液相色譜串聯質譜法檢測水產品中 17種抗生素殘留量

◎ 陳 燕，李康柏，許均圖，陳德斌，洪瑞申，王 景

（華鑫檢測技術有限公司，廣東 廣州 510642）

抗生素在預防和治療感染性疾病、促進動物生產、日常保健等過程中作出了很大貢獻。隨著現代畜牧業的發展，抗生素作為飼料添加劑和防腐劑廣泛應用于漁業養殖生產。但過量使用抗生素會產生食品安全問題和生物環境問題[1]。目前，國家對抗生素用法和用量列入日常監測范圍。已有檢測方法主要是食品檢測標準通用，本研究方法在原有食品檢測標準的基礎上，對方法進行優化，建立了基于SPE-LC-MS/MS的磺胺類[2]、四環素類[3]、喹諾酮類[4]、大環內酯類[5]以及氯霉素類[6-7]等17種抗生素藥物殘留量的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器試劑

Agilent 1260液相色譜，Agilent 6470三重四極桿串聯質譜儀，氮吹儀，旋轉蒸發儀，渦旋振蕩器。

阿莫西林、青霉素G、氟甲喹、土霉素、四環素、金霉素、甲氧芐啶（TMP）、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺甲基異惡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、紅霉素、羅紅霉素、氯霉素和氟苯尼考，磺胺二甲嘧啶-13C6，恩諾沙星-D5、青霉素G-D7、氯霉素-D5標準品；甲醇、乙腈均為色譜純；實驗室用水為mili-Q超純水。PEP固相萃取小柱（200 mg/6 mL）。

1.2 標準工作曲線配制

17種抗生素標準溶液的配置：準確稱取適量樣品，用甲醇溶解并定容至10 mL，配成1 mg·mL-1的標準貯備液。于-20 ℃下保存。脫水紅霉素溶液由紅霉素標準溶液制備：向紅霉素標準溶液中加入適量稀硫酸，常溫下振蕩4 h，用稀NaOH溶液調節pH至6.0，定容，于4 ℃下保存。實驗時，根據需要配成適當濃度的標準工作液，于4 ℃下保存，當天使用。

1.3 儀器工作參數

1.3.1 色譜條件

Agilent Poroshell EC-C18液相色譜柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）。流動相A：0.1%甲酸水溶液，流動相B：乙腈。流速：0.5 mL·min-1。洗脫程序：0.0 min 10% B，7.0～9.0 min 95% B，9.1 min 10% B。進樣量：20 μL。負離子模式為流動相A：水，流動相B：乙腈。流速：0.5 mL·min-1。流動相比例為A∶B=4∶6。

1.3.2 質譜條件

（1）Agilent 6470的質譜條件。電噴霧負電離源（ESI+）；干燥氣溫度300 ℃；干燥氣流速6 L·min-1；霧化器壓力0.276 MPa；毛細管電壓4 000 V；鞘氣溫度300 ℃，鞘氣流速 12 L·min-1；掃描模式：多重反應監測（MRM）。

（2）負離子模式條件。電噴霧負電離源（ESI-）；干燥氣溫度300 ℃；干燥氣流速6 L·min-1；霧化器壓力0.276 MPa；毛細管電壓2 500 V；鞘氣溫度 300 ℃，鞘氣流速 12 L·min-1；掃描模式：多重反應監測（MRM）。MRM優化后的檢測條件見表1。

表1 多重反應監測掃描模式監測17種抗生素的部分質譜參數表

1.4 測定步驟

1.4.1 樣品預處理

樣品去皮、骨、內臟后取可食部分，切碎勻漿，于冰箱4 ℃下貯存備用。

1.4.2 提取

稱取5.0 g樣品，加入100 μL內標液，加入乙二胺四乙酸（EDTA）使之濃度為0.01 mol·L-1，用80%乙腈溶液提取。PEP SPE小柱（200 mg/6 mL）用6 mL超純水活化平衡，上樣富集，上樣后用10 mL超純水和5 mL 5%甲醇水溶液淋洗小柱，氮氣吹干后用5 mL甲醇洗脫，洗脫液在45 ℃下水浴氮吹至近干，加入1 mL 5%甲醇水溶液溶解殘渣，過0.2 μm濾膜后，供液相色譜-串聯質譜測定。

2 結果與分析

2.1 方法檢出限及回收率

四環素類、大環內酯類采用外標法進行定量，其他抗生素采用相應類別的內標進行定量。水產品中17種抗生素的回收率在61%～115%。采用目標化合物的母離子和特征子離子為選擇監測離子對（MRM），結合化合物不同的保留時間對目標化合物進行定性，17種抗生素10 ng·mL-1的提取MRM譜圖如圖1所示。17種抗生素的回收率和檢出限如表2所示。

表2 17種抗生素的回收率和檢出限表

圖1 17種抗生素10 ng·mL-1的提取MRM譜圖

3 結論

本文建立了一種水產品中抗生素的高通量檢測方法，檢測藥物類別涵蓋磺胺類、四環素類、喹諾酮類、大環內酯類以及氯霉素類等17種抗生素。該方法前處理較為簡單，回收率、檢出限滿足水產品質量安全常規檢測需求。