小鼠椎間盤退變模型的CBX8改變△

周 旭，丁 悅，王明飛，劉鋮祎，蔡 葉

（上海中醫藥大學附屬普陀醫院，上海 200062）

腰椎間盤突出癥是脊柱外科臨床中非常常見的一類退變性疾病，是引起腰腿痛的常見原因；癥狀嚴重者可導致下肢功能障礙，甚至癱瘓；給社會造成巨大的經濟負擔［1-2］。好發年齡在20～50歲、病因主要為與年齡有關的退行性變［3-4］。染色質結合蛋白（chro?mobox protein homolog 8,CBX8）屬于 polycomb group（PcG）蛋白家族，其家族成員參與了調控細胞增殖分化；控制基因表達的穩定［5-7］，甚至失衡導致惡性腫瘤的發生［8-9］。現有報道脊柱退行性疾病的發生與細胞DNA的損傷有一定的關聯［10］，而CBX8作為PcG蛋白家族成員參與了DNA損傷修復。然而CBX8在小鼠椎間盤髓核細胞的體內表達以及功能還未知，因此本研究制備CBX8小鼠的針刺椎間盤退行性疾病模型，分別于針刺后8、12、16周進行檢測，觀察小鼠脊柱的穩定性、椎間隙高度、髓核細胞的衰老以及炎癥介質的表達情況，評估椎間盤退變程度以及CBX8與小鼠椎間盤退變的相關性。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與材料儀器

SPF級C57BL/6小鼠，18～20 g，雄性31只。主要實驗試劑：Tris-SDS分離膠緩沖液（pH8.8），Tris-SDS濃縮膠緩沖液（pH6.8），PMSF，ECL-化學發光液，15-150KDa雙色預染maker，BSA，RIPA裂解液（強）等。主要儀器：恒溫搖床，化學發光儀，磁力攪拌器，勻漿器，低溫高速冷凍離心機，電轉儀，垂直電泳儀，酶標儀等。

1.2 體外實驗

1.2.1 體外髓核細胞分離與培養

取3只小鼠，雌雄不限。以0.5%戊巴比妥鈉0.1mg/kg體重腹腔注射，麻醉后采用心臟采血方法處死，后立即浸泡于75%乙醇30 min，消毒皮膚后放置超凈臺中解剖。鋪無菌手術巾，取后正中切口，取出整個腰椎，尖刀切開纖維環,將髓核完整取出并剪碎至約1 mm3，隨即放入0.25%的胰蛋白酶液中37℃下消化25 min。……