FGA、HSP90α、SPP1聯合對HBV相關性肝細胞癌的早期診斷價值

朱東東 孫孟甜

肝癌是第六大常見癌癥，也是癌癥相關死亡的第三大原因[1]。肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占原發性肝癌的90%以上，其發病率正在全球范圍內上升[2]。慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝硬化和肝細胞癌的主要原因[3]。纖維蛋白原α鏈(fibrinogen alpha chain,FGA)作為血栓的主要成分之一，具有止血的主要功能[4]。Gustavo Ferrín等[5]發現肝細胞癌的患者血清中FGA含量顯著增高。熱休克蛋白90-Alpha(heat shock protein 90-Alpha,HSP90α)作為分子伴侶調節特定的靶蛋白[6]，在多種癌癥中，HSP90α過表達(包括在HCC中)并且可以在腫瘤細胞外分泌[7]。分泌磷蛋白1(secreted phosphoprotein 1,SPP1)在導致Ⅰ型免疫的途徑中是必需的[8]。Li S等[9]發現評估了SPP1表達水平與臨床特征之間的關系，并表明SPP1是一種潛在的生物標志物。本研究旨在探討FGA、HSP90α、SPP1聯合對HBV相關性肝細胞癌的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2016年5月至2018年5月我院收治的早期HBV相關性肝細胞癌患者70例為腫瘤組，其中男性32例，女性38例，年齡41～76歲；平均年齡(55.68±14.79)歲；腫瘤直徑1.3～6.2 cm，平均直徑為(4.11±2.31)cm；TNM分期：Ⅱ期35例，Ⅲ期35例。肝硬化患者70例為肝硬化組，其中男性41例，女性29例，年齡45～68歲；平均年齡(54.28±7.47)歲；其中原發性膽汁性肝硬化37例、病毒肝炎性肝硬化33例。70例早期HBV相關性肝細胞癌患者和70例肝硬化患者均經我院AFP、影像學等檢查診斷，術后經病理檢查證實。排除標準：①嚴重心、肝、腎功能損害者；②長期使用皮質類固醇激素及免疫抑制劑者；③患有精神疾病者；④患有其他癌癥者；⑤HCV-DNA陽性者。同時，納入2016年5月至2018年5月至我院體檢的健康體檢者70例為對照組，其中男性35例，女性35例，年齡37～71歲；平均年齡(52.54±13.84)歲。各組一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，可納入此次分析。受試者均簽署知情同意書。

1.2 酶聯免疫吸附試驗

采取早期HBV相關性肝細胞癌患者70例、肝硬化患者70例和健康體檢者70例的肘前靜脈血6 ml，進行酶聯免疫吸附試驗。FGA ELISA試劑盒購自上海振譽生物科技有限公司(貨號：SEB154Mu-1)。HSP90α ELISA試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司(貨號：CSB-E13462h-1)。SPP1 ELISA試劑盒購自孟成科技有限公司(貨號：P100371)。根據相應說明書檢測3組人員血清FGA、HSP90α、SPP1的表達量。

1.3 統計學分析

PRISM 7.0軟件進行統計分析，組間比較采用t檢驗。應用受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)分析FGA、HSP90α、SPP1檢測早期HBV相關性肝細胞癌的臨床診斷價值。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HBV相關性肝細胞癌患者、肝硬化患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達量

HBV相關性肝細胞癌患者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達量均顯著高于肝硬化患者(P<0.05)和健康體檢者(P<0.05)。肝硬化患者血清中FGA的表達量高于健康體檢者(P<0.05)。血清中HSP90α,SPP1的表達量在肝硬化患者和健康體檢者中無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1 HBV相關性肝細胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達量

2.2 HBV相關性肝細胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的鑒別診斷效能

FGA的ROC曲線下面積為0.82±0.06(95%CI 0.708～0.9387)，以FGA的陽性臨界值62.52 ng/ml，其診斷靈敏度為87%，特異度為83%；HSP90α的ROC曲線下面積為0.84±0.06(95%CI 0.7369～0.9543)，以HSP90α的陽性臨界值12.72 ng/ml，其診斷靈敏度為80%，特異度為87%；SPP1的ROC曲線下面積為0.80±0.06(95%CI 0.6807～0.9304)，以SPP1的陽性臨界值71.11 ng/ml，其診斷靈敏度為83%，特異度為83%。見圖1和表2。

圖1 HBV相關性肝細胞癌患者和健康體檢者血清中FGA、HSP90α、SPP1的ROC曲線

2.3 血清中FGA、HSP90α、SPP1聯合診斷HBV相關性肝細胞癌

患有HBV相關性肝細胞癌的為真陽性，未患有HBV相關性肝細胞癌的為真陰性，血清中FGA、HSP90α、SPP1聯合對HBV相關性肝細胞癌的診斷的的靈敏度為88%(44/50)，特異度為90%(45/50)，準確度為89%(89/100)。見表3。

