Pyk2蛋白在非肌層浸潤性膀胱癌中的表達及與該腫瘤預后的相關性

韓健樂 楊帥平 王曉勃

膀胱癌是泌尿系統中常見的1種惡性腫瘤，主要出現在膀胱壁黏膜上的實體腫瘤，而非肌層浸潤性膀胱癌則指的是既往稱之為的淺表性膀胱癌。膀胱癌患者臨床確診后有70%～80%均為非肌層浸潤性膀胱癌，且該類腫瘤發病具有生物學行為的多變性，患者處于此病變階段時極易復發和進展，具有很高的侵襲性和復雜的疾病進程[1-2]。目前，臨床對非肌層浸潤性膀胱癌的關注度不斷提高，對于非肌層浸潤性膀胱癌發生發展過程中分子生物學指標變化的認識不斷加深，并且分子腫瘤病理學科的不斷完善也推動了相關研究的深入[3]。富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline rich protein tyrosine kinase 2,Pyk2)蛋白是1種富含脯氨酸的非受體型酪氨酸蛋白激酶[4]，既往報道顯示Pyk2在調節機體免疫、細胞增殖、遷移轉化等方面發揮重要的作用[5]。既往報道顯示Pyk2蛋白在多種腫瘤細胞的增殖轉移過程中均有著異常表達，可能是腫瘤細胞生長的重要標志物，并與腫瘤細胞的生長轉移和癌癥的預后產生某種關聯[6]。但在非肌層浸潤性膀胱癌患者中Pyk2蛋白的表達研究相對較少，為此本研究中以非肌層浸潤性膀胱癌患者為研究對象，探討Pyk2蛋白在其病灶組織中的表達情況及與腫瘤預后的相關性，報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料及入選標準

取2016年1月至2019年12月收治的62例非肌層浸潤性膀胱癌患者為調查研究對象，納入標準：① 患者經CT、MRI、組織病理學檢查等手段確診為非肌層浸潤性膀胱癌；② 患者年齡40～75歲；③ 患者均具有手術根治治療的指征；④ 患者均完成手術治療，術中采集到完整的腫瘤病灶標本和癌旁組織標本；⑤ 患者自愿參與本項調查研究，研究方案經醫院倫理學委員會審查通過。排除標準：① 患者并發其他腫瘤疾病；② 基礎資料、臨床檢測資料缺失或不完善的患者；③ 合并嚴重的心血管疾病、自身免疫性疾病患者；④ 中途因各種原因自愿退出本研究的患者。62例患者男性34例、女性28例，年齡40～75歲，平均年齡(57.66±9.97)歲，病灶大小1.8～4.5 cm，平均病灶大小(3.79±1.76)cm，病灶數：單發40例、多發22例，腫瘤分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期20例、Ⅲ期27例，分化程度：高26例、中22例、低14例。

1.2 檢測方法

取非肌層浸潤性膀胱癌患者手術后的腫瘤病灶組標本和癌旁正常黏膜組織標本進行免疫組化法檢測Pyk2蛋白表達情況的檢測。將標本進行脫水、包埋、固定等處理，并加入鼠抗人Pyk2單克隆抗體過夜，然后按照SP試劑盒操作說明對各組織標本進行免疫組化染色，SP試劑盒購自于上海艾博抗公司。在LV150N型光學顯微鏡(日本尼康公司)下觀察Pyk2蛋白表達的陽性率，陽性率判斷標準為：顯微鏡視野下出現棕黃色或棕褐色的特異性著色的棕色、黃色、褐色顆粒狀物質即為陽性，否則為陰性。將顯微鏡調節值低倍鏡視野(×100)下，選出每個標本下10個陽性細胞數較多的視野進行計數，計算各個標本中的Pyk2蛋白的表達水平。

1.3 評價指標

對觀察組膀胱癌病灶標本和對照組癌旁正常黏膜組織標本的Pyk2蛋白陽性表達率、表達水平進行統計對比，并對Pyk2蛋白表達情況與非肌層浸潤性膀胱癌的臨床病理學特征間的相關性進行分析處理。并將患者分為Pyk2蛋白陽性表達組和Pyk2蛋白陰性表達組，對兩組患者的預后效果進行隨訪觀察，對比兩組患者術后的復發率、無進展生存期(progression free survival,PFS)、總生存期(total survival,OS)，并進行組間對比以探討Pyk2蛋白表達與患者預后的相關性。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 觀察組、對照組Pyk2蛋白表達情況對比

