復方小兒退熱栓中對乙酰氨基酚含量測定及其均勻度研究*

謝思敏，陳家儀，顧利紅，栗建明

（廣東省廣州市藥品檢驗所·國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，廣東 廣州 510160）

復方小兒退熱栓由對乙酰氨基酚、人工牛黃、南板藍根浸膏粉制成，有解熱鎮痛、利咽解毒、祛痰定驚功效，臨床多用于小兒發熱、上呼吸道感染、支氣管炎肺熱咳嗽［1-4］，特別適用于小兒高熱驚厥癥，臨床療效明顯［5-7］。其質量標準收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·中藥成方制劑（第14 冊）》（WS3-B-2748-97），部分企業執行企業注冊標準時采用紫外分光光度法測定對乙酰氨基酚含量，方法專屬性較差，不能完全排除處方中其他成分對測定結果的干擾，具有一定局限性。王巍等［8］采用反相高效液相色譜（RPHPLC）法測定其對乙酰氨基酚的含量，但含量均勻度的控制未見報道。本研究中建立了測定復方小兒退熱栓中對乙酰氨基酚含量及其均勻度的方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260 Ⅱ型高效液相色譜儀，包括G7111A 型四元泵、G7129A 型自動進樣器、G7117C 型二極管陣列檢測器、OpenLab CDS 2.4 色譜工作站，均購自美國Agilent公司；XS 204 型電子天平（精度為萬分之一），XP26 型電子天平（精度為百萬分之一），均購自瑞士Mettler Toledo 公司；P300H 型超聲波清洗機（德國Elma 公司）。

1.2 試藥

對乙酰氨基酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100018-201610，含量以99.9%計）；17 批市售復方小兒退熱栓樣品（市售品。生產企業A，批號分別為20180301，20181005，20190301，20190604；生產企業B，批號分別為B05001，B05002，B05003；生產企業C，批號分 別 為 180301，180302，180303，180401，180402，180403，180601，180602，180603，180604）；甲醇（德國Merck 公司）、冰醋酸（美國阿拉丁工業公司）均為色譜純；其余試劑均為分析純（廣州化學試劑廠）；水為自制Milli-Q 超純水。

1. 對乙酰氨基酚A. 對照品溶液 B. 供試品溶液 C. 陰性對照品溶液圖1 高效液相色譜圖1.paracetamolA. Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（20 ∶80，V／ V）；檢測波長：244 nm；流速：1.0 mL／min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液：取對乙酰氨基酚對照品約3.0 mg，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加20%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品20 粒，研細，稱取適量（約相當于對乙酰氨基酚150 mg），精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇約40mL，置50℃超聲浴中處理（功率為380W，頻率為37 kHz，下同）10 min，取出，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，于4 ℃下放置1.5 h，離心，上清液放置至室溫，精密量取上清液2 mL，置100 mL 容量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45 μm 微孔濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：按樣品處方制備工藝制得不含對乙酰氨基酚的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備，即得。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：吸取2.2 項下3 種溶液各10 μL，按選定色譜條件測定，記錄色譜峰。結果對乙酰氨基酚的保留時間為6.090 min，理論板數按對乙酰氨基酚峰計應不低于2 000，基線分離良好，且陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

線性關系考察：取對乙酰氨基酚對照品20.502 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加流動相溶解并定容，作為對照品貯備液。分別精密量取1，2，5，10，15，20 mL，置25 mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述溶液各10 μL，依法進樣測定，以峰面積積分值（Y）為縱坐標、進樣量（X，μg）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝22 588X-64.731，r＝0.999 5（n＝6）。結果表明，對乙酰氨基酚進樣量在0.081 9 ～1.639 μg 范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取2.2 項下對照品溶液，按選定色譜條件連續進樣6 次，測定。結果對乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.05%（n ＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取樣品（批號為20190604）適量，依法制備供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時按擬訂色譜條件進樣測定。結果對乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.08%（n ＝7），表明室溫下供試品溶液在24 h 內基本穩定。

重復性試驗：取樣品（批號為20190604）適量，依法制備供試品溶液，平行制備6 份，按選定色譜條件進樣測定。結果含量的RSD為0.67%（n ＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為20190604，含量為153.082mg／g）0.5g，精密稱定，共9份，分別置50 mL 容量瓶中，并精密加入對乙酰氨基酚對照品溶液（質量濃度為3.004 mg／mL，溶劑為甲醇）20，25，30 mL，依法制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL，依法進樣測定，并計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n ＝9）Tab.1 Results of the recovery tests（n ＝9）

2.4 樣品含量及其均勻度測定

含量測定：取17 批樣品，按2.2 項下方法制備供試品溶液，照選定色譜條件測定，按外標法計算含量。取其中的6 批樣品，按原標準方法，采用紫外-可見分光光度法測定樣品中對乙酰氨基酚的含量，依法計算，結果見表2。

表2 復方小兒退熱栓樣品含量及其均勻度測定結果Tab.2 Determination of content and content uniformity of paracetamol in Compound Child Antifebrile Suppository

含量均勻度（A+2.2S）測定：取17 批樣品各10 粒，分別置50 mL 容量瓶中，加甲醇40 mL，置50 ℃超聲浴中超聲處理10 min，取出，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，于4 ℃下放置1.5 h，離心，上清液放置至室溫，精密量取2 mL，置100 mL 容量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，即得，照選定色譜條件測定，按外標法計算含量，按2015 年版《中國藥典（四部）》通則0941［9］含量均勻度檢查法，計算含量均勻度（A+2.2S）。結果見表2。

3 討論

由于本品處方中含有南板藍根浸膏粉，供試品溶液過濾后顏色依然較深，導致紫外吸光度易出現偏差，測定值均偏高，影響測定結果的準確性，具有一定局限性。本試驗中建立的對乙酰氨基酚HPLC 含量測定方法，陰性對照無干擾，方法專屬性強，可用于復方小兒退熱栓中對乙酰氨基酚的含量測定。

王巍等［8］報道，樣品以0.01 mol／L 氫氧化鈉溶液溶解提取稀釋后，采用HPLC 法、以甲醇-0.05 mol／L醋酸銨溶液（10 ∶90，V／ V）為流動相測定對乙酰氨基酚的含量。預試驗中考察了甲醇-0.05 mol／L 醋酸銨溶液（10 ∶90，V／ V）、甲醇-0.5%冰醋酸（20 ∶80，V／ V）和甲醇-水（20 ∶80，V／ V）作為流動相，分離效果均較好，色譜峰對稱，陰性對照無干擾，故選擇甲醇-水（20 ∶80，V／ V）作為流動相，方法簡單，且可減少含鹽流動相的使用；樣品采用甲醇溶解提取后冷凍除去栓劑中的基質，起到了純化的作用，同時避免了使用強堿溶液，減少了對色譜柱柱效的影響。

3 家藥品生產企業生產的復方小兒退熱栓有每粒0.7 g 和1.0 g 兩種規格，但對乙酰氨基酚含量均為150 mg，小于每個單劑質量的25%，且本品屬兒科用藥，建議檢查含量均勻度［9］，從制劑學角度加強對藥物的質量控制。