microRNA-106b-5p在胃癌中的表達及與病理分級和預后的相關性研究

辛瑞娟,李智勇,曹貞子,姚 麗,游顏杰,白飛虎

胃癌的發生發展是一個以癌基因和抑癌基因的遺傳和表觀遺傳學改變為特征的復雜的多步驟過程[1]，但是確切的分子機制仍在研究中。microRNA(微RNA或miRNA)是一種小型非編碼RNA，近年大量的研究表明miRNA在腫瘤的發生、發展中起到重要作用，主要作用機制是通過影響其下游的靶基因，調控細胞增殖、分化、凋亡等功能[2]。miR-106b 定位于人染色體7q22 Mcm7基因內含子13上，是miR-106b～25基因簇家族成員之一，包括miR-106b、miR-25及miR-93 三種基因[3]，其中miR-106b在不同惡性腫瘤中具有不同的作用，例如在腎癌[4]、肝癌[5]及結直腸癌[6]中均為高表達，起到癌基因的作用；而在膠質細胞癌[7]中為低表達，在腫瘤發生、發展中起抑制作用。那么在胃癌中又是如何表達的呢，本研究主要對miR-106b在胃癌組織中的表達與胃癌病理分期及預后之間的關系進行了初步的探討。

1 資料與方法

1.1 組織標本:25例胃癌患者及其對應的癌旁組織均來自2017年1月-2017年12月寧夏回族自治區人民醫院胃腸外科手術標本，均行病理檢查證實為胃腺癌。所有胃癌標本及相應癌旁組織均在離體后10分鐘內收集，存放在RNAlater(Thermo Fisher Scientific,Inc 美國)內，先4 ℃冰箱過夜，后-80 ℃冰箱凍存。該實驗通過了寧夏回族自治區人民醫院倫理委員會的批準，所有的組織標本全部征得了患者知情同意。

1.2 納入及排除標準：納入標準。①符合《胃癌診斷標準》[8]中有關診斷標準，且愿意配合研究；均首次診斷為胃癌，胃部無既往手術史或放化療史，并經術后病理學診斷確診；②臨床資料齊全者；③生存期限>3個月。排除標準。①中途退出研究者；②精神異常者；③合并其他惡性腫瘤患者；④合并先天免疫功能缺陷或其他遺傳性疾病，嚴重肝腎功能障礙，嚴重慢性或急性感染性疾病患者。

1.3 TNM分期：根據美國癌癥聯合委員會(AJCC)腫瘤淋巴結轉移(TNM)標準(第八版)分期[9]。

1.4 預后情況:所有患者術后接受隨訪，隨訪截至2020年6月。以手術日開始末次隨訪時間計算生存時間，研究結束、失訪及其他原因死亡作為終點事件。

1.5 統計學方法:采用SPSS 19.0統計軟件,以胃癌組織miR-106b相對表達量的均值為臨界值，miR-106b的表達量采用中位數(M)和四分位數間距(Q)表示，與臨床病理特征之間的關系采用Mann-Whitney秩和檢驗。Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rankχ2檢驗,以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 miR-106b在胃癌組織及癌旁組織中的表達:miR-106b在胃腺癌組織中的表達水平為(0.9259，1.4216)，在癌旁組織中的表達為(0.2155，0.3568)，胃癌組織中miR-106b的表達水平顯著高于癌旁組織(Z=-3.463，P<0.05)。

2.2 胃癌組織中miR-106b的表達水平與胃癌的臨床病理指標的關系:統計結果顯示，miR-106b表達水平在臨床TNM分期Ⅲ/Ⅳ期高于Ⅰ/Ⅱ期(P<0.05)，淋巴結轉移組顯著高于無淋巴結轉移組(P<0.05)；miR-106b表達與患者性別、年齡、分化程度無關(P>0.05),見表1。

表1 胃癌組織中miR-106b的表達水平與胃癌的臨床病理指標

2.3 miR-106b表達對胃癌患者預后的影響:應用Kaplan Meier法計算胃癌患者的生存率。患者腫瘤組織中miR-106b表達不同，造成患者生存時間不同。生存曲線顯示高表達組的生存時間較低表達組有降低的趨勢，但是差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討論

惡性腫瘤之所以存在治療上的困難和預后不良的問題，究其原因主要在于其易侵襲性和轉移能力強，這也是胃癌導致死亡的主要原因。如果存在一種方式可以阻止胃癌的侵襲與轉移，那么對于胃癌的治療與預后將具有重大意義。MicroRNA的發現為腫瘤的研究打開了新的視野，目前大量研究證實，MicroRNA可以作為新的基因調控形式，參與調控腫瘤的發生、發展[10]。

項目組前期通過microRNA array在胃癌細胞中篩選出了153個表達異常的miRNA，包括74個表達上調的miRNA和79個表達下調的miRNA,其中miR-106b就在其中，且表現出明顯的差異性表達[11]，通過查閱文獻我們發現它在多種惡性腫瘤中也有異常表達。miR-106b在非小細胞肺癌中高表達[12]，且miRNA-106b表達與腫瘤淋巴結轉移分期、不良預后密切相關；在乳腺癌中[13]，miR-106b的表達量明顯高于鄰近正常組織，在乳腺癌細胞中也證實了其表達量明顯高于乳腺正常細胞，且研究發現它可以靶向FUT6促進人類乳腺癌細胞遷移、侵襲和增殖；在肝癌中[14]，下調miR-106b的表達后可以明顯抑制肝癌細胞的生長，增加肝癌細胞的凋亡，且其作用機制可能與靶向Zbtb7a有因果關系；而在胃癌相關成纖維細胞[15]和食管癌[16]中miR-106b可以通過靶向PTEN促進細胞遷移和侵襲。由此可見，miR-106b在腫瘤中的表達和作用機制是不同的，具體的分子機制還有待進一步研究。

本項目研究選擇了25對胃癌組織及癌旁組織進行了初步驗證，結果表明miR-106b在胃癌組織中高表達，它的表達水平與胃癌患者淋巴結轉移、TNM分期有關，即TNM分期越高及有淋巴結轉移的患者，miR-106b的表達越高，差異有統計學意義，這一結果與Zhang[17]等的研究結果是一致的。生存分析結果顯示腫瘤組織中miR-106b表達水平較低患者的生存時間較表達水平較高患者的生存時間有升高的趨勢，但是差異無統計學意義，分析原因主要是胃癌術后的生存期較其他腫瘤相對較高，本文隨訪時間較短，因此導致生存時間在統計上的偏差，如果進一步延長隨訪時間，可能結果會更有意義。由此我們推測，miR-106b可能參與了胃癌的轉移過程，對于胃癌患者的預后有一定的參考意義。

本項目也存在一定的不足，首先在實驗設計上，樣本量較少，還需進一步收集大樣本進一步驗證。其次如果能收集轉移的淋巴結組織進行研究會更有意義，主要原因是淋巴結清掃較多，數量較大，一一驗證存在一定的困難。最后是隨訪時間的局限，后續會跟進隨訪，爭取做到5年甚至10年的生存期研究。