觀察組Pyk2蛋白陽性表達率、表達水平均高于對照組，組間對比差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 觀察組、對照組Pyk2蛋白表達情況對比

2.2 Pyk2蛋白表達與臨床病理特征的關系

Pyk2蛋白表達與非肌層浸潤性膀胱癌患者年齡、性別、病灶大小、病灶數等因素無關，而與患者的腫瘤分期、分化程度有關，見表2。

表2 Pyk2蛋白表達與臨床病理特征的關系

2.3 Pyk2蛋白表達與患者預后關系

Pyk2蛋白陽性表達組患者復發率高于陰性表達組，PFS、OS水平均低于Pyk2蛋白陰性表達患者，見表3。

表3 Pyk2蛋白表達與預后的關系

3 討論

膀胱癌是泌尿系統中常見的惡性腫瘤疾病，隨著社會工作壓力的增加以及不良生活習慣的形成，膀胱癌在臨床上的發病率呈現逐年升高的趨勢，嚴重威脅患者的生命健康和生活質量。其中膀胱癌患者中有70%～80%患者分型均屬于非肌層浸潤性膀胱癌，此病程階段患者復發率高、難治愈、預后效果差等特點，給此類患者的臨床治療帶來了巨大挑戰[7-8]。因此，對于此類患者診療過程中的病情監測、預后效果的評估判斷是十分必要的，尋找1種無創敏感性、特異性高的生物標志物作為非肌層浸潤性膀胱癌的診斷和隨訪依據有著重要意義。目前，雖然有多種生物標記物如血管內皮生長因子、環氧化酶、甲胎蛋白、核基質蛋白22等用于膀胱癌的診療過程中，但存在著敏感性、特異性較差等問題影響了其臨床應用[9-10]。尋找1種敏感性和特異性更高的生物學標志物作為非肌層浸潤性膀胱癌的診斷和預后監測指標，已成為近幾年臨床研究關注的重點方向。Pyk2蛋白是1種富含脯氨酸的非受體型酪氨酸蛋白激酶，既往報道顯示Pyk2在調節機體免疫、細胞增殖、遷移轉化等方面發揮重要的作用，為本項研究的開展提供了思路[11]。

在本研究中，選取非肌層浸潤性膀胱癌患者的手術后的腫瘤病灶組織和癌旁正常黏膜組織為檢測標本，以免疫組化法對兩組標本中的Pyk2蛋白的表達情況進行檢測對比，結果顯示觀察組Pyk2蛋白陽性表達率、表達水平均高于對照組，表明觀察組Pyk2蛋白在非肌層浸潤性膀胱癌患者中呈現高表達，初步推斷Pyk2蛋白與非肌層浸潤性膀胱癌的腫瘤細胞的侵襲轉移具有一定的關聯性，與既往臨床報道的結果基本一致[12]。進一步對Pyk2蛋白表達與患者的臨床病理學特征關系進行研究，結果顯示Pyk2蛋白的表達與非肌層浸潤性膀胱癌患者的年齡、性別、病灶大小、病灶數等因素無關，而與患者的腫瘤分期、分化程度有關。表明Pyk2蛋白的表達可能參與非肌層浸潤性膀胱癌腫瘤的進展、分期、浸潤、轉移過程，對于宮頸癌腫瘤的加重扮演重要作用。也有報道表明Pyk2蛋白作為1個上游基因蛋白，可通過多種細胞通路對下游基因發揮廣泛的調節作用，也有報道指出Pyk2蛋白表達的增多可抑制膀胱癌腫瘤細胞的凋亡因子的表達，從而促進腫瘤細胞的增殖，使得非肌層浸潤性膀胱癌細胞大量繁殖，加重患者病情，促使患者的腫瘤細胞的進展、浸潤和轉移[13-14]。在預后效果對比中，Pyk2蛋白陽性表達組患者的復發率高于陰性表達組，PFS、OS水平均低于Pyk2蛋白陰性表達患者，表明Pyk2蛋白的表達與非肌層浸潤性膀胱癌患者的預后效果有相關性，可用以預測患者的預后情況，有較高的臨床指導意義。

綜上所述，Pyk2蛋白在非肌層浸潤性膀胱癌患者病灶組織中呈現高表達，其表達情況與非肌層浸潤性膀胱癌病灶的浸潤、轉移、分期有密切關系，并與患者的腫瘤預后效果顯著相關。Pyk2蛋白的檢測對于非肌層浸潤性膀胱癌病情評估、預后判斷有指導意義。