沉默LncRNA TUG1對骨肉瘤細胞放射敏感性影響

邵 林，李同相，肖 睿，王冰玲，鄧焰軍

（宜賓市第一人民醫院a:骨二科；b:整形燒傷科，四川宜賓644000）

骨肉瘤屬于骨原發性惡性腫瘤，其主要特點為侵襲性強、致死率高、致殘率高及預見性差，嚴重影響患者生活質量［1］。目前放射治療是治療骨肉瘤的主要手段，但放射抵抗明顯降低其治療效果［2］。因此增強骨肉瘤患者放射敏感性成為亟待解決的問題。長鏈非編碼RNA牛磺酸上調基因1（long non-coding RNA taurine upregulated gene1,LncRNA TUG1）在骨肉瘤中的表達與骨肉瘤預后不良及病情有關［3］。長鏈非編碼的RNA TUG1通過在骨肉瘤細胞中充當mir-335-5p的ceRNA而促進遷移和侵襲［4～6］。然而，TUG1對骨肉瘤放射敏感性的影響仍然未知。因此本研究主要探討放射抵抗的骨肉瘤細胞中TUG1變化對骨肉瘤細胞凋亡及放射敏感性的影響，分析其是否可通過吸附miR-328-3p而發揮作用以期為骨肉瘤治療提供新靶點。

1 材料與方法

1.1 細胞與主要試劑

人成骨細胞hFOB 1.19由上海通派生物科技有限公司提供，骨肉瘤細胞HOS由上海賽默生物科技發展有限公司提供。

RPMI 1640培養基、胰蛋白酶、胎牛血清均購自美國Gibco公司；Lipofectamine2000轉染試劑購自美國 Invitrogen公司；si-TUG1、miR-328-3p mimic、miR-328-3p inhibitor及其陰性對照質粒均購自上海吉瑪生物科技有限公司；凋亡檢測試劑盒購自美國Sigma公司；Trizol試劑購自北京索萊寶公司；反轉錄試劑盒與SYBR G人PCR Master Mix試劑盒均購自美國ABI公司。

1.2 細胞處理

室溫使用X射線放療機（6 MeV X）射線垂直照射細胞，照射劑量率為2.0 Gy/min，調整靶皮距（70 cm），照射劑量為600 cGy/次，培養12 h，用0.25%胰蛋白酶消化存活細胞，消化細胞進行傳代培養，以上過程重復5次后將其命名為HOS-R細胞。……