p53及bcl-2蛋白在乳腺癌中的表達及與c-erbB-2表達的相關性

李清苗 谷國梅 師晨陽

乳腺癌是全球范圍內嚴重危害女性生命健康的惡性腫瘤性疾病，且其發病率逐年升高，并趨于年輕化，發病率約占女性惡性腫瘤的25%。研究[1-2]報道，乳腺癌屬于一種高度異質性腫瘤，其病程演變經歷了多基因、多階段等復雜生物學過程，因此研究相關基因在乳腺癌組織中的表達情況并分析彼此間的相互作用對于揭示其發生、發展機制具有重要意義。乳腺癌的發生不僅與部分原癌基因過度活化或抑癌基因失活相關，也與細胞凋亡受抑相關，參與細胞凋亡的B淋巴細胞瘤-2(bcl-2)基因與乳腺癌發生及乳腺癌細胞增殖密切相關[3]；Kim G等[4]研究報道，突變型p53是一種促癌基因，可有效促進腫瘤細胞增殖，導致腫瘤的發生；c-erbB-2是目前公認的與乳腺癌發生、發展密切相關的原癌基因[5]。本研究旨在探究乳腺癌組織中p53、bcl-2蛋白的表達情況，并分析兩者與c-erbB-2蛋白表達的相關性，為乳腺癌的靶向治療提供新思路，現將結果詳細報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

選取2017年3月至2018年12月于本院住院治療的50例乳腺癌患者為研究對象，搜集其臨床資料并進行回顧性分析。所有患者均經病理學診斷確診并行乳腺癌根治術治療，臨床資料完整，預計生存期1年以上，手術情況及隨訪記錄清晰，術前未接受過任何抗腫瘤治療。50例患者年齡35～65歲，平均(53.65±4.87)歲。采集所有患者乳腺癌病理組織標本及癌旁正常乳腺組織標本，并分別作為觀察組及對照組，各50例。

1.2 主要試劑及儀器

鼠抗人p53、bcl-2、c-erbB-2多克隆抗體(英國Abcam公司)，SP法免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司)等；CUT4062型石蠟切片機(德國SLEE公司)，CKX41-A32RC型倒置顯微鏡(日本Olympus公司)等。

1.3 方法

常規制備石蠟組織切片，厚度約4 μm，經脫蠟，水化，常規進行免疫組化染色，一抗為鼠抗人p53、bcl-2、c-erbB-2多克隆抗體(濃度1∶100)，二抗為廣譜通用型非生物素化IgG，DAB染色液，顯微鏡下控制顯色反應時間；然后經蘇木精復染2 min，梯度酒精脫水，中性樹膠封片，于光學顯微鏡下觀察各組織標本中p53、bcl-2、c-erbB-2蛋白表達情況。p53、bcl-2、c-erbB-2蛋白陽性著色均以細胞核或細胞質中出現棕黃色或棕褐色為準，以半定量積分法判定染色結果：隨機選取5個視野，于高倍鏡下對各個視野中的陽性細胞數進行評分，未見陽性細胞為陰性計0分；陽性細胞百分比<10%計1分；陽性細胞百分比≥10%～50%計2分；陽性細胞百分比>50%～75%計3分；陽性細胞百分比>75%計4分。另據染色強度進行評分：未見著色計0分；淺黃色計1分；棕黃色計2分；棕褐色計3分。染色總評分=陽性細胞數評分×陽性染色強度評分。若染色總評分為0～3分，則為陰性；若染色總評分≥4分，則為陽性[6]。

1.4 觀察指標

①觀察對照組及觀察組組織標本中 p53、bcl-2蛋白表達情況，統計并比較2組p53、bcl-2蛋白陽性表達率；②比較不同乳腺癌組織病理分級患者組織標本中p53、bcl-2蛋白陽性表達率；③據據乳腺癌組織中c-erbB-2蛋白表達情況分為c-erbB-2陽性組及c-erbB-2陰性組，Person相關性分析評估p53、bcl-2蛋白與c-erbB-2蛋白表達的相關性。

1.5 統計學方法

使用SPSS 17.0統計軟件進行分析，計數資料以百分比(%)表示，采用卡方檢驗進行比較，p53及bcl-2蛋白與c-erbB-2表達的相關性分析采用皮爾遜(Person)進行分析，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 2組患者p53及bcl-2蛋白的表達情況

對照組及觀察組中p53蛋白陽性表達率分別為0.00%(0/50)、62.00%(31/50)；bcl-2蛋白陽性表達率分別為88.00%(44/50)、64.00%(32/50)。觀察組p53蛋白陽性表達率顯著高于對照組(χ2=44.928，P<0.01)，而觀察組bcl-2蛋白陽性表達率顯著低于對照組(χ2=7.895，P=0.005)。

