烏黃潤腸丸治療阿片相關性便秘的藥效及安全性研究

李顯勇 陳露 蔣祺 唐平 周旭峰 代沙 周露 蘭海 阮秀娟 顧國棟 李琪

疼痛是腫瘤患者第五大體征,依據世界衛生組織(WHO)癌痛三階梯止痛指南,阿片類藥物是治療中重度疼痛重要藥物,而阿片類藥物相關性便秘(opioidinduced constipation,OIC)是最常見的阿片類藥物相關性胃腸道不良反應。既往研究顯示,OIC 可導致腫瘤患者治療和生活質量下降。OIC 比疼痛更易導致患者抑郁情緒,致使患者寧愿忍受疼痛,并放棄長期使用阿片類藥物止痛治療,從而間接影響癌痛治療的依從 性［1］。OIC 發生機制與神經末梢的μ-受體抑制有關,阿片類藥物作用于中樞神經系統及胃腸道的阿片類受體,削弱腸道運動,減慢腸道蠕動,腸液分泌減少吸收增多,延遲糞便的排泄,抑制神經興奮性,但增強腸道單個相性收縮和擺動,增加腸壁平滑肌的張力,抑制協調性蠕動,使非蠕動性收縮增加,從而延緩腸內容物通過時間［2］。烏黃潤腸丸是一種用于治療OIC 的中藥復方制劑。相關研究報道,何首烏所含成分二苯乙烯苷能降低肝中醋酸可的松所致甘油三酯積累,調節肝臟的脂代謝,預防乙型肝炎。降低四氯化碳所引發的肝腫大,阻礙肝臟微粒體中的脂質過氧化,降低血清游離脂肪酸,是保肝的有效成分,含有的二苯乙烯苷、蒽醌類、黃酮類等多種成分,在抗衰老、抗腫瘤、保護神經以及改善血管功能等方面具有顯著效果［3,4］。本研究使用阿片類藥物復方地芬諾酯建立OIC 小鼠模型,研究不同給藥劑量的烏黃潤腸丸對便秘小鼠排便時間、排便重量和排便粒數的影響,并考察制劑安全性,為該制劑治療阿片類藥物致便提供臨床理論依據和參考。

1 實驗材料

1.1 藥材及試劑 烏黃潤腸丸由成都復興醫院與攀枝花市農林科學研究院聯合研究開發及制備。熟地黃(蒸制)、知母、枳殼、當歸、黃芩、黃柏購于四川千方中藥股份有限公司；“首烏1 號”為攀枝花農林科學院育出的新品系,經攀枝花市食品藥品檢驗所檢測,何首烏塊根總灰分3.6%,二苯乙烯苷含量4.4%,結合蒽醌含量0.21%,符合《中國藥典》(2015 版,一部)規定。復方地芬諾酯片(國藥準字H41020205,規格：每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品0.025 mg)；麻仁丸(國藥準字Z42020417)。溶血劑(V-28CFL)；稀釋劑(M-3D)；清洗液(V-28R)；丙氨酸氨基轉移酶(140119002)。

1.2 儀器 BSA124S 萬分之一電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司)；電子天平(JM-B2002)；獸用全自動血液細胞分析儀(BC-2800Vet,深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)；獸用生化分析儀(BC-240VET,深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)。

1.3 實驗動物 昆明小鼠56 只,SPF 級,雌雄各半。實驗單位使用許可證編號：SYXK(川)2016-202,由成都達碩實驗動物有限公司提供。

2 實驗方法

2.1 烏黃潤腸丸對阿片類藥物致便秘小鼠通便的作用

2.1.1 復方地芬諾酯混懸液配制 取復方地芬諾酯片2 片(每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品 0.025 mg),加RO 水至10 ml,質量濃度為0.5 g/L,振蕩溶解混勻,臨用前配制［6］。

2.1.2 墨汁配制 準確稱取阿拉伯樹膠100 g,加RO水800 ml,煮沸至溶液透明,稱取活性炭(粉末)100 g加至上述溶液中煮沸3 次,待溶液涼后加RO 水定容至1000 ml,于4℃儲存［7］。

2.1.3 動物分組 40 只昆明小鼠隨機分為空白對照組、陰性實驗組、陽性對照組、實驗低劑量組、實驗高劑量組,每組8 只,雌雄各半。另選16 只昆明小鼠,隨機分為給藥組和對照組,每組8 只,雌雄各半。

2.1.4 排便實驗 試驗前一天下午各組小鼠禁食不禁水16 h,于次日測定時,除空白對照組外,其余各組小鼠灌胃給予復方地芬諾酯混懸液(5 mg/kg),空白對照組給予等容量RO 水；60 min 后分別灌胃陽性對照組(麻仁丸0.6 g/kg)、實驗低劑量組(烏黃潤腸丸0.4 g/kg)、實驗高劑量組(烏黃潤腸丸1.2 g/kg)小鼠相應受試藥物,空白對照組和陰性實驗組分別給予等容量RO 水；20 min 后給予碳粉液指示劑。從灌墨汁開始記錄每只動物排首粒黑便時間和在6 h 內排黑便的粒數及黑便質量。

2.2 烏黃潤腸丸單次給藥毒性 給藥組采用小鼠最大給藥量法,以烏黃潤腸丸最大給藥濃度2.4 g/kg,最大給藥體積1.0 ml,24 h 內經口灌服1 次,對照組給予等體積的RO水,觀察14 d。試驗期間觀察小鼠體重、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應等,到期時眼球采血和大體解剖,組織行病理學檢查,眼球血用于血常規和血生化檢測［8］。

