Myc誘導的核抗原53在結直腸癌中的表達及其與病理特征的關系

司 華 閆 燦 曾憲煥

結直腸癌發病率和死亡率的都比較高，也是影響居民健康的重大常見疾病[1-2]。要改善結直腸癌患者的預后，對結直腸癌的病理特征影響因素進行分析具有重要價值[3]。現代研究表明結直腸癌的發生發展是多基因參與的多步驟多階段的復雜過程，涉及到DNA損傷修復、基因突變、原癌基因激活、抑癌基因失活、表觀遺傳學改變等多種因素，但沒有明確任何1種單一因素是結直腸癌的直接病因[4]。原癌基因myc家族廣泛參與介導細胞周期與細胞增殖，從而調控下游多種基因的表達[5]。Myc誘導的核抗原53(mina53)位于3號染色體(3q12.1)，包含有12個外顯子，翻譯起始點位于外顯子2，終止密碼子位于外顯子[6]。mina53可編碼1種分子量為53 kD的蛋白質，定位于細胞核，可能是c-myc下游的1個直接靶基因[7]。mina53的異常表達與多種惡性腫瘤的發生發展及其預后密切相關[8-9]，但是在結直腸癌中的報道還比較少見。本文具體探討了mina53在結直腸癌中的表達及其與病理特征的關系，希望能夠明確mina53在結直腸癌中的作用價值。現總結報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年9月至2020年5月選擇在本院初治的結直腸癌患者341例作為研究對象，納入標準：具有完整的臨床資料；均經手術后病理診斷證實為結直腸癌，且保存有完整的病理標本；患者年齡20～75歲；本院倫理委員會批準了此次研究；術前均未行放化療及免疫治療。排除標準：臨床與病理資料缺乏者；標本資料無法進行免疫組化分析者；合并其他部位惡性腫瘤者。

在341例患者中，其中男性189例，女性152例；年齡33～74歲，其中年齡≤60歲99例，>60歲242例；腫瘤直徑≤5 cm 141例，>5 cm 200例；分化程度：高分化143例，中分化67例，低分化131例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期211例，Ⅲ～Ⅳ期130例；漿膜浸潤112例；腫瘤部位：結腸167例，直腸174例。

1.2 mina53表達檢測

取所有患者的病灶組織標本(病灶組)與癌旁正常結直腸黏膜組織(距腫瘤邊緣≥5 cm，HE染色鏡下證實為正常結直腸黏膜腺體組織，癌旁組)。所有患者經4%甲醛固定，于濃度梯度酒精中脫水，二甲苯中浸潤觀察組織塊至透明為止。用石蠟Ⅰ(<60 ℃，1 h)浸潤、石蠟Ⅱ(60 ℃，2 h)包埋后制成石蠟組織塊，用石蠟切片機5 μm厚度進行連續切片。采用免疫組化法檢測mina53表達水平，mina53兔抗人多克隆抗體購自美國Epitomics公司。細胞膜、細胞質和(或)胞核在鏡下出現棕黃色顆粒判定為陽性細胞，在高倍鏡下(×400倍)觀察，陽性染色強度：0級(0分)：無細胞染色；1級：淡黃色顆粒或團塊；2級棕黃色顆粒或團塊；3級棕褐色顆粒或團塊。陽性細胞數比例：0級：陽性細胞數≤10%；1級：陽性細胞數11%～50%；2級：陽性細胞數51%～75%；3級：陽性細胞數>75%。陽性標記分數=陽性染色強度評分×陽性細胞數評分，≥2分表示為表達陽性。

1.3 病理特征與預后調查

調查所有患者的病理特征，包括性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、腫瘤部位等。隨訪到2020年7月1日，統計患者的死亡與生存情況。