3 討論

肝癌包括多種原發性肝癌(從肝臟起源的癌癥)以及繼發性肝癌(從其他器官起源的癌癥)[10]。肝細胞癌是最常見的原發性肝癌類型，也是世界上最致命的癌癥之一[11]。原發性HCC通常在早期沒有任何癥狀，到臨床表現出現時，大多數患者已進入終末期，腫瘤進展迅速且具有侵襲性[12]。因此，HCC篩查和診斷至關重要。目前使用HCC生物標志物甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)進行肝細胞癌的診斷已經將近40年。然而，對于早期HCC患者，單獨使用血清AFP的診斷價值約為40%；對于15～30%的HCC患者，AFP水平可能仍為陰性(<25 ng/ml)[13]。因此，非常需要開發用于診斷和治療的敏感生物標志物。

最近蛋白質組學方法的顯著進步，包括檢測限和靈敏度的提高，對于從癌癥蛋白質組中鑒定HCC臨床應用的新型生物標志物模式具有很大的潛力[14]。Zhou Y等[15]整合組學策略追蹤蛋白質表達并發現HCC患者血清中HSP90α表達異常。本研究發現HBV相關性肝細胞癌患者血清中HSP90α的表達量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。HSP90α是HSP90的細胞溶質同種型之一[16]。靜息正常細胞不分泌HSP90α，除非被環境壓力引發[17]。已知的環境脅迫涉及許多實體瘤的生長、侵襲和轉移[18]。本研究中，早期HBV相關性肝細胞癌患者與健康體檢者的HSP90α的靈敏度和特異度分別為80%和 87%。在這種情況下，HSP90的分泌在癌癥治療中具有重要意義，提示它在預測癌癥中起著天然的作用。

慢性HBV感染是HCC發展的獨立危險因素，并且還能夠調節肝臟中的基因表達和蛋白質合成，從而產生特定的表達模式。FGA的增加與肝臟疾病有關[19]。本研究發現HBV相關性肝細胞癌患者血清中FGA的表達量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。作為細胞外基質蛋白，FGA的沉積可以用于隔離腫瘤區域的補體成分[20]，或作為支持生長因子結合并促進血管生成和腫瘤細胞生長過程中細胞粘附，增殖和遷移的支架[21]。本研究中，早期HBV相關性肝細胞癌患者與健康體檢者的FGA的靈敏度和特異度分別為87%和 83%。因此，FGA在診斷HBV相關性肝細胞癌中具有較高的靈敏度和特異度。

SPP1，也稱為骨橋蛋白，是1種分泌的非膠原蛋白，具有調節幾種細胞行為和調節白細胞遷移的能力[22]。本研究發現HBV相關性肝細胞癌患者血清中SPP1的表達量顯著高于健康體檢者(P<0.05)。有證據表明[23]，SPP1的沉默實際上可以抑制PI3K-AKT信號通路，從而預防小鼠卵巢癌的生長，而PI3K屬于脂質激酶家族，其具有整合信號并將信號轉導至控制細胞增殖、遷移和代謝的多種信號傳導途徑的能力，提示SPP1具1個潛在的促癌因子。早期HBV相關性肝細胞癌患者與健康體檢者的SPP1的靈敏度和特異度分別為83%和83%。顯示了其較好的診斷效能。

在本研究中，發現血清中FGA、HSP90α、SPP1聯合對HBV相關性肝細胞癌的診斷的的靈敏度為88%，特異度為90%，準確度為89%。相比于單一血清分子對HBV相關早期肝細胞癌的診斷，多分子的聯合診斷在靈敏度和特異度上均有較高的提升。至于聯合診斷，相比于黎曉武等[24]通過血清GP73、HSP27聯合AFP診斷HBV相關早期肝細胞癌的靈敏度的86%，本研究靈敏度達到了88%。翟璐通過GP73聯合SCCA-IgMIC診斷HBV相關早期肝細胞癌的靈敏度和特異度分別為61.40%和91.46%[25]。盡管其具有極高的特異度，但是較低的靈敏度暗示了GP73與SCCA-IgMIC的聯合目前還不適應于臨床對HBV相關性肝細胞癌的診斷。此外，FGA、HSP90α、SPP1聯合的ELISA方法成本低，患者血漿易于獲得，重復性強，普及性高，所需的儀器也僅為酶標儀。

然而，本研究仍然存在不足：①盡管血清HSP90α在檢測肝癌的能力方面比AFP的敏感性和特異性更高，但是血清中FGA、HSP90α、SPP1聯合對HBV相關性肝細胞癌的診斷效能未能與AFP比較。②FGA與乙醇攝入密切相關，但是本研究因樣本有限未將HBV相關性肝細胞癌患者按乙醇攝入量進行分組。

綜上所述，血清中FGA、HSP90α、SPP1的表達量可作為診斷早期HBV相關性肝細胞癌的潛在標志。