CA125、纖維蛋白原、纖維蛋白降解產(chǎn)物及D-二聚體在肺結(jié)核診斷中的價(jià)值

李婕，張鵬，楊正海，李小寧

（皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院檢驗(yàn)科，安徽 蕪湖241001）

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引起的呼吸系統(tǒng)傳染性疾病，此病主要通過(guò)飛沫傳播，臨床以咳嗽、咳痰、發(fā)熱、盜汗等癥狀為主要表現(xiàn)。有肺結(jié)核家族史、肺結(jié)核接觸史、外出打工等因素為影響肺結(jié)核高患病率的危險(xiǎn)因素。肺結(jié)核臨床確診的金標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)檢查陽(yáng)性或者組織病理檢查發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌。但在實(shí)際工作中痰培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率有限，而且結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)需要4～6周，雖然一線(xiàn)抗結(jié)核治療藥物異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇等使疾病治愈率得到可觀(guān)的提升，但由于其診斷滯后性等不足的存在，往往在一定程度上延誤了治療，增加并發(fā)癥的發(fā)生率，從而影響治療效果。肺結(jié)核尤其是非典型的肺結(jié)核的早期診斷、早期治療顯得尤為重要。研究發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者血清中CA125有不同程度的升高，炎癥性間皮細(xì)胞增殖可誘導(dǎo)患者CA125的分泌［1］。部分患者在罹患肺結(jié)核后體內(nèi)容易出現(xiàn)高凝狀態(tài)，進(jìn)而導(dǎo)致相關(guān)指標(biāo)的改變，其中凝血指標(biāo)改變最明顯的就是纖維蛋白原（Fib）和D-二聚體（D-D）［2］。肺結(jié)核患者為何會(huì)出現(xiàn)高凝狀態(tài)，有報(bào)道稱(chēng)與結(jié)核分枝桿菌導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有關(guān)［3］。本研究以2018年6月至2020年4月74例肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象，探討CA125、部分凝血指標(biāo)在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2018年6月至2020年4月收治的74例肺結(jié)核的患者作為研究對(duì)象，另選取我院同期病理診斷為原發(fā)性肺癌患者76例為觀(guān)察組，以及同期我院體檢的健康志愿者79例為對(duì)照組。其中肺結(jié)核患者中男39例，女35例，年齡23～69歲，平均年齡（48.5±9.2）歲；肺癌患者中男45例，女31例，年齡47～76歲，平均年齡（61.0±6.7）歲；健康志愿者中男44例，女35例，年齡34～69歲，平均年齡（49.0±7.6）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 肺結(jié)核納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）痰結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性； （2）初診未進(jìn)行過(guò)抗結(jié)核藥物治療；（3）未結(jié)合其他基礎(chǔ)疾病。肺結(jié)核排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）除痰以外標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性；（2）經(jīng)過(guò)抗結(jié)核藥物治療。肺癌納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理診斷為肺癌；（2）初診未進(jìn)行過(guò)化療、放療或者手術(shù)治療； （3）未結(jié)合其他基礎(chǔ)疾病。肺癌排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有其他基礎(chǔ)疾病；（2）經(jīng)過(guò)手術(shù)、放療或者化學(xué)藥物治療等。健康對(duì)照者納入標(biāo)準(zhǔn)： （1）無(wú)基礎(chǔ)疾病，既往身體健康，且納入研究2周內(nèi)無(wú)任何不適癥狀； （2）體檢指標(biāo)均無(wú)異常；（3）無(wú)家族遺傳疾病史。健康對(duì)照者排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往患有基礎(chǔ)疾病或者既往體健但納入研究2周內(nèi)出現(xiàn)身體不適癥狀； （2）體檢有異常指標(biāo)；（3）有家族遺傳疾病史。

1.3 儀器和試劑 CA125測(cè)定試劑盒（美國(guó)雅培公司），F(xiàn)ib、纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）、D-D測(cè)定試劑盒（上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司），雅培Axsym i-2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國(guó)雅培公司），SYSMEX CA-1500全自動(dòng)凝血分析儀（希森美康醫(yī)用電子上海有限公司）。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法檢測(cè)血清CA125 用不含抗凝劑、含促凝膠的真空采血管采集患者靜脈血，輕輕顛倒混勻6～8次，4 000 r／min離心10 min，得到上層血清，在雅培Axsym i-2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，40 ml血清標(biāo)本和生物素化抗CA125單克隆抗體和釕（Ru）標(biāo)記的抗CA125單克隆抗體混勻，再加入鏈毒親和素包被的微粒，通過(guò)生物素與鏈霉親和素包的反應(yīng)，復(fù)合物結(jié)合到微粒上。微粒通過(guò)磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)則被洗去。最后通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定CA125含量。CA125實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間為＜35.0 U／ml。