1.4 統計方法

2 結果

2.1 mina53表達陽性情況對比

病灶組mina53表達陽性率為55.1%(188/341)，顯著高于癌旁組的19.6%(67/341)(χ2=91.704，P<0.05)。

2.2 mina53表達與結直腸癌病理特征的關系

mina53表達陽性與結直腸癌患者年齡、性別、部位、直徑無相關性(P>0.05)，與分化程度、臨床分期、漿膜浸潤有相關性(P<0.05)，見表1。

表1 mina53表達與結直腸癌病理特征的關系/例

2.3 預后情況

在341例患者中，所有患者都得到了隨訪，隨訪到2020年7月1日，隨訪死亡48例，死亡率14.1%。

2.4 影響因素分析

在341例患者中，以隨訪死亡作為因變量，以分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達陽性作為自變量，多因素Cox比例風險回歸分析顯示：分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達陽性為導致患者預后死亡的主要因素(P<0.05)，見表2。

表2 影響結直腸癌患者預后的多因素分析

3 討論

結直腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，隨著外科手術及輔助治療手段的不斷更新改進，該病患者的預后已經有了很大的改善，但是5年生存率很難超過20%[10]，為此尋找臨床上更好的生物標志物來早期發現結直腸癌以及評估患者預后具有重要意義。

結直腸癌的發生與發展是包括腫瘤細胞與宿主間質和宿主細胞間的一系列復雜步驟組成的結果，涉及到新生血管形成、腫瘤細胞的黏附改變、細胞增殖改變、腫瘤細胞的遷移、細胞外基質降解增加等[11]。mina53主要定位于細胞核，部分蛋白集中于核仁區。Mina53蛋白第128-271位的氨基酸殘基表現為JmjC結構域形態，常和DNA或者染色體結合區伴行，呈B折疊結構，能參與調節染色體重構[12-13]。當前也有研究顯示包含JmjC結構域的蛋白是多種去甲基化酶的催化結構域，可能參與介導組蛋白脫甲基化的過程，從而可參加機體組蛋白表觀遺傳學調節過程[14-15]。本研究顯示病灶組的mina53表達陽性率為55.1%，顯著高于癌旁組的19.6%(P<0.05)，表明結直腸癌患者伴隨有mina53的高表達。最新研究顯示mina53可作為結腸癌一種相對特異性的腫瘤標記物，定位于結腸癌細胞胞核內，可激活下游靶基因的表達，靶基因的激活又可上調mina53的表達，從而形成惡性循環[16-17]。不過mina53在人類不同類型組織細胞中的表達具有選擇性，而這種差異性表達決定了其發揮調節細胞生長、凋亡以及衰老的不同的生理特性和功能，同樣在不同類型腫瘤組織中的表達情況也是存在差異的，這種差異也決定了mina53在腫瘤的發生和進展過程中發揮著迥然不同的作用[18-19]。

目前要降低結直腸癌患者的死亡率，關鍵在于提高早期結直腸癌的診斷率，同時要尋找到影響患者預后的影響，從而尋找更加有效的治療方法[20]。現代研究表明，結直腸癌的發生發展是1個復雜過程，慢性炎癥可導致結直腸癌微環境改變，促使細胞異常分泌某些細胞因子，進而促進結直腸癌的發生進展[21]。本研究顯示mina53表達陽性與結直腸癌患者的年齡、性別、部位、直徑無相關性(P>0.05)，與分化程度、臨床分期、漿膜浸潤有相關性(P<0.05)；多因素Cox比例風險回歸分析顯示分化程度、臨床分期、漿膜浸潤、mina53表達陽性為導致患者預后死亡的主要因素(P<0.05)。當前研究顯示mina53大量表達于結腸癌細胞胞核，分化程度不同的結腸癌均高表達mina53，而且侵襲性強的組織中mina53的表達率顯著增高[22]。mina53也可激活Rac的表達，從而參與對ERK通路的調節，也可參與細胞與基質間的黏附和細胞偽足的形成，進而調節細胞骨架結構，促進細胞侵襲和轉移[23]。本研究也存在一定的不足，免疫組化檢測中也存在一定的污染，假陽性率較高；病例選擇可能存在偏差，調查內容相對比較少，將在后續研究中深入探討。

總之，mina53在結直腸癌中呈現高表達表達狀況，與患者的分化程度、臨床分期、漿膜浸潤等病理特征顯著相關，也是影響患者預后的重要因素。