2.2 p53及bcl-2蛋白與乳腺癌組織病理分級的關系

p53蛋白陽性率隨乳腺癌組織病理分級升高而逐漸升高，分別為Ⅰ級37.50%(6/16)、Ⅱ級68.97%(20/29)、Ⅲ級100.00%(5/5)，各級別間差異顯著(χ2=7.738，P=0.021)；bcl-2蛋白陽性表達率隨乳腺癌組織病理分級升高而逐漸降低，分別為Ⅰ級87.50%(14/16)、Ⅱ級58.62%(17/29)、Ⅲ級20.00%(1/5)，各級別間差異顯著(χ2=8.401，P=0.015)。

2.3 p53及bcl-2蛋白與c-erbB-2表達的相關性分析

50例乳腺癌患者中，37例c-erbB-2蛋白陽性，13例c-erbB-2蛋白陰性。c-erbB-2陽性組中p53蛋白陽性表達率顯著高于c-erbB-2陰性組，且乳腺癌組織中p53蛋白陽性表達與c-erbB-2陽性表達顯著正相關(γ=0.894，P<0.001)；c-erbB-2陽性組中bcl-2蛋白陽性表達率顯著低于c-erbB-2陰性組，且乳腺癌組織中bcl-2蛋白陽性表達與c-erbB-2陽性表達顯著負相關(γ=-0.803，P<0.001)。見表1。

表1 p53及bcl-2蛋白與c-erbB-2表達的相關性分析(例，%)

3 討論

早期發現、診斷及治療是降低乳腺癌患者病死率的關鍵，特異性腫瘤標志物的研究對于腫瘤患者預后及臨床治療具有重要的指導意義。p53及bcl-2蛋白在多種腫瘤的發生中均具有重要作用。楊一飛等[7]研究報道，突變型p53蛋白可有效促進細胞惡性轉化，激活其他癌基因，促進腫瘤進展。研究[8-9]報道，p53蛋白表達與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)表達情況，淋巴結轉移及腫瘤細胞增殖均具有顯著相關性，其隨著乳腺癌患者年齡低、臨床分期晚、ER、PR蛋白低表達等而顯著增強。丁明劍等[10]研究報道，突變型p53基因可促進血管增生內皮生長因子表達，是促進腫瘤血管生長的重要影響因素。黃燕等[11]報道稱，p53蛋白陽性表達的腫瘤細胞更具有侵襲性，且其陽性表達與乳腺癌淋巴結轉移呈顯著正相關關系。本研究中乳腺癌組織中p53蛋白陽性表達率為62.00%，顯著高于癌旁邊正常乳腺組織，且其隨著乳腺癌患者組織病理分級逐漸升高，即p53蛋白陽性表達可促進乳腺癌疾病進展，是診斷與治療乳腺癌的重要分子指標。bcl-2基因是一種原癌基因，其蛋白產物并不影響細胞增殖，但會阻遏細胞凋亡過程，是一種凋亡抑制基因，亦參與腫瘤的發生、發展[12]。Raha P等[13]研究報道，bcl-2基因不僅會抑制細胞凋亡，還會延長細胞周期，繼而延緩腫瘤細胞增殖，因此當bcl-2表達降低時可促進乳腺癌的發生、發展；研究[14-15]報道，bcl-2基因高表達時，腫瘤患者具有相對較好的病理生物學行為，可作為預測腫瘤患者是否發展淋巴結轉移的分子生物學指標之一。本研究中乳腺癌組織bcl-2蛋白陽性表達率為64.00%，顯著低于癌旁正常乳腺組織，且隨著乳腺癌患者組織病理分級逐漸降低，提示bcl-2蛋白低表達可促進乳腺癌疾病進展，也是診斷與治療乳腺癌的重要分子指標。

c-erbB-2屬于表皮生長因子受體家族成員，是一種跨膜蛋白，作為一種原癌基因廣泛表達于肝、腎、卵巢等腫瘤組織中，且其表達與疾病惡性程度正相關。于喜法等[16]研究報道，c-erbB-2作為細胞增殖及分化的調節劑，其陽性表達越多，則疾病進展越強，腫瘤細胞生長速度越快，且侵入淋巴系統發生轉移的幾率也隨之越高。目前有關乳腺癌組織中c-erbB-2蛋白表達與p53、bcl-2蛋白表達的相關性尚未見報道，本研究中50例乳腺癌患者中37例c-erbB-2蛋白陽性，陽性表達率為74.00%，進一步相關性分析結果顯示，c-erbB-2陽性組中p53蛋白陽性表達率顯著高于c-erbB-2陰性組，bcl-2蛋白陽性表達率顯著低于c-erbB-2陰性組，提示乳腺癌組織中p53蛋白與c-erbB-2蛋白表達顯著正相關，而bcl-2蛋白與c-erbB-2蛋白表達顯著負相關。

綜上，乳腺癌組織中p53蛋白高表達，bcl-2蛋白低表達，且乳腺癌組織中p53蛋白與c-erbB-2蛋白表達顯著正相關，而bcl-2蛋白與c-erbB-2蛋白表達顯著負相關，但由于本研究樣本量較少，且檢測方法單一，因此仍需臨床開展大樣本量實驗進一步研究確認。