血清IGFBP3、ERCC1與NSCLC患者一線化療敏感性的關系

張秀芳 張軍營 王 培

放化療治療在非小細胞肺癌(NSCLC)的治療過程中具有重要的作用，其能夠抑制腫瘤細胞的增殖，降低癌細胞活性，進而降低肺癌復發和轉移的風險[1]。臨床上的流行病學隨訪分析發現，NSCLC化療后耐藥的發生率可超過15%以上，同時隨著化療次數的增多，NSCLC化療耐藥的風險可進一步上升[2]。胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP)是胰島素生長因子，其對于癌細胞膜上膜蛋白受體的結合，能夠降低癌細胞內信號通路的激活程度，抑制腫瘤細胞的活化[3]；核苷酸切除修復交錯互補基因1(ERCC1)是基因調控修復因子，其對于癌基因的切除修復作用，能夠避免癌基因激活導致的腫瘤異常轉錄的增強[4]。為了揭示IGFBP3、ERCC1的表達與NSCLC患者化療的關系，從而為臨床上NSCLC的診療提供參考，本次研究選取2017年8月至2020年2月我科實施一線化療的NSCLC患者107例，探討了IGFBP3、ERCC1在不同化療結局患者中的表達情況，并分析了IGFBP3、ERCC1對于化療敏感性的影響。

1 材料與方法

1.1 對象

選取2017年8月至2020年2月我科實施一線化療的NSCLC患者107例，所有患者符合中華呼吸學會制定的診斷標準[5]，在完成4～6個療程后，根據WHO實體瘤療效評估結果分為敏感組77例、不敏感組30例。敏感組77例，年齡44～72歲，平均(58.7±8.2)歲；男性44例、女性33例。不敏感組30例，年齡42～75歲，平均(59.4±9.4)歲；男性21例、女性9例。兩組患者就上述一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

納入標準：①患者年齡在19～75歲以內；②均為初次診斷的NSCLC患者，既往無放化療病史；③患者不愿意接受手術或不能采取手術治療：④具有影像學可測定的實體瘤；⑤本研究符合《赫爾透辛基宣言》相關醫學倫理學方面的規定，研究對象知情并同意。排除標準：①合并肺結核、哮喘、慢阻肺、肺部纖維化等疾病；②長期使用糖皮質激素、免疫抑制劑；③既往手術后復發的患者、具有放化療病史；④合并其他部位的惡性腫瘤。

1.2 方法

1.2.1 一線化療方案 吉西他濱(江蘇紅豆杉藥業有限公司 批號TFJ20130101 )化療，1 000 mg/m2，第1、8天，順鉑注射液(南京揚子江藥業 批號20150312)，20 mg/m2，第1～5 d，連續治療28 d為一個周期，連續治療3個周期。

1.2.2 療效判定標準 近期療效判定依據WHO實體瘤療效評價標準，共分為四個等級：1為完全緩解(CR)、2為部分緩解(PR)、3為疾病穩定(SD)、4為疾病進展(PD)；CR+PR患者為化療敏感。

1.2.3 指標檢測方法 取患者肘部靜脈血5 ml，并進行1 000 r/min離心10 min后，取其上清液待測。從密封袋中取出實驗的板條，然后將空白孔中加入樣品或者100 μl/孔的稀釋液，在檢測孔中加入100 μl/孔的標本，并用膠紙封閉實驗表條孔，放置于36 ℃條件下進行孵育60～90 min，用磷酸鹽緩沖液進行5次清洗，在空白對照孔中加入100 μl的生物素抗體稀釋液，檢測孔中加入100 μl的生物素抗體檢測液，然后再次用膠紙封閉實驗表條孔，放置于36 ℃條件下孵育30～60 min，空白對照孔中加入酶結合100 μl的稀釋液，檢測孔中加入酶結合100 μl的檢測液，再用膠紙封閉實驗表條孔，用磷酸鹽緩沖液進行5次清洗，加入有湖州英創生物科技公司生產的YSRIBIO的TMB顯色底液，避光36 ℃孵育15 min，加入終止液100 μl，并在3 min內檢測OD450值，BioTek酶標儀由美國伯騰儀器有限公司生產。

1.3 統計分析

2 結果

2.1 二組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平比較

經過4～6個周期的化療，其中CR 22例、PR 55例、SD 24例、PD 6例；化療敏感組患者化療前的血清IGFBP3、ERCC1水平顯著的高于不敏感組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 二組患者化療前血清IGFBP3、ERCC1水平比較

