乳腺癌患者血漿D-二聚體水平與乳腺癌組織中Ki-67表達的相關性

蔣鳳蓮 楊偉洪 黃文宇

乳腺癌是女性中最常見的癌癥類型,得益于目前先進的檢查方法及治療手段,近年來死亡率已大大降低；但是,它仍然是許多國家婦女死于癌癥的第二大主要原因,僅次于肺癌。臨床發現癌癥和高凝狀態之間存在相關性,體現在腫瘤細胞的血管生成、進展、轉移性擴散中,晚期癌癥D-二聚體水平升高,這是由于交聯纖維蛋白降解引起的；表明纖維蛋白溶解和止血的整體激活［1］。腫瘤細胞的異常增殖和遷移是腫瘤進展期間腫瘤病理學的標志,有關腫瘤細胞增殖活性和遷移的研究促進了對腫瘤生物學行為的理解,并為腫瘤的診斷,治療和預后提供了臨床證據［2］,Ki-67 是位于10 號染色體上的一個基因,可以檢測到增殖細胞核基質中的核蛋白,其功能已證明與有絲分裂有關,特別是與腫瘤細胞的增殖密切相關［3］,本研究探討乳腺癌患者血漿D-二聚體水平與乳腺癌組織中 Ki-67 表達及其與臨床特征的關系,希望在臨床工作中對乳腺癌患者的病情與預后評估提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年10月～2019年10月50例就診于中山市博愛醫院的乳腺癌患者,均為女性且臨床資料完整,年齡30～78 歲,平均年齡(50.35± 12.86)歲,所有患者均依據臨床、病理檢查結果進行確診。收集所有患者臨床資料,包括：絕經狀態、年齡、TNM、T,淋巴結轉移,組織學分級、Ki-67 表達。排除標準：①合并存在有其他惡性腫瘤疾病；②在3 個月 內有改變了凝血因子情況,例如華法林治療,血栓發作,凝血障礙,肝病,妊娠,重大創傷,嚴重感染；③在 近3 個月內進行了手術。

1.2 檢測方法

1.2.1 D-二聚體檢測方法 所有研究對象抽取靜脈血3 ml 放于抗凝管中,檢測血漿D-二聚體水平,血漿D-二聚體水平正常參考值為＜0.5 mg/L。

1.2.2 Ki-67 檢測方法 將乳腺癌標本在10%福爾馬林中固定48 h,石蠟包埋,并使用Ki-67 抗體切成4 μm薄片用于SP 免疫組化法(IHC)染色,磷酸鹽緩沖鹽水用作陰性對照。在光學顯微鏡下分析Ki-67 染色,基于腫瘤細胞的染色程度和染色反應的強度來評估IHC染色結果。

1.3 觀察指標及判定標準

1.3.1 血漿D-二聚體水平與臨床病理特征的關系 比較不同絕經狀態、TNM、T、淋巴結轉移、組織學分級、Ki-67 表達患者的血漿D-二聚體水平。

1.3.2 Ki-67 表達情況與臨床病理特征的相關性 比較不同絕經狀態、TNM、T、淋巴結轉移、組織學分級患者Ki-67 表達與臨床病理特征的相關性。

1.3.3 判定標準 按切片中細胞有無黃棕色區域判定為陽性標準,Ki-67 的細胞染色陽性表達率≥14%視為 Ki-67 高表達,低于此標準視為低表達。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用t 檢驗；Ki-67 與臨床特征間的相關性應用Spearman 相關分析。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌患者中血漿D-二聚體水平與臨床病理特征的關系 絕經前后患者的血漿D-二聚體水平比較差異無統計學意義(P＞0.05)；患者TNM 越高血漿D-二聚體水平越高,差異有統計學意義(P＜0.05)；患者T越高D-二聚體水平越高,差異有統計學意義(P＜0.05)；有淋巴結轉移患者血漿D-二聚體水平高于無轉移患者,差異有統計學意義(P＜0.05)；患者組織學分級越高D-二聚體水平越高,差異有統計學意義(P＜0.05)；Ki-67 高表達患者D-二聚體水平高于低表達患者,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 乳腺癌患者組織中Ki-67 表達與臨床病理特征的相關性分析 50 例患者中Ki-67 低表達23 例,高表達27 例,經Spearman 相關分析顯示,乳腺癌組織中Ki-67 表達情況與患者絕經狀態無相關性(r=0.171,P＜0.05),與TNM、T、淋巴結轉移、組織學分級呈正相關(r=0.364、0.411、0.395、0.556,P＜0.05)。見表1。

表1 50 例乳腺癌患者血漿D-二聚體水平、Ki-67 表達與臨床病理特征的關系(,n)

表1 50 例乳腺癌患者血漿D-二聚體水平、Ki-67 表達與臨床病理特征的關系(,n)