1.4.2 凝固法檢測(cè)血漿Fib 用含有1∶9的0.109 mol／L枸檬酸鈉抗凝液真空采血管采集患者靜脈血，輕輕顛倒混勻6～8次，4 000 r／min離心10 min，收集上層黃色透明血漿。每瓶凝血酶凍干粉試劑加入瓶標(biāo)定量蒸餾水，輕搖溶解。根據(jù)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，SYSMEX CA-1500全自動(dòng)凝血分析儀檢測(cè)樣本Fib含量。Fib實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間為1.8～4.0 g／L。

1.4.3 膠乳免疫比濁法檢測(cè)血漿FDP和D-D 血液樣本采集和血漿提取步驟同1.4.2，將不同濃度的FDP、D-D校準(zhǔn)品用瓶標(biāo)示量蒸餾水復(fù)溶，室溫靜置5 min后輕旋混勻，在儀器上測(cè)定各濃度吸光度差值，儀器自動(dòng)制作校準(zhǔn)曲線(xiàn)。將待測(cè)樣本置于SYSMEX CA-1500全自動(dòng)凝血分析儀相應(yīng)位置后進(jìn)行測(cè)定FDP和D-D，儀器自動(dòng)計(jì)算并輸出測(cè)定結(jié)果。FDP和D-D實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間分別為＜5.0μg／ml和＜0.5μg／ml。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線(xiàn)分析4項(xiàng)指標(biāo)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 各組間血清CA125、血漿Fib、FDP、D-D表達(dá)水平比較 肺結(jié)核和肺癌患者CA125、Fib、FDP、D-D表達(dá)水平均高于健康對(duì)照組（P＜0.05），肺結(jié)核患者CA125、FDP表達(dá)水平均高于肺癌組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組血清CA125、血漿Fib、FDP、D-D水平比較

2.2 各指標(biāo)檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值 ROC曲線(xiàn)結(jié)果顯示，血清CA125的ROC曲線(xiàn)下面積（AUC）值為0.875（95%CI：0.817～0.933，P＜0.01），靈敏度70.3%，特異度98.7%；血漿FDP的AUC值為0.903（95%CI：0.854～0.953，P＜0.01），靈敏度82.4%，特異度88.6%；血漿Fib的AUC值為0.758（95%CI：0.675～0.840），靈敏度71.6%，特異度82.3%；血漿D-D AUC值為0.805（95%CI：0.733～0.877）（P＜0.01），靈敏度為60.8%，特異度為94.9%；4個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)AUC值為0.963（95%CI：0.934～0.992，P＜0.01），靈敏度93.2%，特異度93.7%。見(jiàn)圖1、表2。

