槲皮素對軟骨肉瘤線粒體抑制機制的研究

勾旭升，李華哲，李 覓，張 睿，陳立民

（哈爾濱醫科大學附屬第四醫院骨科，黑龍江哈爾濱 150001）

軟骨肉瘤是來源于軟骨細胞的惡性腫瘤，患病率占全部惡性骨腫瘤的16.1%［1］，好發于長骨近端及四肢帶骨，常見于40～70歲中老年人［2］。因其對放化療不敏感，常需要手術切除及肢體重建［3］。但微小病灶的殘留易造成腫瘤的復發及轉移，因此尋找有效抑制軟骨肉瘤的藥物成為骨腫瘤領域亟待解決的問題。槲皮素是存在于多種中藥及食物中的黃酮類化合物，近年來研究表明，槲皮素能夠有效抑制肝癌、乳腺癌、鼻咽癌、骨肉瘤等腫瘤細胞，但其作用機制尚存在爭議［4～5］。為此，本研究將槲皮素加入體外培養的軟骨肉瘤細胞，觀察其對細胞線粒體功能的影響，并探討其作用機制，為軟骨肉瘤的治療提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 細胞培養與分組處理

軟骨肉瘤細胞（SW1353）源自美國菌種保藏中心（ATCC），槲皮素、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）激動劑740Y-P購自美國MedChemExpress公司，Western檢測抗體購自沈陽萬類公司，其余試劑均購自上海碧云天公司。細胞復蘇后接種于含10%胎牛血清的DMEM/F12培養基中，5%CO2、37℃條件下培養。待細胞鋪滿80%培養瓶后傳代。將細胞隨機分為加藥組、激動劑組、空白對照組，每組6個樣本。加藥組加入200 μg/ml槲皮素；激動劑組加入200 μg/ml槲皮素及20 μmol/L 740Y-P；空白對照組僅SW1353作為空白對照。藥物干預48h后對細胞各項指標進行檢測。

1.2 細胞活性檢測

細胞活性檢測采用CCK-8試劑盒。3組細胞消化后，各取100 μl加入96孔板中，37℃孵育24 h。每孔加入CCK-8溶液10 μl，37℃孵育1 h后，酶標儀（Bio-Rad iMark，美國）測定各孔樣本在450nm處的吸光值（A），以A測得值-A空白孔為各孔實際吸光值A450。……