腹腔鏡胃癌根治術患者組織中PPARγ輔激活因子1α及長鏈非編碼轉錄因子7表達及其臨床意義

趙小勇 吳瑞卿 王 尚

胃癌是消化道常見的惡性腫瘤的1種，發病率和死亡率較高[1-2]，近年來通過腹腔鏡治療胃癌已有廣泛的應用[3-4]。PGC1α是PGC-1(PPARγ coactivator-1) 家族的一個成員，是線粒體增殖的重要調節因子，促進線粒體的氧化表達，提高線粒體氧化功能，介導多種組織的能量代謝途徑中的轉錄調控。lncRNA主要位于細胞核內，作為修飾染色質復合物的支架，調節基因的表達。已有研究表明lncRNA與癌癥的發生、發展、轉移、復發密切關系[5-6]。PGC1α、lncTCF7已被證實在多種惡性腫瘤的發生、發展中有重要作用。本研究旨在分析腹腔鏡胃癌根治術后患者體內PGC1α和lncTCF7表達情況，探討腹腔鏡胃癌根治術的療效，PGC1α和lncTCF7對胃癌發生發展的重要意義，對腹腔鏡胃癌根治術患者預后的監測效果。

1 材料與方法

1.1 一般資料

對我院2016年8月至2017年8月住院行腹腔鏡胃癌根治術患者50例作為研究對象，其中男性20例，女性30例，年齡36～74歲，平均年齡(51.5±2.9) 歲；納入標準為均接受術前胃鏡檢查，病理活組織檢查結果證實為原發性胃癌。排除標準：①術前曾接受放射和(或)化學治療等轉化治療；②因出血、梗阻、穿孔等進行急診手術；③由于術后并發癥、意外等導致非腫瘤性因素的死亡；④術后病理檢查結果均符合胃癌病理學診斷標準，并排除其他胃惡性腫瘤如淋巴瘤等；⑤單純接受消化道重建等非根治性切除術。本次研究的患者與家屬均知曉本次研究并簽署知情同意書，研究經倫理委員會批準后展開。

1.2 細胞株和質粒載體

lncTCF7高表達的胃癌細胞株AGS購自中國科學院上海細胞生物學研究所。人胚腎細胞HEK-293T為病毒包裝細胞，來自美國菌種保藏中心，并由上海市腫瘤研究所癌基因及相關基因國家重點實驗室保存。RNA干擾慢病毒載體系統購自上海吉瑪制藥技術有限公司，該系統包括LV2穿梭載體、包裝質粒混合物pPACK-GAG、pPACK-REV和pPACK-VSV-G包裝載體。

1.3 檢測方法

免疫組化檢測：PGC1α檢測試劑盒購自上海語純生物有限公司，于根治術中收集患者胃癌病理組織，對組織進行染色后制作病理切片，計算其免疫組化評分。

qRT-PCR檢測：收集患者新鮮胃癌組織標本，在液氮下研磨并置于1.5 ml的EP管中，1 000 r/min離心5 min，將上清液棄去，QIAGEN RNA提取試劑盒(優寧維，中國)提取細胞的總RNA。利用分光光度計測量RNA吸光度值，計算RNA濃度。羅氏(ROCHE，瑞士)對lncTCF7基因進行qRT-PCR檢測。

1.4 隨訪

通過定期復查、門診隨訪等方式直接聯系患者本人或家屬獲得隨訪資料，以2020年8月1日作為隨訪終點，以無病生存期(全因死亡、腫瘤轉移或復發)和總生存期(全因死亡)評價患者臨床預后。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 PGC1α、lncTCF7 的表達與胃癌患者臨床病理特征的關系

胃癌患者PGC1α、lncTCF7相對表達量與腫瘤分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤直徑無關(P>0.05),見表1。

表1 PGC1α、lncTCF7 的相對表達量與胃癌患者臨床病理特征的關系

2.2 PGC1α的表達與患者臨床預后的關系

截至隨訪終點，50例納入胃癌患者共12例死亡，6例轉移或復發；以PGC1α免疫組化評分中位數進行分組，PGC1α高表達組無進展生存期和總生存期均低于PGC1α低表達組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 PGC1α的表達與患者臨床預后的關系月)

2.3 lncTCF7 mRNA水平與患者臨床預后的關系

以lncTCF7 mRNA相對表達中位數進行分組，lncTCF7 mRNA高表達組無進展生存期和總生存期均低于 lncTCF7 mRNA低表達組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 LncTCF7 mRNA水平患者臨床預后的關系月)

2.4 胃癌患者不良預后的多因素分析

將PGC1α的表達與 lncTCF7 mRNA水平作為檢驗變量，患者隨訪終點時臨床結局作為結局變量，校正其它常量因素后，回歸分析結果顯示PGC1α的高表達與lncTCF7 mRNA高水平是根治性胃癌術后患者不良預后的獨立危險因素(P>0.05)，見表4。

表4 胃癌患者不良預后的多因素分析

3 討論

研究發現腫瘤細胞的線粒體功能完備且與腫瘤發生發展過程密切相關[7-8]。本研究結果顯示了在29.3%的胃癌患者組織中檢測到了PGC1α的明顯高表達。PGC1α在不同腫瘤中的表達受不同癌基因或信號通路的調控，以適應在特定的腫瘤微環境下腫瘤細胞的代謝所需。胃癌患者PGC1α、lncTCF7水平與腫瘤分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤直徑無關。在腫瘤轉移方面，研究發現小鼠乳腺癌轉移模型中循環腫瘤細胞傾向于通過PGC1α維持線粒體代謝以保持侵襲性[9-10]。

本研究發現腹腔鏡根治術后胃癌患者的PGC1α免疫組化評分、lncTCF7 mRNA相對表達與胃癌預后顯著相關。既往研究發現，干擾lncTCF7的表達可以抑制胃癌細胞侵襲轉移的能力，提示lncTCF7可能是胃癌侵襲、轉移的關鍵分子[11-12]。因此lncTCF7有望作為胃癌的發生、發展和預后的判斷生物標志物。

綜上所述，腹腔鏡根治術后PGC1α預測胃癌患者的預后具有重要的臨床意義，受限于病例數較少等限制，統計學結論可能存在一定的偏倚，研究結論有待更多的研究證實。