膜孕激素受體亞型及核孕激素受體在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)中表達(dá)及臨床意義

趙 偉， 孫兆亮， 王 萍， 牟曉莉

德州市人民醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，山東 德州 253000

復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion，RSA)是妊娠期并發(fā)癥之一，發(fā)病率約5%，一般指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上妊娠24周前丟失胎兒[1]，而我國(guó)通常將3次或3次以上在妊娠28周前的胎兒丟失稱為RSA[2]。RSA的發(fā)生涉及多種因素，包括遺傳、解剖學(xué)異常、血栓前狀態(tài)、感染、免疫、內(nèi)分泌、環(huán)境、流行病學(xué)及男性因素等[3]，但仍有約50%的RSA患者病因不明。孕激素在懷孕期間具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用，通過與孕激素受體(progesterone receptor，PR)相互作用調(diào)節(jié)母親的免疫反應(yīng)，防止胎兒排斥。PR在子宮內(nèi)膜細(xì)胞核和細(xì)胞膜上均有分布，分別被稱為核孕激素受體(nuclear progesterone receptor，NPR)和膜孕激素受體(membrane progesterone receptor，mPR)，mPR有mPR-α、mPR-β兩個(gè)亞型[4]。本研究旨在探討mPR亞型mPR-α、mPR-β及NPR在RSA中的表達(dá)及臨床意義。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 將德州市人民醫(yī)院自2018年1月至2020年8月收治的92例RSA患者納入RSA組，將同期體檢的94例正常育齡女性納入正常組。RSA組納入標(biāo)準(zhǔn)：符合RSA診斷標(biāo)準(zhǔn)，即與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生3次或3次以上妊娠28周前丟失胎兒。正常組納入標(biāo)準(zhǔn)：至少有過1次正常妊娠且無自然流產(chǎn)病史的育齡婦女。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡>40歲；入組前3個(gè)月內(nèi)服用過激素類藥物；影像學(xué)檢查提示解剖學(xué)異常或畸形、生殖道感染、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位等；合并糖尿病、甲狀腺疾病、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病等；患心理疾病或精神障礙；父母雙方染色體異常。正常組平均年齡(32.40±3.32)歲，平均體質(zhì)量(26.30±2.05)kg/m2，平均孕次(3.31±0.29)次；RSA組平均年齡(31.90±2.47)歲，平均體質(zhì)量(25.80±1.83)kg/m2，平均孕次(3.45±0.36)次。兩組研究對(duì)象一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。研究對(duì)象及其家屬均簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本處理 月經(jīng)周期第10～14天用直徑0.3 cm宮腔組織吸引管(上海家寶醫(yī)學(xué)保健科技有限公司)吸取少許子宮內(nèi)膜組織，新鮮組織標(biāo)本迅速放入液氮保存并備用。

1.2.2 主要儀器及試劑 主要儀器包括SMA1000微量紫外分光光度計(jì)、Bio-Rad S1000梯度聚合酶鏈反應(yīng)儀、羅氏480實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀，主要試劑包括RNA提取試劑盒和cDNA合成試劑盒。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè) 將標(biāo)本經(jīng)液氮取出，嚴(yán)格按照上述試劑盒說明書提取總RNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)測(cè)定純度及含量，鑒定后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增。聚合酶鏈反應(yīng)引物序列見表1。聚合酶鏈反應(yīng)條件：95℃ 15 s，95℃ 15 s，60℃ 30 s，72℃ 20 s，共45個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min。測(cè)定目的基因mRNA表達(dá)量，以2-△△Ct方法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

表1 聚合酶鏈反應(yīng)引物序列

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜mPR-β mRNA表達(dá)水平比較 RSA組子宮內(nèi)膜mPR-β mRNA相對(duì)表達(dá)量為(0.472±0.023)，低于正常組的(1.240±0.014)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜mPR-β mRNA表達(dá)水平比較

2.2 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜mPR-α mRNA表達(dá)水平比較 正常組子宮內(nèi)膜mPR-α mRNA相對(duì)表達(dá)量為(2.249±0.048)，RSA組為(2.376±0.080)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖2。

圖2 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜mPR-α mRNA表達(dá)水平比較

2.3 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜NPR mRNA表達(dá)水平比較 正常組子宮內(nèi)膜NPR mRNA相對(duì)表達(dá)量為(1.076±0.021)，RSA組為(1.110±0.017)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖3。

圖3 兩組研究對(duì)象子宮內(nèi)膜NPR mRNA表達(dá)水平比較

3 討論

妊娠是一個(gè)復(fù)雜的生理過程，約50%的RSA病因不明[5]。探索RSA病因?qū)τ诩膊〉念A(yù)防和治療具有重要的臨床意義。

孕激素是生殖過程中必不可少的激素，其主要作用包括調(diào)節(jié)免疫、抑制炎癥反應(yīng)、減少子宮收縮、改善子宮胎盤循環(huán)等[6]。孕激素缺乏可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜發(fā)育障礙，誘發(fā)RSA。孕激素水平明顯低下提示妊娠結(jié)局不良[7]。但RSA患者是否需要補(bǔ)充孕激素目前仍存在爭(zhēng)議。David等[8]研究表明，與安慰劑/正常組比較，應(yīng)用孕激素補(bǔ)充劑的女性流產(chǎn)次數(shù)減少，對(duì)于不明原因反復(fù)流產(chǎn)的女性，補(bǔ)充孕激素可能降低妊娠流產(chǎn)率。但Coomarasamy等[9]的研究結(jié)果卻表明，RSA患者補(bǔ)充孕激素不能改善妊娠結(jié)局。PR是配體激活的甾體受體超家族成員，由羧基端配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、中心DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、氨基末端結(jié)構(gòu)域組成，包括NPR和mPR。NPR主要起快速信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。mPR-α和mPR-β是利用兩個(gè)啟動(dòng)子由同一基因產(chǎn)生的不同亞型：mPR-β是全長(zhǎng)受體；mPR-α是N端截?cái)嘈褪荏w，缺失了mPR-β中的前164個(gè)氨基酸。因此，在結(jié)構(gòu)上，mPR-β在氨基末端結(jié)構(gòu)域中比mPR-α多了第3個(gè)激活域。兩者結(jié)構(gòu)上不同，調(diào)節(jié)不同的靶基因亞群，介導(dǎo)不同的組織特異性功能[10]。mPR-α和mPR-β是癌癥和生殖相關(guān)疾病中很好的藥理靶點(diǎn)和疾病標(biāo)志物[11]。本研究結(jié)果顯示：RSA組子宮內(nèi)膜mPR-β mRNA相對(duì)表達(dá)量低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常組和RSA組子宮內(nèi)膜mPR-α mRNA、NPR mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這提示，mPR-β在妊娠期間的表達(dá)變化可能是最終引起RSA的一個(gè)原因。

綜上所述，RSA患者子宮內(nèi)膜mPR-β mRNA相對(duì)表達(dá)量低于正常育齡婦，mPR-β表達(dá)降低可能是導(dǎo)致RSA發(fā)生的一個(gè)原因。