2.2 二組患者臨床病理學特征比較

化療敏感組患者與不敏感組患者TNM分期、腫瘤分化程度比較，差異具有統計學意義(P<0.05)；兩組年齡、性別、吸煙、病理類型、病灶直徑、淋巴結轉移情況差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 二組患者臨床病理學特征比較(例，%)

2.3 對NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

經Logistic回歸分析，TNM分期增高、分化程度降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素(P<0.05)；血清IGFBP3水平升高、ERCC1水平升高可提高NSCLC患者一線化療的敏感性(P<0.05)，見表3。

表3 NSCLC患者一線化療敏感性影響的多因素分析

3 討論

NSCLC的發生，能夠導致肺癌患者總體生存時間的縮短，影響到肺癌患者的病情進展速度[6-7]。在中晚期NSCLC患者中，靜脈化療治療能夠在NSCLC生存時間的獲益或者生存率的改善方面發揮作用。不同的因素均能夠影響到NSCLC的化療結局，其中越來越多的研究關注到，分子生物學領域的相關蛋白改變，能夠在癌基因的修復、細胞內化療藥物的代謝及ATP泵的調控方面發揮作用，最終影響到一線化療方案的耐藥。鱗狀上皮癌抗原或者癌胚抗原能夠在NSCLC的診療過程中發揮作用，但鱗狀上皮細胞抗原或者癌胚抗原與NSCLC化療敏感性并無明確的關系[8]。臨床上尋找可靠而有效的復制化療評估指標，能夠在NSCLC的化療結局的預測、化療方案的制定等方面發揮作用。本次研究通過對于NSCLC患者血清中IGFBP3、ERCC1的表達分析，能夠在揭示NSCLC病情進展機理的同時，為臨床上NSCLC的診療提供定量化指標。

IGFBP3是胰島素生長調控結合蛋白家族成員，其對于癌細胞膜上糖蛋白配體的阻斷作用，能夠避免癌細胞內第二信使的激活，降低癌細胞的增殖活性。IGFBP3對于癌細胞周期的調控，能夠避免G1/S期細胞比例的紊亂，降低癌細胞的異常分裂的風險[9-10]；ERCC1是癌基因錯配修復相關成員，其對于癌基因的切除過程，能夠避免癌基因累積誘導的癌細胞DNA的擴增。ERCC1對于癌細胞內囊泡體系的激活，能夠提高靜脈化療藥物的作用時間[11]。有部分研究者探討了IGFBP在肺癌患者中的表達情況，認為在肺癌患者中IGFBP蛋白的表達陽性率明顯上升[12]，但缺乏對于IGFBP3、ERCC1的表達與肺癌化療結局的關系分析。

對于肺癌患者外周血中IGFBP3、ERCC1蛋白的表達分析研究，發現在化療敏感組患者中，IGFBP3、ERCC1蛋白的表達濃度明顯高于化療不敏感組，統計學差異顯著，表明IGFBP3、ERCC1的高表達均能夠改善肺癌的化療結局，提高化療敏感性。這分析其原因，主要由于IGFBP3、ERCC1能夠影響到化療藥物的代謝半衰期，干預到化療藥物進入腫瘤細胞內的時間，影響到了癌細胞膜上ATP泵的主動轉運過程，最終影響到了化療敏感性[13-14]。有其他研究者也發現，在肺癌采用順鉑為基礎的化療過程中，ERCC1高表達的患者，其化療后病情部分緩解率或者完全緩解率可超過55%以上，同時患者病程越短、遠處轉移比例越低，化療后肺癌病情改善的敏感程度越高[15]。在其他臨床病理特征的影響中，可以發現臨床分期的增加或者癌細胞的低分化，均能夠影響到NSCLC的化療敏感性，提示了一般性臨床特征對于NSCLC的化療結局的影響。這主要由于臨床分期的增加或者癌細胞低分化行為，能夠導致癌細胞生物學行為的惡化，加劇癌細胞對于化療藥物的排泄速度，影響到了一線靜脈化療方案的敏感性。但本次研究并未發現淋巴結轉移或者腫瘤病理類型對于肺癌化療結局的影響，排除了癌細胞發生來源對于化療結局的影響。危險因素分析也可見，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素，臨床上對于具有相關高危因素的患者，或者合并化療前IGFBP3、ERCC1明顯上升的患者，可以通過聯合二線化療方案或者靶向治療，從而改善NSCLC的化療結局。

綜上所述，IGFBP3、ERCC1蛋白水平的上升，能夠提高NSCLC一線化療方案的敏感性，TNM分期增高、分化程度降低、血清IGFBP3水平降低、ERCC1水平降低是NSCLC患者采用一線化療不敏感的獨立危險因素。