣蓼黃酮提取物升高細(xì)胞中的ACP活性，但差異不顯著（P＞0.05），而25μg/mL和50μg/mL的辣蓼黃酮提取物能極顯著降低細(xì)胞內(nèi)ACP活性（P＜0.01）；培養(yǎng)24 h后，各試驗(yàn)組細(xì)胞內(nèi)ACP活性與對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，一定濃度辣蓼黃酮提取物能提高南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶（ACP）的活性。

表2 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦淋巴細(xì)胞內(nèi)ACP活性的影響Tab.2 Effect of FPH on ACPactivity in lymphocytesof Penaeusvannamei 單位：U/g prot

由表3可知，與空白對(duì)照組相比，第4 h時(shí)，50μg/mL的辣蓼黃酮提取物能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)AKP活性（P＜0.01）；第8 h時(shí)，25μg/mL辣蓼黃酮提取物能顯著提高細(xì)胞中的AKP活性（P＜0.05），50μg/mL和100μg/mL辣蓼黃酮提取物能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)AKP活性（P＜0.01）；培養(yǎng)第12 h時(shí)，50μg/mL、100μg/mL辣蓼黃酮提取物能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)AKP活性（P＜0.01），100μg/mL的黃芪多糖能顯著提高細(xì)胞內(nèi)AKP活性（P＜0.05）；第24 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖和濃度為12.5～100μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)AKP活性（P＜0.01）。結(jié)果表明，辣蓼黃酮提取物能顯著提高南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶（AKP）活性。

表3 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)AKP活性的影響Tab.3 Effect of FPH on AKPactivities in lymphocytes of Penaeus vannamei 單位：U/g prot

由表4可知，與空白對(duì)照組相比，第4 h時(shí)，濃度為100μg/mL的黃芪多糖和12.5～100.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)PO活性（P＜0.01）；第8 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖和50～100μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞內(nèi)PO活性（P＜0.01）；第12 h和24 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖和12.5～100.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞中的PO活性（P＜0.01）。結(jié)果表明，辣蓼黃酮提取物能顯著升高細(xì)胞內(nèi)PO活性。

表4 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)PO活性的影響Tab.4 Effect of FPH on POactivities in lymphocytes of Penaeus vannamei 單位：U/g prot

由表5可知，與空白對(duì)照組相比，第4 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖和25μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能顯著提高細(xì)胞內(nèi)SOD活性（P＜0.05）；第8 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖能極顯著提高細(xì)胞中的SOD活性（P＜0.01），50μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能顯著提 高 細(xì) 胞 內(nèi)SOD活 性（P＜0.05）；第12 h時(shí)，12.5～100.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞中的SOD活性（P＜0.01）；第24 h時(shí)，100μg/mL的黃芪多糖能顯著提高細(xì)胞中的SOD活性（P＜0.05），12.5～50.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物均能極顯著提高細(xì)胞中的SOD活性（P＜0.01）。結(jié)果表明，辣蓼黃酮提取物能提高南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)SOD活性。

表5 辣蓼黃酮提取物對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)SOD活性的影響Tab.5 Effect of FPH on SOD activitiesin lymphocytesof Penaeusvannamei 單位：U/g prot

3 討論

南美白對(duì)蝦與其他無(wú)脊椎動(dòng)物一樣，沒(méi)有獲得性免疫系統(tǒng)，它們僅靠由種系基因編碼而成的一種“模式識(shí)別受體”以及其相關(guān)的先天免疫系統(tǒng)來(lái)保護(hù)自身免受病原體侵害[3,5]。無(wú)脊椎動(dòng)物的先天免疫系統(tǒng)是1個(gè)復(fù)雜的蛋白水解級(jí)聯(lián)系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以由病原體的成分觸發(fā)[6]。南美白對(duì)蝦的免疫系統(tǒng)主要包括血淋巴中的細(xì)胞和體液免疫，其中包含的免疫分子參與了機(jī)體的防控機(jī)制，并可對(duì)環(huán)境波動(dòng)作出反應(yīng)[7]。中草藥具有影響和調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體免疫功能，且不易產(chǎn)生耐藥性，在蝦類養(yǎng)殖上已得到廣泛應(yīng)用[8]，例如在基礎(chǔ)飼料中分別添加甘草、板藍(lán)根和黃芪多糖復(fù)合物能有效提高蝦的生長(zhǎng)性能、免疫功能以及改善肝胰腺組織結(jié)構(gòu)和功能[9]；茯苓能有效促進(jìn)對(duì)蝦的生長(zhǎng)性能，而黃芪、板藍(lán)根、柴胡和甘草可以明顯提高對(duì)蝦抗病力和免疫力[10]。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，DMSO對(duì)照組的南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活力接近100%，表明以0.5%的DMSO溶液作為溶劑溶解辣蓼黃酮提取物不會(huì)對(duì)南美白對(duì)蝦細(xì)胞活性造成不利影響。而不同濃度辣蓼黃酮提取物（12.5～1 600.0μg/mL）添加至完全培養(yǎng)液后對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞活力的影響是隨藥物濃度的增加呈現(xiàn)先增加后下降變化，其中辣蓼黃酮提取物濃度在12.5～200.0μg/mL范圍內(nèi)不影響細(xì)胞活力，且濃度為25μg/mL和50μg/mL時(shí)能增強(qiáng)南美白對(duì)蝦細(xì)胞血淋巴細(xì)胞活力；在400～1 600μg/mL濃度范圍內(nèi)細(xì)胞活力均低于100%，結(jié)果表明，當(dāng)辣蓼黃酮提取物在此濃度范圍內(nèi)對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞活力具有抑制作用，且抑制作用隨藥物濃度的增高而增強(qiáng)。而不同濃度的黃芪多糖（12.5～1 600.0μg/mL）對(duì)南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞活力影響也隨藥物濃度的增加出現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)，其中當(dāng)濃度為100μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞活力的具有最顯著的增強(qiáng)作用，當(dāng)藥物濃度超過(guò)400μg/mL后，對(duì)細(xì)胞活力具有抑制作用。