注：不同絕經狀態、TNM、T、淋巴結轉移、組織學分級、Ki-67 患者的血漿D-二聚體水平比較,P＜0.05

3 討論

血漿D-二聚體是通過血纖蛋白溶酶降解血纖蛋白而產生的,其水平隨著血纖蛋白溶解的增強而增加,在許多臨床情況下,例如吸煙、感染、懷孕、老年、外傷、腫瘤等,血漿D-二聚體水平升高［4］,D-二聚體升高可能由癌癥中的組織因子(TF)表達介導［5］,TF 表達增加會誘導過量的纖維蛋白形成,并導致靜脈血栓栓塞癥(VTE)和癌癥患者的D-二聚體水平升高。Diao 等［6］觀察到,遠處轉移的胃癌患者,尤其是內臟轉移的患者血漿D-二聚體水平顯著升高。實際上,其建議D-二聚體是胃癌患者TNM 的有前途的預測指標。Lee等［7］報道,大腸癌患者血漿D-二聚體和纖維蛋白原降解產物水平的升高與臨床TNM 顯著相關。此外,在大腸癌患者中,術前血漿D-二聚體水平與更大的T 和淋巴結轉移有關［8］。

Dirix 等［9］進行的類似研究,在比利時的30 例乳腺癌患者中,發現D-二聚體水平與腫瘤負荷和進展動力學相關,并得出結論,D-二聚體水平與腫瘤負荷呈正相關(P=0.001)；Révillion 等［10］在印度尼西亞對79 例 乳腺癌患者進行的另一項研究得出的結論是癌癥血漿D-二聚體水平與患者的TNM 呈正相關；在印度,Dent等［11］對90 例乳腺癌患者進行的一項類似研究得出的結論是,D-二聚體水平升高標志存在淋巴管浸潤、腫瘤轉移。本研究結果顯示,乳腺癌患者隨著腫瘤TNM的升高、原發腫瘤分期越高腫瘤負荷越大、腫瘤組織學分化越差,D-二聚體的水平在升高,有淋巴結轉移者D-二聚體的水平高于無轉移者,提示隨著腫瘤的增殖、浸潤和轉移,D-二聚體的水平也升高,根據上述研究,本研究證實了D-二聚體水平與乳腺癌發生之間存在關系。

自從1991 年Gerdes 等［12］首次將其作為一種非組蛋白以來,Ki-67 作為一種重要的腫瘤增殖標記就受到了越來越多的關注,并且與腫瘤的發展、進展、侵襲、轉移和預后高度相關。它僅在細胞周期的增殖和合成階段在增殖細胞核中表達,可以從G1 到M 期檢測到,而在靜止G0 期則不能檢測到,它已被用作癌癥的增殖標記［13］。鄭克文等［14］已經揭示了在腎癌細胞中敲低Ki-67 可以顯著抑制癌細胞增殖并促進細胞凋亡,表明Ki-67 可能通過影響癌細胞的生長和凋亡而參與腎癌的進展。此外,已證明在膀胱癌細胞中敲除Ki-67可抑制腫瘤生長［15］。本研究結果表明,乳腺癌組織Ki-67 表達水平與癌癥TNM 呈正相關。此外,Ki-67表達水平與T 和淋巴結轉移呈正相關,同時Ki-67 與腫瘤組織學分化之間也發現了顯著的關系,因為分級更高的腫瘤具有更高水平的細胞增殖,因此比其他分級的腫瘤更具侵襲性,表明Ki-67 可能影響乳腺癌細胞的惡性程度,可能Ki-67 高表達影響癌細胞的增殖和遷移,可見Ki-67 高表達在乳腺癌的發生發展中很重要。

腫瘤轉移過程涉及多種腫瘤-宿主相互作用［16］,為了生存,轉移的癌細胞必須離開原發性腫瘤,遷移到淋巴系統中,在轉移部位建立新的血供。纖維蛋白重塑參與大部分轉移步驟,在惡性疾病中纖維蛋白溶解活性上調,而在轉移性疾病中纖維蛋白溶解活性升高。纖維蛋白被纖溶酶原激活劑系統降解為D-二聚體,這是一種酶促級聯反應,對于降解侵入淋巴管腔所需的細胞外基質蛋白至關重要。淋巴結轉移患者中升高的D-二聚體可能反映了在存在淋巴管浸潤的情況下系統性或腫瘤性凝血激活和纖維蛋白溶解。本研究中,Ki-67 高表達患者D-二聚體水平高于低表達者,兩者存在相關性,本研究的結果與以上發現得到了證實,這表明Ki-67 可能通過影響癌細胞的增殖和遷移而參與了乳腺癌的發展,而腫瘤轉移過程中由于交聯纖維蛋白降解引起的D-二聚體水平升高。

綜上所述,D-二聚體水平升高與TNM、T、淋巴結轉移、組織學分級、Ki-67 表達相關,Ki-67 表達與TNM、T、淋巴結相關,D-二聚體水平與Ki-67 表達相關,臨床工作中監測乳腺 D-二聚體和Ki-67 表達有助于對患者病情與預后的評估。