Duffy、Diego等4種血型系統基因頻率及多態性研究

易 玲，黃志翔，譚 濤，向雅香

湖南省岳陽市中心血站，湖南岳陽 414000

紅細胞血型系統在輸血技術學中具有重要意義，目前已發現人類紅細胞有36種血型系統，360種血型抗原[1]。紅細胞血型系統具有高度的遺傳多態性，不同民族和地區存在差異[2]。本研究采用聚合酶鏈式反應-序列特異性引物法(PCR-SSP法)對Duffy、Dombrock、Diego、Kidd 4種紅細胞血型系統8個抗原基因進行分型，分析岳陽地區漢族人群血型抗原基因頻率和多態性。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機留取本血站2019年12月303份非血緣關系岳陽籍、漢族、ABO血型不限、RhD(+)固定獻血者5 mL EDTA抗凝全血標本。年齡18～55歲，男131名，女172名。本研究經無償獻血者知情同意。

1.2儀器與試劑 儀器：離心機(Eppendorf公司，德國)；凝膠成像儀(Bio-Rad公司，美國)；PCR儀(Life technologies公司，美國)。試劑:EX-DNA Kit(天津TIANLONG公司，批號:E0819040131);人類Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系統抗原基因分型檢測試劑(天津吉諾泰普生物技術有限公司，批號:E20191009)。

1.3方法

1.3.1樣本DNA提取 按TIANLONG EX-DNA Kit試劑說明書提取全血基因組DNA。

1.3.2PCR擴增及電泳 按照按照試劑盒說明書進行PCR-SSP法擴增。Kidd(Jka/Jkb)、Duffy(Fya/Fyb)、Diego(Dia/Dib)、Dombrock(Doa/Dob)血型系統PCR循環參數:96 ℃預變性2 min;96 ℃ 20 s,68 ℃ 60 s,5個循環;96 ℃ 20 s,65 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,10 個循環;96 ℃ 20 s,62 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,15個循環;72 ℃延長 2 min,4 ℃保存。PCR產物采用2.5%瓊脂糖凝膠于電壓140～150 V條件下電泳10～15 min,采用自動凝膠圖像分析儀成像并記錄電泳結果。

1.3.3PCR-SSP法結果判定 每個PCR反應都產生強弱不一的1 009 bp內對照產物。根據有無PCR產物及產物長度按表1指定相應血型基因。在相應堿基對位置觀察有無特異性條帶，若出現特異性條帶判讀為陽性，未出現則判斷為陰性。

1.4統計學處理 應用SPSS24.0統計軟件進行數據分析。按基因計數法計算基因頻率，計算觀察值和期望值，采用χ2檢驗分析基因分布是否符合Hardy-Weinberg平衡法則，按參考文獻[3]計算抗原不配合率。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1岳陽漢族人群紅細胞血型系統抗原基因型及基因頻率 Duffy、Dombrock、Diego和Kidd血型系統抗原基因頻率具有多態性，其血型系統對偶抗原不配合率分別為0.095 0、0.142 3、0.047 0和0.374 6。采用χ2檢驗比較基因型分布的觀察值和期望值，各血型系統的P>0.05，符合Hardy-Weinberg平衡法則。見表2。

表1 紅細胞血型分型試劑盒PCR引物及擴增產物長度

表2 岳陽漢族人群紅細胞血型系統抗原基因型和基因頻率

2.2岳陽漢族人群與其他地區、民族人群血型系統等位基因多態性比較 見表3～6。

表3 Duffy血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

續表3 Duffy血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

表4 Dombrock血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

續表4 Dombrock血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

表5 Digeo血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

表6 Kidd血型系統等位基因在中國不同地區、民族人群中的分布

3 討 論

紅細胞血型系統在臨床輸血中具有重要意義，也是人類的重要遺傳標志，每個人的紅細胞選擇性表達其中一部分血型抗原。目前臨床輸血主要關注ABO、Rh血型系統，對Duffy、Diego、Dombrock、Kidd血型系統關注較少，即臨床輸血大多執行的ABO、Rh血型系統相配合，其他血型系統相容性的原則，這對第1次輸血的患者影響不大，但對需多次輸血的患者則影響很大[16]。臨床對多次輸血的患者進行交叉配血和不規則抗體篩選時，常有交叉配血不合現象發生，發現有抗-Jkb、抗-Dia、抗-Dob、抗-Fya等不規則抗體[17-18]，甚至還有由抗-Fyb、抗-Jkb、抗-Ce聯合抗體引起的溶血性輸血反應的個例報道[19]。這給輸血帶來極大麻煩，往往短時間內難以找到合適的獻血者，危及患者的生命。因此，了解一個地區人群多種紅細胞血型系統基因頻率分布特點，對指導臨床科學合理用血，特別是需要反復輸血的患者的用血安全具有重要意義。

有研究發現，岳陽漢族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系統抗原基因頻率具有多態性，Dombrock血型系統的Doa/Dob、Kidd血型系統的Jka/Jkb對偶抗原不配合率較高，分別為0.142 3、0.374 6，這些血型系統的個體因隨機輸血或妊娠，產生同種抗體的概率也較高，再次輸血時易引起溶血性輸血反應或存在交叉配血難以找到相容性血液的風險，再次妊娠時易發生新生兒溶血病[20]。

本研究結果顯示，岳陽漢族人群的Duffy、Dombrock、Diego、Kidd血型系統抗原基因頻率的多態性與我國其他地區漢族和少數民族相比，大部分差異無統計學意義(P>0.05)，僅岳陽漢族人群的Duffy血型系統與山西運城漢族人群差異有統計學意義(P<0.05)；Dombrock血型系統與西藏藏族、新疆哈薩克族差異有統計學意義(P<0.05)，與哈爾濱滿族差異無統計學意義(P>0.05)；Duffy血型系統與新疆哈薩克族差異有統計學意義(P<0.05)，與西藏藏族、哈爾濱滿族差異無統計學意義(P>0.05)；Diego、Kidd血型系統與新疆哈薩克族、西藏藏族、哈爾濱滿族差異無統計學意義(P>0.05)。提示不同血型系統在我國的不同民族、不同地區人群中分布存在著共性和個性。

隨著輸血技術學的發展，如何使臨床精準輸血、最大限度地避免免疫性輸血不良反應，從而達到科學合理、效果更好是輸血技術研究的重要方向[21]。對固定獻血者檢測多種紅細胞血型系統、建立獻血者血型基因信息庫，對稀有血型患者選擇配合型血液輸注具有重要意義。

本研究初步建立了岳陽地區多種紅細胞血型系統數據庫，充實了國家稀有血型獻血者數據庫，為臨床精準輸血提供了保障。