高效液相色譜法測定奧培米芬片中奧培米芬的含量

鐘浩，陶庭先，吳俊，丁正霞，崔海鞠，章靖芳

（宣城職業技術學院醫護學院，宣城 安徽242000）

奧培米芬是一種有組織選擇性作用的雌激素受體調節劑，通過與雌激素受體α和β結合，激活某些組織中雌激素通路和阻斷其他雌激素通路，臨床上用于治療女性中至重度性交困難，以緩解一些女性因絕經期激素水平下降導致的外陰和陰道內萎縮［1-3］。該藥物上市劑型為片劑，商品名：OSPHENATM，規格60 mg，目前尚未見在中國生產或進口。各國藥典 （Ch.P、BP、USP、JP、E.P.）均未收載。關于奧培米芬的專利對其化合物、合成方法、劑型及質量控制均申請了相應的保護。本研究通過參考類似藥物（如雷洛昔芬）的含量檢測方法［4-5］，不斷地改進和探索，開發了一個合理的、有效的測定奧培米芬片中奧培米芬含量的方法，現進行方法驗證，以補充國內對奧培米芬片質量控制方法學的研究成果。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）。奧培米芬對照品（批號F-061622，純度99.9%）、雜質G（批號JF-061622-G，純度99.9%）、雜質E（批號JF-061622-E，純度99.9%）、雜質H（批號JF-061622-H，純度99.9%） （美國QCC公司）；奧培米芬片（批號011531、011506）（日本野義制藥公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Agilent TC-C18（2） （250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，檢測波長254 nm，柱溫30℃，流速1.0 ml／min，進樣量20μl，運行時間30 min，水（磷酸調pH為3.0）-乙腈-甲醇溶液（25∶37.5∶37.5）為流動相。

2.2 對照品溶液的制備 取奧培米芬對照品適量，用甲醇定量稀釋制成每1 ml含奧培米芬50μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品研細，取適量（約相當于奧培米芬10 mg），精密稱定，置于200 ml容量瓶，加甲醇適量，超聲10 min，用甲醇稀釋至刻度，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性試驗 測定溶劑（甲醇）、供試品溶液（含奧培米芬50μg／ml）、雜質G定位（1 μg／ml）、雜質E定位（1μg／ml）、雜質H定位（1μg／ml）、系統適用性溶液（含奧培米芬50 μg／ml、雜質H 1μg／ml），按色譜條件注入色譜儀中測定，溶劑不干擾測定，雜質與主成分完全分離，不干擾測定，專屬性強。結果見圖1、圖2，系統適應性數據見表1。

圖1 分離度試驗HPLC圖

圖2 系統適用性試驗HPLC圖

表1 系統適用性數據

2.4.2 濾膜吸附試驗 取本品細粉 （批號011531），約39 mg，精密稱定，置于200 ml量瓶中，加入甲醇適量，超聲10 min用流動相稀釋至刻度，搖勻，分成2份，1份用微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續濾液；另1份離心，取上清液。另取對照品溶液過濾，考察濾膜對本品含量測定的影響。結果表明：對照品溶液過濾前后及供試品溶液過濾與離心，峰面積及比值無明顯差異，表明本法供試品溶液可采用微孔濾膜（0.45μm）過濾。見表2。

表2 濾膜吸附數據

2.4.3 重復性 取同一批樣品（批號011531），精密稱定，配制6份供試品溶液，在上述色譜條件下測定含量。結果奧培米芬的RSD值為0.52%，表明該方法的重復性良好。

2.4.4 溶液穩定性 取奧培米芬供試品溶液，室溫避光放置，在上述色譜條件下于0、2、4、6、8、12 h測定：結果奧培米芬峰面積RSD值為0.06%，表面供試品溶液室溫避光放置12 h內穩定。

2.4.5 線性 取奧培米芬對照品約10 mg，精密稱定，置于同一20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液母液。分別精密量取線性溶液母液1、2、2、5、3、5 ml，分別置于50、50、25、50、25、25 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為各相關線性溶液，分別取上述溶液20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以進樣濃度X（mg／ml）和峰面積Y（A）進行線性回歸。計算回歸方程，回歸方程為Y＝64 289.198X-2.764（r＝1.000，n＝6），結果表明奧培米芬在0.010 1～0.100 7 mg／ml范圍內呈良好的線性關系，結果見表3。

表3 線性范圍試驗結果

2.4.6 回收率試驗 供試品溶液：取本品（批號011531）研細，取適量（約相當于奧培米芬10 mg），精密稱定，置于200 ml容量瓶，加甲醇適量，超聲10 min，用甲醇稀釋至刻度。

對照品溶液：精密稱取奧培米芬對照品約10 mg，置于20 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，精密量取1 ml置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，作為對照品溶液。

加標供試品溶液：按80%、100%、120%3個濃度梯度，分別向供試品溶液中精密加入奧培米芬對照品40、50、60μg，每個濃度3份樣品。結果見表4，結果表明回收率良好。

表4 回收率試驗結果

2.4.7 耐用性 取系統適用性溶液、奧培米芬供試品溶液，考察在不同柱溫、檢測波長、色譜柱、緩沖鹽的pH值、流速的條件下對含量檢測的影響。結果表明：試品溶液分別在改變溫度、緩沖鹽的pH值、流速、流動相比例、檢測波長及不同色譜柱的條件下，主峰拖尾因子在0.9～1.1之間，含量測定結果變化很小，塔板數均大于9 000，說明本法的耐用性良好。

2.4.8 不同批次樣品測定 取本品2個批號，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，各取20μl進樣，測定含量，每個批號配制3個，測3次，取平均值，結果樣品 （批號011531） 含量分別為99.8%、99.6%和99.2%，平均含量99.5%；樣品（批號011506）含量分別為99.4%、99.6%和99.4%，平均含量99.4%。

3 討論

奧培米芬作為新一代的雌激素受體調節劑，在2013年獲得美國FDA批準上市，因此該藥物還在專利保護階段，藥品標準只有企業標準，各國藥典均未收錄此藥物的含量測定方法，所以本研究選取該藥也是為了探究一個適合準確的方法測定奧培米芬的含量。

基于目前含量測定多采用HPLC來測定，本研究也采取HPLC來測定奧培米芬片中奧培米芬的含量，在藥品的含量測定當中，樣品的前處理方法尤為重要，樣品處理后其目標成份誤差應該符合規定，回收率要符合規定，所以本研究考察了奧培米芬對照品溶液微孔濾膜過濾前后及供試品溶液過濾與離心后其目標峰的峰面積，并計算RSD。實驗證明奧培米芬溶液過濾后目標成分誤差符合規定，因微孔濾膜過濾法使用簡單、快捷、無毒衛生，適合快檢。所以本試驗樣品擬采用微孔濾膜過濾［6-8］。

在藥品的含量測定中儀器參數的變化很可能會對測定結果產生影響，所以本研究考察了在不同柱溫、檢測波長、色譜柱、pH值緩沖鹽、流速的條件下對奧培米芬含量檢測的影響，結果表明：試品溶液分別在改變溫度、pH值、流速、流動相比例、檢測波長及不同色譜柱的條件下，主峰拖尾因子在0.9～1.1之間，含量測定結果變化很小，塔板數均大于9 000，說明本法的耐用性良好。方法通過驗證。