下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者血漿微RNA-377-3p水平及與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系

鄒仁亮

(南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000)

下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥(lower extremity arteriosclerosis obliterans，LASO)是一種因下肢動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，堵塞血管，導(dǎo)致肢體慢性缺血、缺氧的疾病[1]。目前，關(guān)于LASO的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，多認(rèn)為與高血壓、糖尿病、高脂血癥等誘發(fā)的血管內(nèi)皮損傷等有關(guān)[2]。支架植入術(shù)作為L(zhǎng)ASO的治療方式之一，可有效改善肢體血流阻塞導(dǎo)致的缺血、缺氧狀態(tài)，但隨時(shí)間進(jìn)展，部分患者會(huì)發(fā)生支架內(nèi)再狹窄，嚴(yán)重降低生活質(zhì)量[3]。探討LASO患者術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的預(yù)測(cè)因子有著重要臨床意義。微核糖核酸(microRNA，miRNA)是一類由18～22個(gè)核苷酸組成的單鏈RNA，部分miRNA已被證實(shí)參與了支架內(nèi)再狹窄過(guò)程，如miR-223[4]、miR-21[5]和miR-31[6]等，但少有研究分析miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系。目前，已有研究[7]證實(shí)miR-377-3p可調(diào)控動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移與支架內(nèi)再狹窄的發(fā)生關(guān)系密切[8]，因此，有理由推測(cè)miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄有關(guān)。本研究通過(guò)分析miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系，以期為L(zhǎng)ASO術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的預(yù)防和治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2016年2月至2019年8月就診的115例LASO患者作為研究對(duì)象。LASO診斷參考《下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥診治指南》，有明顯的癥狀及體征，踝肱指數(shù)<0.9，經(jīng)CT血管造影檢查確診為L(zhǎng)ASO。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)首次診斷為L(zhǎng)ASO；(2)治療方案為支架植入術(shù)，術(shù)后常規(guī)服用抗血小板聚集藥物；(3)簽署了知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有支架植入術(shù)禁忌癥；(2)伴大動(dòng)脈炎、骨關(guān)節(jié)炎、糖尿病腎病、急性肺損傷或惡性腫瘤等；(3)臨床資料不完整；(4)未定期復(fù)查。本研究經(jīng)南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 臨床信息采集采集入組患者年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)、糖尿病史、高血壓史、高脂血癥史、血管閉塞位置、閉塞支數(shù)、閉塞長(zhǎng)度、閉塞程度、C反應(yīng)蛋白(C reactive proteins，CRP)、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)等信息。出院后每6個(gè)月復(fù)診1次，行CT血管造影檢查了解術(shù)后1年內(nèi)有無(wú)支架內(nèi)再狹窄(支架內(nèi)和支架兩端5 mm內(nèi)血管腔狹窄程度大于50%[9])發(fā)生。

1.3 miR-377-3p水平檢測(cè)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法[10]檢測(cè)miR-377-3p水平。抽取入組患者入院當(dāng)天和術(shù)后12 h內(nèi)肘部靜脈血10 mL，離心后取上清液，將其置于-80℃冰箱中保存，待驗(yàn)。用TRIzol試劑提取血漿中總RNA，然后用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TAKARA公司)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，最后用A100型PCR儀(山東博科科學(xué)儀器有限公司)擴(kuò)增cDNA，擴(kuò)增反應(yīng)條件為93 ℃ 5 min,93 ℃ 15 s,65 ℃ 30 s,70 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán)。miR-377-3p序列F：5′-ATCACACAAAGGCAACTTTTGT-3′；R：5′-GGTGCAGGGTCCGAGGTAT-3′；內(nèi)參U19序列F：5′-TGGAGTTGATCCTAGTCTGG-3′；R：5′-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′。用2-△△Ct法計(jì)算miR-377-3p水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。正態(tài)性的計(jì)量資料用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；組間比較用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用率[n(%)]表示，組間比較用卡方檢驗(yàn)。用ROC分析miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的價(jià)值。用Logistic回歸分析LASO術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的風(fēng)險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LASO患者臨床特征115例LASO患者年齡37～78(58.85±7.91)歲，男性75例，女性40例，BMI(23.95±2.75)kg/m2；有高血壓史93例，糖尿病史45例，高脂血癥史73例；FBG(6.59±1.06)mmol/L，TC(4.56±1.11)mmol/L，TG(1.98±0.34)mmol/L，LDL-C(3.48±0.78)mmol/L，HDL-C(1.11±0.20)mmol/L，CRP(9.17±3.11)mg/L；髂-股動(dòng)脈段病變48例，腘動(dòng)脈及遠(yuǎn)端病變67例；單肢病變90例，雙肢病變25例；完全閉塞34例；血管病變長(zhǎng)度(7.02±2.12)cm。115例LASO患者中有44例(38.26%)術(shù)后1年內(nèi)發(fā)生支架內(nèi)再狹窄。

2.2 兩組臨床特征比較根據(jù)術(shù)后1年內(nèi)是否發(fā)生支架內(nèi)再狹窄將115例LASO患者分為再狹窄組(n=44)和未狹窄組(n=71)。兩組在年齡、性別、BMI、高血壓史、糖尿病史、高脂血癥史、FBG、TC、TG、HDL-C、病變位置方面比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。再狹窄組的LDL-C、CRP、雙肢病變占比、完全閉塞占比和病變長(zhǎng)度均高于未狹窄組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床特征比較