3 統計學方法

采用SPSS17.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用t 檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

4 結果

4.1 各組小鼠排首粒黑便時間、6 h 內排便粒數、6 h排便凈重量比較 陽性對照組、實驗低劑量組、實驗高劑量組排首粒黑便時間均短于空白對照組與陰性實驗組,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。實驗高劑量組6 h 內排便粒數多于空白對照組與陰性實驗組,實驗低劑量組多于陰性實驗組,差異有統計學意義(P＜0.05)。實驗高劑量組6 h 排便凈重量高于空白對照組與陰性實驗組,差異有統計學意義(P＜0.05)。實驗低劑量組與陽性對照組的6 h 內排便粒數與6 h 排便凈重量比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 各組小鼠排首粒黑便時間、6 h 內排便粒數、6 h 排便凈重量比較()

表1 各組小鼠排首粒黑便時間、6 h 內排便粒數、6 h 排便凈重量比較()

注：與空白對照組比較,aP＜0.05；與陰性實驗組比較,bP＜0.05

4.2 烏黃潤腸丸安全性

4.2.1 對照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較 對照組與給藥組小鼠單次給藥第0、4、7、14 天的體重比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2 對照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較(,g)

表2 對照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較(,g)

注：兩組比較,P＞0.05

4.2.2 對照組與給藥組小鼠血常規檢驗結果比較 對照組與給藥組血小板、紅細胞、血紅蛋白、白細胞水平比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表3 對照組與給藥組小鼠血常規檢驗結果比較()

表3 對照組與給藥組小鼠血常規檢驗結果比較()

注：兩組比較,P＞0.05

4.2.3 對照組與給藥組小鼠血生化檢驗結果比較 對 照組與給藥組的肌酐和天門冬氨酸氨基轉移酶水平比較,差異無統計學意義(P＞0.05)。給藥組的丙氨酸氨基轉移酶低于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05)。見 表4。

表4 對照組與給藥組小鼠血生化檢驗結果比較()

表4 對照組與給藥組小鼠血生化檢驗結果比較()

注：與對照組比較,aP＜0.05

4.2.4 烏黃潤腸丸對小鼠器官的毒副作用 給藥組小鼠肝、腎、腸組織病理學蘇木素-伊紅(HE)染色結果顯示：腸道黏膜未見明顯水腫腸黏膜結構清晰,肝臟組織內未見肝細胞明顯水腫及脂肪樣變,腎臟組織未見腎臟細胞明顯水腫及腎小球結構完整。結果表明烏黃潤腸丸對小鼠的肝、腎、腸等器官無毒副作用。見圖1。

圖1 小鼠腸(A)、肝(B)、腎(C)組織病理學HE 染色結果

5 討論

既往研究發現,內源性阿片肽可通過阻滯腸道神經元的活動繼而阻止腸道的推性蠕動和腺體的分泌［9,10］；因此,當外源性阿片與受體結合,阻止興奮性和抑制性神經遞質的分泌,將影響腸道節律性收縮、增加腸道水分重吸收,最終導致胃腸道功能紊亂、大便干結及排便困難［11］。因此,阿片類藥物導致的胃排空延遲、腹絞痛、腹脹、腸排空延遲、大便干結等癥狀,可再次加重惡心、嘔吐、排便困難、排便疼痛、排便不盡感、排便梗阻感等［12］。目前,減少阿片類用量、控制阿片類藥物引起的不良反應、更換阿片類藥物、改變給藥途徑是降低阿片類不良反應的主要手段,但對部分OIC 患者效果不佳。同時,阿片類藥物減量將導致癌痛得不到有效控制,有違于WHO 提出的癌痛控制目標。美國國立綜合癌癥網絡(NCCN)疼痛指南中推薦預防性使用瀉藥治療OIC,如聚乙二醇、乳果糖、納絡酮緩釋劑、甲基納曲酮、阿維莫潘等,國內常用中藥制劑麻仁丸對癥治療［13］。

除阿片藥物直接導致的胃腸道功能紊亂性排便困難,癌癥晚期患者多并發脫水、電解質紊亂、腫瘤相關性機械性梗阻及精神緊張等便秘相關危險因素。因此,不僅需要改善便秘癥狀,糾正腸道功能紊亂,同時需要改善機體狀態,從而緩解OIC。本組方及制劑根據阿片類藥物致便秘的特點和機制,并結合改善全身機體組方,以何首烏、柏子仁、當歸、大黃等具有具潤腸通便和刺激性作用的瀉下類藥物改善便秘癥狀為君藥,佐以養陰生津類藥物熟地黃、知母等,調節交感神經和內分泌的功能,使代謝亢進狀態有所緩解,并能促進淋巴母細胞的轉化,增加白細胞及血小板,從而提高機體免疫功能［14］；再輔以清熱解毒藥物黃芩、黃柏等,對于熱毒蘊結的腫瘤患者,通過抑菌、對抗多種微生物毒素及其他毒素,改善腸道菌群微環境,維持及保護腸道功能［15］。實驗結果表明,烏黃潤腸丸可以明顯縮短阿片類藥物致小鼠便秘的小鼠首次排便時間,并且明顯增加小鼠排便次數和排便重量,治療效果優于麻仁丸陽性對照組；同時,單次給藥急性毒性實驗研究結果表明,在劑量范圍內,烏黃潤腸丸對小鼠的肝、腎、腸均無明顯的毒副作用。

綜上所述,烏黃潤腸丸是一種能有效改善OIC 的復方中藥制劑,本研究為進一步中藥制劑轉化及臨床應用提供了支撐。