圖1 不同檢測(cè)指標(biāo)對(duì)肺結(jié)核診斷的ROC曲線(xiàn)分析

表2 不同檢測(cè)指標(biāo)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值分析

3 討論

結(jié)核分枝桿菌是耐干燥、對(duì)酸堿環(huán)境有抵抗力的專(zhuān)性需氧菌，通過(guò)空氣中飛沫傳播，可以侵犯全身各個(gè)功能臟器，以引起肺結(jié)核最為常見(jiàn)。機(jī)體免疫力下降的人群是結(jié)核分枝桿菌的易感人群。人通過(guò)上呼吸道吸入結(jié)核分枝桿菌后，其在肺組織內(nèi)迅速繁殖，引起局部或者全身的免疫炎癥反應(yīng)。傳統(tǒng)診斷肺結(jié)核的方法有痰涂片、痰培養(yǎng)，但傳統(tǒng)方法在診斷效果和時(shí)間上存在著不足。隨著分子技術(shù)的快速發(fā)展，原本定義為腫瘤標(biāo)記物的CA125被發(fā)現(xiàn)在肺結(jié)核的早期輔助診斷中存在著一定的意義，通過(guò)檢測(cè)CA125可以幫助實(shí)現(xiàn)肺結(jié)核的更早、更有效地診斷。CA125主要在胎兒肺中合成，存在于氣管、支氣管、細(xì)支氣管及末端細(xì)支氣管中，作為參與促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)的表面糖蛋白。其在肺癌、肺結(jié)核以及肺炎中水平升高的原因與支氣管上皮細(xì)胞破壞有關(guān)［1］。左楊松［4］在痰菌陰性肺結(jié)核和肺部感染患者的對(duì)比研究中發(fā)現(xiàn)，菌陰性肺結(jié)核患者血清CA125的含量表達(dá)顯著高于肺部感染患者，說(shuō)明CA125有利于痰菌陰性肺結(jié)核的診斷。血清CA125不僅在菌陰性肺結(jié)核的診斷及預(yù)后評(píng)估中具有重要的參考價(jià)值，還在肺結(jié)核與非肺結(jié)核疾病的臨床鑒別診斷中發(fā)揮作用。活動(dòng)性肺結(jié)核患者體內(nèi)CA125水平顯著增加對(duì)肺結(jié)核的診斷也具有較高的敏感度與特異度。CA125水平動(dòng)態(tài)變化可作為觀(guān)察肺結(jié)核合并結(jié)核性胸膜炎患者病情進(jìn)展、病變恢復(fù)和評(píng)價(jià)療效的指標(biāo)［5］。Fib是人體中纖維蛋白的前體物質(zhì)，由肝臟分泌，本質(zhì)是具有凝血功能的活性蛋白。D-D是交聯(lián)纖維降解的特異性產(chǎn)物［6］。研究表明，肺結(jié)核存在凝血功能紊亂現(xiàn)象，并引起了臨床關(guān)注，結(jié)核患者體內(nèi)D-D和Fib水平相對(duì)比健康人群增高［7-8］。結(jié)核分枝桿菌的代謝產(chǎn)物以及結(jié)核性滲出大量纖維蛋白導(dǎo)致纖維化形成，會(huì)使得胸膜黏連增厚，引起胸膜炎癥。本研究納入健康體檢者作為基礎(chǔ)對(duì)照組，分別采用電化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)法、凝固法、膠乳免疫比濁法檢測(cè)肺結(jié)核患者及肺癌患者體內(nèi)血清CA125、血漿Fib、FDP、D-D含量，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)這4項(xiàng)指標(biāo)值均顯著高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明CA125、Fib、FDP、D-D 4項(xiàng)指標(biāo)在肺癌和肺結(jié)核患者中表達(dá)增高，對(duì)肺癌和肺結(jié)核診斷可能具有輔助價(jià)值。在對(duì)肺結(jié)核和肺癌組的指標(biāo)對(duì)比中發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核組的CA125、FDP指標(biāo)結(jié)果均高于肺癌患者。說(shuō)明在檢測(cè)患者血清CA125和FDP指標(biāo)水平有助于肺結(jié)核與肺癌的鑒別診斷，血清CA125和FDP均異常增高。通過(guò)ROC曲線(xiàn)結(jié)果，血清CA125的AUC值為0.875，血漿FDP、Fib以及D-二聚體的AUC值分別為0.903、0.758、0.805。再通過(guò)計(jì)算靈敏度和特異度計(jì)算，發(fā)現(xiàn)靈敏度最高的為FDP（82.4%），特異度最高的為CA125（98.7%）。最后將4個(gè)指標(biāo)納入肺結(jié)核的診斷模型中，得出的預(yù)測(cè)概率進(jìn)行ROC曲線(xiàn)分析，得到各指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)AUC值、靈敏度、特異度，發(fā)現(xiàn)該4項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、特異度均是最高的。臨床在考慮腫瘤的同時(shí)，應(yīng)該要排除肺結(jié)核疾病的可能，避免出現(xiàn)漏診現(xiàn)象。當(dāng)輔助實(shí)驗(yàn)室檢查CA125、FD、Fib以及D-D指標(biāo)異常時(shí)，臨床醫(yī)師還要警惕患者結(jié)核病的可能。

綜上所述，在肺結(jié)核診斷過(guò)程中，因?yàn)樘嫡医Y(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)周期長(zhǎng)，需要完善患者其他輔助檢查，CA125和FDP在肺結(jié)核患者中的表達(dá)水平顯著高于肺癌患者，CA125、FD、Fib以及D-D指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可能會(huì)幫助臨床醫(yī)生盡早提高對(duì)肺結(jié)核的診斷效率。