已有研究表明，ACP、AKP、PO和SOD等防御酶在南美白對(duì)蝦的非特異性免疫系統(tǒng)中扮演了重要角色[11-12]。ACP是典型的溶酶體酶，能幫助消除和水解有害微生物，當(dāng)機(jī)體免疫系統(tǒng)受到侵襲時(shí)，機(jī)體內(nèi)的ACP活性會(huì)有所增強(qiáng)[13-14]。作為經(jīng)典的巨噬細(xì)胞溶酶體酶標(biāo)記物，ACP在細(xì)胞代謝中也起著重要作用，可催化磷蛋白的水解和磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移[15-16]。在本試驗(yàn)中，以濃度為12.5～100.0μg/mL辣蓼黃酮提取物對(duì)體外培養(yǎng)至4 h和8 h的南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)ACP活性具有一定程度的增強(qiáng)作用；當(dāng)培養(yǎng)至12、24 h時(shí)，各濃度的辣蓼黃酮提取物降低南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)ACP活性降低或與細(xì)胞對(duì)照組比較高差異不顯著，與匡娜等[17]通過(guò)在飼料中添加甘蓼復(fù)合微生態(tài)制劑能顯著提高對(duì)蝦血清ACP活性的研究結(jié)果一致。AKP是與代謝相關(guān)的調(diào)節(jié)酶，可被作為評(píng)估南美白對(duì)蝦免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，AKP通過(guò)催化磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移而發(fā)揮其重要的生理功能[15]。在本試驗(yàn)中，濃度為12.5～100μg/mL辣蓼黃酮提取物試驗(yàn)組中南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞內(nèi)的AKP活性高約細(xì)胞對(duì)照組，其中50μg/mL的辣蓼黃酮提取物試驗(yàn)組差異極顯著。管振國(guó)等[18]在飼料中添加根瘤菌制劑可顯著提高南美白對(duì)蝦血清中AKP活性，本研究結(jié)果與其結(jié)果相一致。PO的活性與無(wú)脊椎動(dòng)物的易感性呈負(fù)相關(guān)，是能體現(xiàn)動(dòng)物免疫狀態(tài)的敏感指標(biāo)，亦可以作為評(píng)估南美白對(duì)蝦健康狀況的指標(biāo)。研究表明，中草藥具有增強(qiáng)PO活性、降低感染后死亡率的作用[13]。在本試驗(yàn)中，濃度為12.5～100.0μg/mL的辣蓼黃酮提取物試驗(yàn)組南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)至4、8 h，其細(xì)胞內(nèi)PO活性明顯升高。

在細(xì)胞正常的有氧代謝過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生氧自由基（ROS）和活性氧中間體（ROI）。正常情況下，機(jī)體的活性氧產(chǎn)生和消除處于相對(duì)平衡狀態(tài)[19]。過(guò)量ROS會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化和丙二醛的積累，其中丙二醛具有很強(qiáng)的生物毒性并破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，還可能引起氧化應(yīng)激，而抗氧化酶（如SOD）能夠迅速清除ROS和ROI。因此，SOD也被廣泛作為甲殼類動(dòng)物防御能力的評(píng)估指標(biāo)[20-22]。已有研究表明，在飼料中添加黃粉蟲(chóng)蟲(chóng)粉及其蟲(chóng)皮[23]或根瘤菌[18]都能有效提高南美白對(duì)蝦細(xì)胞中的SOD活性。在本研究中，濃度為12.5～100.0μg/mL辣蓼黃酮提取物能升高南美白對(duì)蝦細(xì)胞內(nèi)SOD活性，從而提高對(duì)蝦機(jī)體的抗氧化能力。

4 結(jié)論

辣蓼黃酮提取物能提高體外培養(yǎng)的南美白對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞活性，并通過(guò)升高細(xì)胞內(nèi)免疫相關(guān)酶活性而增強(qiáng)對(duì)蝦的免疫功能，有望開(kāi)發(fā)作為南美白對(duì)蝦的免疫增強(qiáng)劑。