miR-34b和miR-320a的表達與前列腺癌組織臨床病理特征及預后的相關性

呂文偉 魏澎濤

前列腺癌是常見的男性生殖系統惡性腫瘤，近年來發病率逐年上升[1]。前列腺癌的治療方案有手術治療和激素治療，患者治療后仍易轉移和復發，嚴重影響患者的生活質量[2]。miRNA是一種內源性非編碼小分子單鏈RNA，可以通過轉錄后調控蛋白質的表達[3]。miR-34b、miR-320a是目前已知的可能與前列腺癌相關的兩條MicroRNA，目前很少有miR-34b、miR-320a與前列腺癌病情及預后的相關性研究。因此，本次旨在分析前列腺癌組織中miR-34b、miR-320a的表達與臨床病理特征及預后的相關性，為臨床診斷前列腺癌提供依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年3月至2017年2月本院收治的前列腺癌患者80例作為觀察組，另選40例良性前列腺增生患者作為對照組。觀察組患者年齡50～70歲，平均年齡為(65.1±4.8)歲，對照組患者50～69歲，平均年齡為(64.9±4.7)歲，兩組年齡無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。手術切取前列腺癌患者癌組織及癌旁組織各80份，切取良性前列腺增生患者增生組織40份。納入標準：①前列腺癌患者均符合2014年前列腺癌指南中診斷標準[4]；②所有患者均知情同意，配合隨訪；③認知功能正常。排除標準：嚴重心肝腎功能不全、合并其他惡性腫瘤、糖尿病患者。本研究經我院倫理委員會批準，且患者和家屬均自愿參加實驗并簽署知情同意書。隨訪3年，定期為患者進行直腸指檢、血清PSA、B超等檢查。根據PSA的倍增時間來判斷隨訪患者的病情。

1.2 實時定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測組織miR-34b、miR-320a的表達

將離體的前列腺癌組織、癌旁組織、良性前列腺增生組織置于液氮中速凍，然后放置-80 ℃冰箱中備用。應用RNAiso PLUS試劑盒(上海百賽生物技術有限公司)提取細胞總RNA，以總RNA為模板，使用逆轉錄試劑盒合成cDNA。miR-34b定量引物上游序列為5’-CAATCACTAACTCCACTGCCAT-3’，下游序列為5’-TGGTGTCGTGGA GTCG-3’。miR-320a定量引物上游序列為5’-ACACTCCAGCTGGGAAAAGCUGGGUUGAGGA-3’，下游序列為5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’。RT-PCR總反應體系為 20 μl，其中c DNA，引物，Master Mix 試劑和純水。所有反應均在PCR儀完成，每個樣本重復3次。以 2-ΔΔCt代表目的基因的相對表達量，計算公式為ΔCt=Ct目的基因-CtU6，ΔΔCt =ΔCt癌組織-ΔCt癌旁組織。分別計算各組織中miR-320a、miR-34b的相對表達量。

1.3 臨床病理特征評價

將所有患者前列腺組織標本石蠟切片交由本院病理科醫生進行Gleason評分和TNM病理分期，組織學分級依據前列腺癌Gleason分級[5]。臨床分期按Jewett.whitmore分期標準。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 兩組miR-34b、miR-320a表達量對比

觀察組中miR-34b、miR-320 a相對表達量均低于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組miR-34b、miR-320a相對表達量對比

2.2 miR-320、miR-34b與前列腺癌臨床參數的相關性

前列腺癌患者組織中miR-320a、miR-34b的表達與年齡、初始PSA無關，與Gleason評分、腫瘤大小、腫瘤分期、有無遠處轉移有關(P<0.05)，見表2。

表2 miR-320a、miR-34b的表達與前列腺癌臨床病理特征的關系

2.3 觀察組不同預后患者miR-34b、miR-320a表達情況

隨訪36個月，至2020年2月2日，前列腺癌患者死亡36例，存活44例。死亡組miR-320a、miR-34b表達水平顯著低于存活組(P<0.05)，見表3。

表3 觀察組不同預后患者miR-34b、miR-320a表達情況

3 討論

miRNA是一類源性非編碼單鏈小分子RNA，其轉錄與一般mRNA不同，并不翻譯成蛋白質。癌癥的發生與多種致癌基因和抑癌基因有關，而miRNA在腫瘤的發生中類似于致癌基因和抑癌基因，可通過與特定mRNA結合來調控基因的表達，因此miRNA被一些臨床研究者視為潛在的腫瘤標志物[6-7]。miRNA具有高度的進化保守性，在血清和血漿中的存在形式較為穩定，可作為潛在的血清標志物應用于腫瘤的診斷中[8-9]。miR-34b、miR-320a都是與前列腺癌可能有一定聯系的miRNA，臨床中針對二者表達水平與前列腺癌的病理特征和預后的研究報道較少[10]。本次研究探討了前列腺癌組織中miR-34b、miR-320a的表達與臨床病理特征及預后的相關性，以期為臨床診斷提供新思路。

miR-34b為1種抑癌基因，可通過多種通路調節癌細胞的生長和繁殖。本研究結果表明，前列腺癌患者miR-34b、miR-320 a表達水平較健康對照患者明顯降低，差異具有統計學意義(P<0.05)。呂曉婷等[11]通過研究上調miR-320a對注射用核糖核酸Ⅱ誘導的肝癌 Bel-7402細胞凋亡和遷移的影響，發現與正常細胞相比，腫瘤表達的miR-320a表達水平明顯下調，與本次研究結果類似。前列腺癌患者中組織中miR-320a、miR-34b的表達與年齡、初始PSA無關，與Gleason評分、腫瘤大小、腫瘤分期、有無遠處轉移有關(P<0.05)；死亡組miR-320a、miR-34b表達水平顯著低于存活組。分析其原因可能有：①前列腺癌的進展與SOX4基因有著緊密的聯系，miR-320a可作用于SOX4的非翻譯區[12]。miR-320a表達量增多時可抑制細胞的增殖和發育，從而抑制前列腺癌腫瘤的生長，相對表達量越低，腫瘤體積越大。②miR-34家族可通過調節下游靶基因的表達抑制癌細胞的作用。miR-34在多種腫瘤中表達水平均下降，其機制可能與基因啟動子區甲基化有關。在前列腺癌患者的組織中的表達水平明顯低于非前列腺癌者，可能與DNA損傷的自我修復有關[13]。miR-34b是調節P53的重要分子，P53的異常可引起miR-34b表達水平下降，進而導致miR-34b下游靶基因水平下降，導致腫瘤的增值。

總之，miR-34b、miR-320a低表達的前列腺癌患者病情更易惡化，患者預后差。