分析尖銳濕疣病灶內TLR9 表達水平與免疫應答和細胞凋亡的關系

林文生 黃芳

CA 是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染所引起的一種性傳播疾病,有研究表明HPV 感染會造成免疫應答異常,導致免疫系統不能及時清除病原體［1］。持續性感染會造成細胞凋亡障礙,因細胞增生而出現菜花樣或乳頭樣贅生物。TLR9 作為Toll 樣受體(TLRs)的物質之一,參與HPV 的識別,因此探討TLR9 與免疫應答、細胞凋亡之間的關系,有利于掌握CA 發展過程中的特征［2］。本研究回顧性分析本院CA 患者的病歷資料,總結如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2018 年9 月～2020 年9 月收治的61 例CA 患者作為觀察組,其中,初發患者34 例(觀察組A),年齡27～44 歲,平均年齡(31.26±4.28)歲；復發患者27 例(觀察組B),年齡28～45 歲,平均年齡(32.91±4.06)歲；另選取同期行包皮環切術的非CA 患者42 例作為對照組,年齡27～44 歲,平均年齡(31.27±4.29)歲。三組患者的一般資料比較,差異無統計學意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2納入及排除標準

1.2.1納入標準 觀察組患者符合衛健委疾病控制司制訂的CA 診斷標準。

1.2.2排除標準 ①合并惡性腫瘤、乙型肝炎等疾病；②合并人類免疫缺陷病毒(HIV)感染；③合并自身免疫疾病和(或)使用免疫抑制劑。

1.3方法 取觀察組病灶及對照組包皮組織,固定后制為標本。采用RNA 提取試劑盒收集標本中RNA；采用cDNA、去離子試劑、反向、正向引物溶液、UltraSYBR Mixture 試劑。試劑混合后經聚合酶鏈式反應(PCR)儀器處理,檢測基因表達。

1.4觀察指標 對比三組TLR9 的mRNA 表達水平、免疫應答情況、細胞凋亡情況,分析CA 病灶內TLR9的mRNA 表達水平與免疫應答和細胞凋亡的相關性。

1.5統計學方法 采用SPSS17.0 統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差()表示,采用t 檢驗。相關性檢驗采用Spearman 相關分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1三組TLR9 的mRNA 表達水平對比 觀察組A患者TLR9 的mRNA 水平高于觀察組B 及對照組,觀察組B 患者TLR9 的mRNA 水平高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組TLR9 的mRNA 表達水平對比()

表1 三組TLR9 的mRNA 表達水平對比()

注：與對照組對比,aP＜0.05；與觀察組B 對比,bP＜0.05

2.2三組免疫應答情況對比 觀察組A 的IFN-γ、IL-17 水平高于觀察組B 及對照組,觀察組B 的IFN-γ、IL-17 水平高于對照組；觀察組A 的IL-4、IL-10 水平低于觀察組B 及對照組,觀察組B 的IL-4、IL-10 水平低于對照組；差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 三組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平對比()

表2 三組IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 水平對比()

注：與對照組對比,aP＜0.05；與觀察組B 對比,bP＜0.05

2.3三組細胞凋亡情況對比 觀察組B 的PCNA、Survivin 水平高于觀察組A 及對照組,觀察組A 的PCNA、Survivin 水平高于對照組；觀察組B 的FasL、Fas 水平低于觀察組A 及對照組,觀察組A 的FasL、Fas 水平低于對照組；差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 三組細胞凋亡情況對比()

表3 三組細胞凋亡情況對比()

注：與對照組對比,aP＜0.05；與觀察組A 對比,bP＜0.05

2.4CA 病灶內TLR9 的mRNA 表達水平與免疫應答和細胞凋亡的相關性分析 CA 病灶內TLR9 的mRNA表達與IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表達呈正相關(P＜0.05),與IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表達呈負相關(P＜0.05)。見表4。

表4 CA 病灶內TLR9 的mRNA 表達水平與免疫應答和細胞凋亡的相關性分析

3 討論

HPV 感染后如機體免疫應答及時有利于快速清除病毒,而免疫應答紊亂則不利于病毒的清除,同時還會增加CA 復發的風險［3］。因此免疫應答與CA 轉歸密切相關,TLR9 能夠識別HPV,下調免疫應答,促進病毒的清除［4］。本研究中,觀察組A 患者TLR9 的mRNA 水平高于觀察組B 及對照組,觀察組B 患者TLR9 的mRNA 水平高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。這一結果提示CA 的復發可能與TLR9 表達下降影響對HPV 的識別以及對免疫應答的調節有關。

在免疫應答調節中T 淋巴細胞發揮了重要作用,Th1、Th2 等作為CD4+T 淋巴細胞亞群,參與免疫應答調節［5］。IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17 為上述亞群所分泌的因子,分析因子水平能夠了解CA 患者免疫應答情況［6,7］。本研究中,觀察組A 的IFN-γ、IL-17 水平高于觀察組B 及對照組,觀察組B 的IFN-γ、IL-17水平高于對照組；觀察組A 的IL-4、IL-10 水平低于觀察組B 及對照組,觀察組B 的IL-4、IL-10 水平低于對照組；差異有統計學意義(P＜0.05)。IFN-γ、IL-17 為促炎因子,IL-4 為抑炎因子,IL-10 為免疫抑制細胞因子,患者 Th1/ Th2 以及 Th17/Treg 比值改變,Th1 數量上升引起IFN-γ 表達提高,Th17 數量上升引起IL-17 表達提高進而誘發介導促炎效應加速病毒的清除［8］。而CA 復發患者因Th1/ Th2 以及 Th17/Treg比值相比初發患者更低,為此不利于病毒的清除［9］。經過研究還了解到,觀察組B 的PCNA、Survivin 水平高于觀察組A 及對照組,觀察組A 的PCNA、Survivin水平高于對照組；觀察組B 的FasL、Fas 水平低于觀察組A 及對照組,觀察組A 的FasL、Fas 水平低于對照組；差異有統計學意義(P＜0.05)。這一結果說明CA病灶中存在細胞凋亡異常表現,CA 復發患者抗凋亡基因(BPCNA、Survivin)水平最高,抑制凋亡基因(FasL、Fas)水平最低,表示CA 復發患者的細胞增殖更明顯,進而疾病復發風險更高。CA 病灶內TLR9 的mRNA表達與IFN-γ、IL-17、FasL、Fas 的表達呈正相關(P＜0.05),與IL-4、IL-10、PCNA、Survivin 的表達呈負相關(P＜0.05)。這一結果也驗證了TLR9 表達異常將對免疫應答、細胞凋亡有影響,TLR9 降低將導致下游免疫應答的啟動受到干擾［10］。免疫系統清除HPV 能力不足,細胞凋亡受到抑制,增加CA 復發風險,細胞異常增殖最終導致菜花樣增生或乳頭樣增生［11］。

總之,在CA 發展過程中如果患者免疫應答發生紊亂,細胞凋亡就會受到抑制,進而促進病情發展或引起復發。