2.3 兩組miR-377-3p水平比較2組的miR-377-3p水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.893，P<0.001)，再狹窄組術(shù)后的miR-377-3p水平低于未狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；術(shù)前和術(shù)后的miR-377-3p水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=503.632，P<0.001)，2組術(shù)后的miR-377-3p水平均高于術(shù)前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；時(shí)間和支架內(nèi)再狹窄之間存在交互效應(yīng)(F=59.597，P<0.001)，再狹窄組的miR-377-3p水平升高程度低于未狹窄組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組miR-377-3p水平比較

2.4 miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的價(jià)值術(shù)前miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線下面積、最佳截?cái)帱c(diǎn)、敏感度和特異度分別為0.548(95%CI：0.442～0.655)、0.69、52.27%和60.56%；術(shù)后miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線下面積、最佳截?cái)帱c(diǎn)、敏感度和特異度分別為0.888(95%CI：0.831～0.944)、1.14、88.64%和71.83%。術(shù)后miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線下面積大于術(shù)前miR-377-3p，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.494，P<0.001)，見(jiàn)圖1。

圖1 miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線

2.5 LASO術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的Logistic回歸分析

將是否發(fā)生支架內(nèi)再狹窄作為因變量，將LDL-C、CRP、病變肢數(shù)、完全閉塞、病變長(zhǎng)度和術(shù)后miR-377-3p作為自變量，納入Logistic回歸分析，結(jié)果顯示LDL-C、CRP、雙肢病變、病變長(zhǎng)度是支架內(nèi)再狹窄的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，術(shù)后miR-377-3p是支架內(nèi)再狹窄的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 LASO術(shù)后支架內(nèi)再狹窄的Logistic回歸分析

3 討論

支架植入術(shù)后再狹窄嚴(yán)重影響了LASO患者的預(yù)后，也是亟需解決的難題。探究預(yù)示支架內(nèi)再狹窄的生物標(biāo)志物有著重大臨床意義。目前，有研究[11]表明LASO患者支架植入術(shù)后1年內(nèi)再狹窄率高達(dá)40%～60%，本研究中LASO患者術(shù)后1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄率為38.26%，與既往報(bào)道結(jié)果接近。本研究主要就miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系進(jìn)行探討。

本研究比較了再狹窄組和未狹窄組的術(shù)前和術(shù)后miR-377-3p水平，結(jié)果顯示兩組術(shù)后miR-377-3p水平均升高，但未狹窄組的miR-377-3p水平高于再狹窄組，上述結(jié)果提示miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄有關(guān)，其水平或可成為潛在的支架內(nèi)再狹窄的生物標(biāo)志物。為進(jìn)一步分析miR-377-3p與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系，本研究構(gòu)建了miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線，結(jié)果顯示術(shù)后miR-377-3p評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的ROC曲線下面積、敏感度和特異度分別為0.888、88.64%和71.83%，其價(jià)值高于術(shù)前miR-377-3p，上述結(jié)果表明術(shù)后miR-377-3p對(duì)支架內(nèi)再狹窄有一定預(yù)示效果，但特異度偏低，尚可輔助用于評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄。

既往研究[12-15]結(jié)果顯示糖尿病、高血壓、血管病變長(zhǎng)度、完全閉塞、LDL-C等是LASO患者術(shù)后1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄的危險(xiǎn)因素。本研究為避免混雜因素影響分析結(jié)果，采用Logistic回歸分析LASO患者術(shù)后1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄的風(fēng)險(xiǎn)因素，結(jié)果顯示LDL-C、CRP、雙肢病變、病變長(zhǎng)度是支架內(nèi)再狹窄的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，糖尿病、高血壓和完全閉塞與LASO患者術(shù)后1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄無(wú)關(guān)，推測(cè)其原因與樣本量大小和地域等因素有關(guān)，后續(xù)將開(kāi)展大樣本、多中心研究進(jìn)行驗(yàn)證。此外，本研究結(jié)果還顯示術(shù)后miR-377-3p是支架內(nèi)再狹窄的獨(dú)立保護(hù)因素。血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖和遷移可促使動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，加速斑塊形成，堵塞血管。miR-377-3p過(guò)表達(dá)可靶向神經(jīng)纖維蛋白2抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移[7]，其水平反映了抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的程度，由此，miR-377-3p水平高，LASO患者術(shù)后1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄的風(fēng)險(xiǎn)低。

綜上所述，LASO患者支架植入術(shù)后miR-377-3p水平升高，其水平與1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄有關(guān)。術(shù)后miR-377-3p水平低提示1年內(nèi)支架內(nèi)再狹窄風(fēng)險(xiǎn)高。本研究尚存在一定不足，僅分析了術(shù)后12 h內(nèi)miR-377-3p水平與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系，尚不能確定其是最佳的評(píng)價(jià)支架內(nèi)再狹窄的指標(biāo)，后續(xù)將觀察其動(dòng)態(tài)水平，并分析與支架內(nèi)再狹窄的關(guān)系，以彌補(bǔ)本研究的不足。