深圳市寶安區地中海貧血基因檢測結果分析

周文峰 金朝紅 梁琳珂

地貧是由于珠蛋白合成障礙導致遺傳性溶血性貧血,簡稱地貧或海洋性貧血,以α、β 地貧最為常見［1］,該疾病在全世界各地區均有發病,在中國長江以南地區,比如廣東、廣西、海南等地發病率高［2］,地貧臨床表現為貧血、溶血、黃疸、脾大、發育不良等癥狀,臨床上對于地貧的治療主要是輸注紅細胞［3］,骨髓移植雖然可行但難以開展且主要治療對象為低齡兒童［4］,基因治療是目前正在進行相關臨床研究工作［5］,由于該疾病給患者家庭帶來了巨大的經濟負擔、軀體痛苦和精神壓力,研究區域內人群中地貧基因突變的分布規律,對于疾病篩查、優生優育及個體化治療具有重要意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2017 年1 月～2020 年6 月接收的2912 例深圳市寶安區的普通患者作為研究對象。

1.2儀器及試劑 希森美康XN2000 血球儀及試劑盒；日立7600 生化儀及廣州科方生物技術公司的紅細胞脆性試劑盒；深圳匯研科創生物技術公司提供的Expure-20 核酸提取儀；珠海黑馬醫學儀器公司提供的HEMA9600 基因擴增儀；亞能生物技術(深圳)公司的YN-H18 型核酸分子雜交儀及地貧基因提取和檢測試劑盒。

1.3方法 血常規化驗：抽取靜脈血3 ml,MCV 正常參考值為82～100 fl,低值設置為82 fl,對結果MCV＜82 fl的樣本進行紅細胞脆性試驗。紅細胞脆性實驗：紅細胞滲透脆性試驗采用直接比色法,設置為溶血百分率＜55%為陽性。地中海基因檢測：首先提取核酸,擴增,最后雜交顯色；α 地貧基因采用gap-PCR 法,非缺失型α 地貧基因及β 地貧基因采用PCR-反向點雜交法；地貧基因檢測類型包括缺失型α 地貧基因-α3.7、-α4.2、--SEA 和非缺失型α 地貧基因點突變αCS、αQS、αWS,β 地貧17 種常見突變點包括CD41-42,CD31,CD14-15,CD17,CD71-72,CD43,-29,30,32,CAP,Int,IVS-Ⅰ-5,βE,CD27/28,IVS-Ⅰ-1,IVS-Ⅱ-654,-28。

1.4觀察指標 分析地貧基因突變類型及突變率,本地和非本地的地貧基因突變情況。

2 結果

2.1地貧基因突變類型及突變率分析 2912 例研究對象共檢測出地貧基因突變者164 例,地貧基因突變率為5.63%,其中α 地貧基因突變者124 例,突變率為4.26%,共檢出6 種基因類型,其中--SEA 基因缺失比例最高,占地貧基因突變總數的43.90%；β 地貧基因突變者37 例,突變率為1.27%,共檢測出10 種基因類型,其中CD41-42(-TTCT)基因突變占比最高,為7.32%；αβ 地貧混合基因突變3 例,突變率為0.10%。見表1。

表1 地貧基因突變類型及突變率分析(n,%)

2.2本地和非本地的地貧基因突變情況分析 本地籍貫1448 例中146 例出現基因突變,突變率為10.08%,其中α 地貧基因突變110 例、突變率為7.60%,β 地貧基因突變33 例、突變率為2.28%,αβ 地貧混合基因突變3 例、突變率為0.21%；非本地籍貫1464 例中18 例出現基因突變,突變率為1.23%,其中α 地貧基因突變14 例、突變率為0.96%；β 地貧基因突變4 例、突變率為0.27%。見表2。124 例α 地貧基因突變者中本地籍貫110 例、突變率為7.60%,非本地籍貫14 例、突變率0.96%,α 地貧基因突變類型為我國長江以南各省高發區域常見基因類型［6］,檢出6種基因型,包括缺失型地貧基因-α3.7、-α4.2、--SEA 和非缺失型α 地貧基因αCS、αQS、αWS。見表3。37 例β 地貧基因突變中檢出10 種基因類型,其中本地籍貫突變者33 例、突變率為2.28%,非本地籍貫突變者4 例、突變率為0.27%。見表4。

表2 本地和非本地的地貧基因突變情況分析［n,n(%)］

表3 本地與非本地的α 地貧基因突變情況分析［n,n(%)］

表4 本地與非本地的β 地貧基因突變情況分析(n,%)

3 討論

地貧是世界上多地域、多人種、多民族廣泛分布的遺傳性溶血疾病［7］,輕度的溶血可能影響患者的生活質量,嚴重的α 地貧,如Hb Bart’s 胎兒水腫綜合征在妊娠晚期可導致胎兒死亡或在出生后幾小時內死亡。重型β 地貧又稱為Cooley 貧血,為純合子的。嬰兒出生0.5 h 內開始出現典型的溶血和貧血癥狀,輸血治療是其有效手段,在多次輸血后因鐵過載、感染等導致夭折［8］。雖然地貧基因突變的分布具有非常大的差異,我國不同地區及全球人群的基因分布存在規律性和聚集性［9］,研究這些規律可以為本地區的地貧的臨床診治和預防工作提供借鑒的作用。

本研究表明,在深圳寶安區人群中的地貧基因突變為5.63%,α 地貧突變率為4.26%,主要為--SEA、-α3.7 基因缺失型為主,β 地貧突變率為1.27%,最多見的基因突變類型為D41-42(-TTCT)及IVS-Ⅱ-654(C-T),數據顯示α-地貧基因突變率高于β 地貧基因突變率；本地籍貫人群的地貧基因突變率10.08%,高于非本地籍貫人群地貧基因突變率1.23%,同樣是α地貧基因突變率高于β 地貧基因突變率。有關數據顯示廣東省地貧基因突變率為11%［10］,本研究結果提示深圳寶安區人群地貧基因突變率小于廣東其他地區,可能的原因為深圳為移民城市,大量外來人口的影響；而本地籍貫人群的地貧基因突變率與廣東其他地區相似,基因突變類型較廣東其他地區也比較接近［11］。相比廣東其他地區,深圳寶安區地中海基因突變率雖然不高,但仍需加強社區篩查及優生優育咨詢,對有家族性貧血史及來自高發病地區的血常規具有小細胞低色素形態改變的人群需嚴格進行產前咨詢和診斷是預防地貧基因異常嬰兒出生的重要手段。