Ras效應因子-1在上皮性卵巢腫瘤中表達水平及意義

鄭 樂

中國醫科大學腫瘤醫院(遼寧省腫瘤醫院) 婦科，遼寧 沈陽 110042

卵巢惡性腫瘤在女性生殖器官惡性腫瘤中死亡率居第1位，病因尚未明確。惡性腫瘤的發生和發展通常是一個多因素、多階段的過程，包括原癌基因激活、腫瘤抑制基因失活等。有研究表明，Ras基因為原癌基因，其激活突變參與多種腫瘤的發生和發展過程，如膀胱尿路上皮癌[1]、胃癌[2]、肺癌[3]、肝癌[4]等。Ras效應因子-1(Ras interactor-1，RIN1)是人體內的一個特征性Ras效應因子[5]，能夠直接激活ABL絡氨酸激酶及RAB5家族的GTP酶[6]，還可參與表皮生長因子受體的內吞作用[7]。本研究旨在探討RIN1在上皮性卵巢腫瘤中的表達水平及意義。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集遼寧省腫瘤醫院自2017年1月至2018年12月收治的150例接受手術治療患者的新鮮卵巢組織標本。150例患者中，正常卵巢30例(A組)，上皮性卵巢良性腫瘤30例(B組)，上皮性卵巢交界性腫瘤30例(C組)，上皮性卵巢惡性腫瘤60例(D組)。D組中，病理分期Ⅰ+Ⅱ期30例，Ⅲ+Ⅳ期30例；分化程度高-中分化30例，低分化30例。患者及其家屬均簽署知情同意書。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 儀器及試劑 RIN1、β-actin兔抗人多克隆抗體，RIN1、β-actin引物，實時定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction，PCR)試劑盒，PVDF膜(北京博奧森公司)；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(南京凱基生公司)；電泳儀，實時定量PCR儀等。

1.3 Western Blot法檢測RIN1蛋白表達水平 組織塊稱質量，提取組織中核蛋白并測定其含量，電泳，轉膜，封閉，加一抗，孵育PVDF膜，4℃過夜，加二抗，室溫振蕩孵育，Western Blot試劑盒顯色，凝膠成像系統分析條帶灰度值并進行比較。

1.4 PCR法檢測RIN1 mRNA表達水平 提取標本總RNA，采用Takata等方法進行PCR檢測。RIN1上游引物為5′-GGCAGCAGAGGAGTAGCTTGA-3′，RIN1下游引物為5-GCTTGCTGGCGCTAAAAGG-3′，β-actin上游引物為5-TTAGTTGCGTTACACCCTTTC-3′，β-actin下游引物為5-ACCTTCACCGTTCCAGTTT-3′。采用2-△△Ct法分析結果，實驗重復3次。

2 結果

2.1 RIN1蛋白表達水平比較 A組、B組、C組、D組RIN1蛋白相對表達量分別為(0.096 2±0.026 2)、(0.371 0±0.028 3)、(0.564 3±0.056 7)、(0.732 0±0.098 2)，兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見圖1。D組中，Ⅲ+Ⅳ期RIN1蛋白相對表達量高于Ⅰ+Ⅱ期[(0.813 0±0.061 5)比(0.651 0±0.047 6)]，低分化RIN1蛋白相對表達量高于高-中分化[(0.785 0±0.087 9)比(0.679 0±0.078 0)]，差異均有統計學意義(P<0.05)。

圖1 Western Blot法檢測RIN1蛋白表達水平

2.2 RIN1 mRNA表達水平比較 A組、B組、C組、D組RIN1 mRNA相對表達量分別為(3.890 0±0.440 5)、(5.517 0±0.281 7)、(7.593 0±0.636 8)、(9.722 0±1.177 0)，兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。D組中，Ⅲ+Ⅳ期RIN1 mRNA相對表達量高于Ⅰ+Ⅱ期[(10.710 0±5.248 0)比(8.733 0±0.723 7)]，低分化RIN1 mRNA相對表達量高于高-中分化[(10.450 0±0.895 9)比(8.99 0 0±0.953 9)]，差異均有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

惡性腫瘤的發生、發展、侵襲、轉移等與原癌基因、抑癌基因的突變、失調有關。RIN1作為Ras的效應因子，在細胞中廣泛存在。RIN1定位于11q13.2，主要功能結構域包括ABL結合結構域、Ras結合結構域、與空泡蛋白分選蛋白相關的鳥苷酸交換因子等[8-9]。其主要功能如下：通過與H-Ras競爭性結合，干擾其信號傳導，抑制H-Ras介導的細胞轉化[5]；具有Rab5a GTPase的GEF活性，通過與Rab5直接結合，泛素化Ras，介導表皮生長因子受體內陷降解，促進細胞內吞[10]。Inoue等[11]研究報道，RIN1可能通過Ras-Erk信號通路影響結腸癌的發生和發展。Wang等[3]研究表明，在非小細胞肺腺癌組織中，RIN1的表達水平與組織分化程度、腫瘤臨床病理分期、淋巴結轉移情況相關，高表達組患者預后更差。

本研究結果顯示：上皮性卵巢惡性腫瘤的RIN1蛋白相對表達量、RIN1 mRNA相對表達量均明顯高于正常卵巢組織、上皮性卵巢良性腫瘤、上皮性卵巢交界性腫瘤，且上皮性卵巢惡性腫瘤Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期，低分化高于高-中分化。這提示：RIN1可促進上皮性卵巢腫瘤細胞增殖，并抑制凋亡；RIN1表達水平與腫瘤的臨床病理分期、分化程度相關。

綜上所述，隨著上皮性卵巢腫瘤惡性程度上升，RIN1表達明顯增強，RIN1在上皮性卵巢惡性腫瘤的發生和發展過程中具有重要的促進作用。RIN1可成為判斷腫瘤發生、發展及預后的重要指標，后續深入研究RIN1促進上皮性卵巢惡性腫瘤發生和發展的分子生物學機制，有望為卵巢癌提供新的治療靶點。