口腔鱗狀細胞癌中IL-17及IL-24表達水平及臨床意義

艾 敏 高 嵐

口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)具有生長迅速、浸潤性強、淋巴結易轉移等特點，發生率占頜面部惡性腫瘤的90.0%及以上，全世界每年新增病例>30萬，年死亡數可達14.5萬例，5年生存率<50.0%[1-2]。故早期發現OSCC并準確評估預后是當前提高患者生存質量的關鍵。目前臨床尚未完全明確OSCC病理機制，相關研究發現，免疫細胞及炎性反應作為腫瘤微環境中重要組成部分，在腫瘤發生、發展中起著關鍵作用[3-4]。白細胞介素(IL)-17為Th17主要分泌細胞因子，在炎癥相關的腫瘤疾病中扮演重要角色，外周血IL-17與OSCC患者臨床病理特征關系現已得到臨床證實[5]，但關于血清IL-17與OSCC預后關系仍缺乏相關報道。IL-24不僅可誘導癌細胞凋亡、抑制腫瘤血管生成及癌細胞浸潤、轉移，還能提高放、化療敏感性，在抑制乳腺癌、非小細胞肺癌等多種腫瘤細胞生長方面均已得到臨床證實[6-7]，但其在OSCC中的具體機制有待進一步深入研究。基于此，本研究綜合探討血清IL-17、IL-24對OSCC的診斷價值，以期為臨床個性化診療提供循證指導。具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2019年5月我院61例OSCC患者作為研究組，另取73例癌前病變患者作為對照組。2組年齡、性別、吸煙史、飲酒史、基礎疾病史等基本資料均衡可比(P>0.05)，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 選取標準

1.2.1 納入標準 ①研究組均符合《口腔頜面部惡性腫瘤治療指南》[8]中相關標準，并經組織病理學檢查證實為OSCC；②對照組經組織病理學檢查確診為癌前病變；③本研究符合我院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準 ①處于妊娠期或哺乳期等特殊時期女性；②合并食管癌、胃癌等其他惡性腫瘤者；③肝腎等重要臟器器質性病變者；④既往有口腔手術史者；⑤先天發育異常者；⑥精神行為異常者。

1.3 方法

空腹取6 ml肘靜脈血，1000×g離心20 min(離心半徑10 cm)，分離取血清，置于-70 ℃低溫保存。(1)采用酶標儀以酶聯免疫吸附試驗檢測血清IL-17、IL-24水平，具體操作方法：設標準管8管，各孔中均加入50 μl生物素化抗體工作液，酶標板覆膜，37 ℃孵育1.5 h，加樣時注意減少碰觸酶標板底部孔壁，輕晃混勻，防止氣泡產生，加樣時間≤10 min。甩干孔內液體，各孔均加入350 μl洗滌液，浸泡1～2 min，吸去或甩掉酶標板內液體，拍干。重復上述步驟3次。各孔均加入100 μl酶結合物工作液，蓋上覆膜，37 ℃溫育30 min。棄去孔內液體，甩干，重復洗板步驟后加入90 μl底物溶液，覆膜，37 ℃避光孵育15 min至標準孔產生明顯梯度時終止。每孔加入50 μl終止液終止反應。立刻以酶標儀測量計算450 nm波長各孔光密度(OD值)，以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在雙對數坐標紙上繪出四參數邏輯函數標準曲線。(2)采用微粒子化學發光儀以化學發光法檢測血清Cyfra 21-1、SCCAg水平，儀器購自美國雅培公司，試劑盒購自安徽經科生物技術有限公司，嚴格按照儀器、試劑盒說明書操作。

1.4 觀察指標

(1)比較2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平。(2)比較研究組不同臨床病理特征患者血清IL-17、IL-24水平。(3)分析血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg對OSCC的診斷價值。(4)統計OSCC患者1年生存率。(5)比較不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

研究組血清IL-17、Cyfra 21-1、SCCAg水平高于對照組，IL-24水平低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg水平

2.2 OSCC血清IL-17、IL-24與臨床病理特征關系

OSCC不同分化程度、臨床分期、淋巴結轉移患者血清IL-17、IL-24水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 OSCC患者血清IL-17、IL-24水平與臨床病理特征關系

2.3 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價值

ROC顯示，診斷OSCC價值的AUC Cyfra 21-1>SCCAg>IL-17>IL-24，當Cyfra 21-1 Cut-off值為2.07 ng/ml時，診斷敏感性及特異性分別為68.85%、84.93%。見表4，圖1。

