CD34+細(xì)胞和VEGF與慢性阻塞性肺疾病急性加重期的研究

李水霞，張 毅,王秀蓮，許 樂(lè)，白雪瑞,姚寶燕，呂云瑞

(包頭醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014030)

慢性阻塞性肺病(簡(jiǎn)稱COPD)在世界范圍內(nèi)備受關(guān)注，因?yàn)槠涓呋疾÷省⒏甙l(fā)病率和高死亡率給衛(wèi)生保健系統(tǒng)帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。我國(guó)的高吸煙率和空氣污染等其他因素，使COPD在21世紀(jì)繼續(xù)成為一個(gè)日益嚴(yán)重的問(wèn)題。目前COPD的發(fā)病機(jī)制還沒(méi)有被完全了解。本課題研究的目的是探討CD34+細(xì)胞在慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)中的變化，及其變化是否與內(nèi)皮功能(VEGF)改變有關(guān)，進(jìn)一步探討COPD中內(nèi)皮細(xì)胞的作用。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1觀察對(duì)象 2016年10～2017年10月在包醫(yī)二附院呼吸科住院的COPD患者35例，COPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合人民衛(wèi)生出飯社第八版《內(nèi)科學(xué)》，選擇所有AECOPD患者的標(biāo)準(zhǔn)是至少在入選前3個(gè)月接受了吸入布地奈德、噻托溴銨、福莫特羅的治療。AECOPD患者的排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有細(xì)菌性肺炎，急性肺血栓栓塞，急性心腦血管疾病，腎功能不全，肝臟疾病，自身免疫疾病，任何來(lái)源的癌癥和/或所需的機(jī)械通氣的所有患者。

穩(wěn)定期COPD(n=35)的患者從本院門診患者中選取，在納入研究之前的12周內(nèi)未急性加重或治療未變化而定義的臨床穩(wěn)定期。在研究期間均未接受全身性類固醇藥物，并且未患有神經(jīng)肌肉病變、風(fēng)濕病和/或不穩(wěn)定的心血管或腦血管疾病，無(wú)吸煙史。

1.2方法 取四支 TruCOUNT 管，三支為對(duì)照管，一支為測(cè)定管，作好標(biāo)記后各加入抗凝血50 μL，測(cè)定管中加入CD34-PE，CD45-PerCP各10 μL，對(duì)照管中加入IgG1-PE，CD45-PerCP各10 μL，混合均勻，室溫下避光反應(yīng)15 min。紅細(xì)胞裂解劑450 μL分別加入四支試管中，混合均勻后，室溫下避光反應(yīng)15分鐘后流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

流式細(xì)胞儀分析樣本數(shù)據(jù)：用BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀，以熒光校準(zhǔn)微球，自動(dòng)校準(zhǔn)軟件設(shè)置儀器狀態(tài)，之后進(jìn)入ProCOUNT自動(dòng)分析軟件，對(duì)流式管和測(cè)定管進(jìn)行檢測(cè)，選取60 000個(gè)以上的有核細(xì)胞作為有意義的信號(hào)，取得數(shù)據(jù)文件，自動(dòng)分析其結(jié)果，測(cè)出CD34+細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)值，為了確保結(jié)果的準(zhǔn)確性，以上步驟在24 h內(nèi)完成。

使用市售試劑盒(BioSource，比利時(shí))通過(guò)ELISA測(cè)定血漿VEGF的水平。 平均值用于分析。

2 結(jié)果

AECOPD患者的CD34+細(xì)胞水平顯著高于COPD穩(wěn)定期的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在AECOPD期間，外周血中CD34+細(xì)胞水平與VEGF水平呈正相關(guān)(P<0.05)。

表1 各組研究對(duì)象的血液變量的平均值

3 討論

慢性阻塞性肺病(COPD)是一種常見(jiàn)的慢性疾病，進(jìn)展緩慢，其特征是阻塞性通氣功能障礙，這種病理過(guò)程很少可逆，通常與吸煙有關(guān)，并可導(dǎo)致慢性呼吸衰竭。而CD34 + 細(xì)胞水平在COPD中的變化以及在AECOPD(急性加重期)中數(shù)量的變化越來(lái)越引起很多國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。AsaharaT和 PalangeP等發(fā)現(xiàn)COPD患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平減少[1-3]，Shintani S和Heeschen C等[4-6]發(fā)現(xiàn)COPD患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞增加。分析其不同結(jié)果的原因：(1)用于定義和分析COPD患者研究中循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞的標(biāo)記物不同，可能會(huì)顯著影響結(jié)果。本研究選用CD34+來(lái)標(biāo)志內(nèi)皮祖細(xì)胞。(2)以前研究中包含的健康對(duì)照受試者的吸煙狀況不匹配，這可能會(huì)顯著影響循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量。(3)不同的方法來(lái)量化內(nèi)皮祖細(xì)胞的表型細(xì)胞可能會(huì)影響細(xì)胞的數(shù)量。本研究發(fā)現(xiàn)與年齡，性別和吸煙狀況相匹配的對(duì)照組相比，急性期COPD患者的循環(huán)祖細(xì)胞數(shù)量明顯增高，并且循環(huán)CD34+細(xì)胞水平與VEGF水平呈正相關(guān)，表明AECOPD患者的CD34+細(xì)胞水平的升高，可能與VEGF的增高有關(guān)。

總之，我們發(fā)現(xiàn)，CD34+細(xì)胞水平在AECOPD患者中顯著高于對(duì)照組，而且循環(huán)CD34+細(xì)胞水平與VEGF水平呈正相關(guān)，AECOPD患者的CD34+細(xì)胞水平的升高，可能與VEGF的增高有關(guān)。