表4 血清IL-17、IL-24、Cyfra 21-1、SCCAg診斷OSCC價值

圖1 ROC曲線

2.4 OSCC患者1年生存率

隨訪1年，61例OSCC患者共脫落2例，生存率為84.75%(50/59)，生存曲線見圖2。

圖2 生存曲線

2.5 不同血清IL-17、IL-24水平OSCC患者1年生存率比較

圖3 生存曲線

3 討論

3.1 研究背景

相關研究指出，OSCC的形成與浸潤、炎性刺激及反應損傷修復密切相關[9]。同時，多項流行病學和分子生物學研究也表示[10-11]，炎癥反應可大大提高癌癥發生風險，而慢性炎癥可誘導組織持續損傷，改變組織微環境中存在的炎癥細胞及細胞因子，并與腫瘤細胞遷移、侵襲、增殖有關。因此，早期評估OSSC患者免疫炎癥反應是目前OSSC臨床研究重點。

3.2 血清IL-17水平在OSCC患者中的表達及對預后的預測價值

IL-17具有強大促炎作用及誘導中性粒細胞功能，其與腫瘤的研究現已成為臨床新熱點。現有資料表明[12-13]，乳腺癌、原發性肝癌患者血清IL-17水平過度升高，并隨病情進展而出現明顯變化。而本研究通過酶聯免疫吸附試驗檢測可知，血清IL-17水平在OSCC患者中呈異常高表達，并隨分化程度、臨床分期增加、淋巴結轉移出現增長趨勢，與丁麗娜等[14]研究結果具有一致性，這可能歸因于以下機制：①IL-17可誘導纖維細胞、間質細胞分泌促血管生成因子，上調細胞間粘附分子表達，通過IL-17/血管內皮細胞生長因子(VEGF)通路，刺激轉化生長因子β等其它促血管生成因子產生，進而加快腫瘤新生血管形成[15-16]；②IL-17可刺激腫瘤細胞及腫瘤微環境中樹突狀細胞、成纖維細胞、內皮細胞等過度釋放IL-6，而IL-6反過來可激活致癌信號轉導，刺激轉錄激活因子3產生，從而進一步上調促生長因子、促血管生成基因的表達，促進腫瘤生長，加快腫瘤轉移、分化。初步推斷，血清IL-17在OSCC發展中起到一定作用。進一步經ROC曲線分析可知，與血清Cyfra 21-1、SCCAg等常規腫瘤標志物相比，當cut-off值設定為740.72 pg/ml時，血清IL-17診斷OSCC的特異性可達75.34%，說明血清IL-17對OSCC早期診斷具有一定價值，有望成為診斷OSCC的特異指標，為臨床診治提供新靶點。另外，本研究還發現，血清IL-17水平過度升高可能降低OSCC患者生存率，主要與血清IL-17水平升高干擾正常免疫系統功能，影響治療效果存在一定聯系，推測早期予以有效干預，控制血清IL-17表達可能為改善OSCC患者預后提供新途徑，但具體機制有待今后研究進一步深入。

3.3 血清IL-24水平與OSCC患者臨床病理特征的相關性及對預后的預測價值

IL-24具有廣譜抗瘤活性，可抑制多種腫瘤細胞體內外增殖能力，刺激機體抗腫瘤免疫反應功能，發揮雙重抗腫瘤作用[17-18]。本研究通過對比表明，OSCC患者血清IL-24水平低于癌前病變患者，與史亦南[19]研究結果不一致，這可能是由于本研究采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清IL-24，而其則采用實時定量聚合酶鏈反應檢測同一患者腫瘤組織。提示血清IL-24作為一種新型抑癌基因，其水平過度下調可能參與OSCC的發生、發展過程。進一步經Spearman相關性分析，血清IL-24與OSCC患者分化程度存在正相關關系，與臨床分期、淋巴結轉移存在負相關關系，分析機制在于，血清IL-24水平上調不僅可抑制腫瘤iNOS表達，調控腫瘤細胞周期，還能抑制IL-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥因子表達，刺激機體產生抗腫瘤免疫應答，反之，血清IL-24水平下降一定程度則會激活腫瘤基因，促進腫瘤細胞生長。最后，通過KM曲線可知，血清IL-24水平升高可能提高OSCC患者1年生存率，機制可能在于血清IL-24水平高表達通過調控MAPK/ERK、PI3K-AKT、NF-κB、JNK及AP-1等多條信號通路，可上調促凋亡蛋白Bax基因的表達，活化Caspase-3，從而阻斷腫瘤細胞周期，進一步誘導腫瘤細胞凋亡，控制腫瘤細胞增長。由此可見，早期檢測血清IL-24水平，有望為OSCC治療、預后評估提供理論依據。

綜上可知，血清IL-17、IL-24水平均在OSCC患者中呈異常表達，早期檢測可為臨床OSCC診斷、實施個性化治療、評估預后提供新思路。