抗核抗體、類風(fēng)濕抗體在老年人梅毒特異性抗體檢測中的影響

江云川 龔麗坤 高 衛(wèi) 楊 婷 沈 藍(lán) 張 瑛

1 云南省楚雄州中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，云南省楚雄市 675000； 2 云南省滇南中心醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)部； 3 云南省昭通市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科

梅毒是嚴(yán)重影響人體健康的性傳播疾病，是由感染蒼白螺旋體(TP)誘發(fā)，可通過血液、母嬰、性接觸等途徑擴散，具有極大危害性,臨床可通過青霉素類藥物治療梅毒，部分患者可治愈[1]。目前，臨床使用較多的梅毒相關(guān)抗體檢測包括梅毒血漿快速反應(yīng)素(RPR)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)、梅毒特異性抗體酶聯(lián)免疫吸附實驗(TP-ELISA)、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)等實驗室方法，其中RPR和TRUST極易受到各種因素的影響出現(xiàn)假陽性所以必須聯(lián)合其他梅毒特異性抗體實驗才能診斷梅毒感染[2]。而梅毒特異性抗體酶聯(lián)免疫吸附實驗(TP-ELISA)是臨床上應(yīng)用最多的梅毒特異性抗體檢測方法,有報道單純的TP-ELISA檢測的準(zhǔn)確性有限，在一些情況下易出現(xiàn)假陽性[3]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)自身抗體隨年齡增長陽性率逐漸升高，而老年人群梅毒發(fā)病率也居高不下，老年人自身抗體水平顯著高于其他人群或可影響梅毒抗體檢測，但臨床尚無系統(tǒng)的研究[4-5]。鑒于此，本研究探討抗核抗體(ANA)和類風(fēng)濕抗體對老年人梅毒特異性抗體檢測中的影響。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2017年2月—2019年7月TP-ELISA有反應(yīng)的老年患者1 043例，其中男612例，女431例；年齡60～79歲，平均年齡(69.48±5.62)歲；體質(zhì)量指數(shù)20.75～28.36，平均體質(zhì)量指數(shù)24.31±2.18。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①TP-ELISA有反應(yīng)；②入組前6個月，未使用免疫增強或抑制藥物者；③無嚴(yán)重精神系統(tǒng)疾病者；④患者及其家屬均知情同意。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在病原體感染如艾滋病病毒、丙型肝炎、乙型肝炎等；②存在惡性腫瘤者；③不能配合檢查或中途退出者。

1.3 檢測方法 清晨采集受試者3ml空腹靜脈血，30min靜置，10min離心，3 000r/min，取血清備用，首先用TP-ELISA對所準(zhǔn)備的血清標(biāo)本進行篩查,對TP-ELISA實驗有反應(yīng)的標(biāo)本進行ANA、TPPA、類風(fēng)濕因子(RF)檢測。TP-ELISA檢測：采用上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)的梅毒特異性抗體檢測試劑盒,操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行, TP-ELISA實驗有反應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)：S/CO>1。ANA檢測：采用歐蒙(杭州)醫(yī)學(xué)實驗診斷有限公司生產(chǎn)的抗核抗體IgG(接免疫熒光法)檢測試劑盒，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行，試驗結(jié)果通過奧林巴斯BX-51熒光顯微鏡觀察，陽性標(biāo)本判斷標(biāo)準(zhǔn)：滴度≥1∶100出現(xiàn)陽性反應(yīng)。TPPA檢測：采用日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)的TPPA試劑盒，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行, 陽性標(biāo)本判斷標(biāo)準(zhǔn):稀釋度≥1∶80出現(xiàn)陽性反應(yīng)。RF試驗：采用德國雅仕通診斷有限兩合公司生產(chǎn)的類風(fēng)濕抗體檢測試劑盒, 操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行, 陽性標(biāo)本判斷標(biāo)準(zhǔn),類風(fēng)濕抗體IgA、IgG、IgM任意抗體定量>18U/ml。依據(jù)各項檢測結(jié)果，分為ANA陽性組、RF陽性組、RF、ANA同時陽性組及RF、ANA同時陰性組(對照組)。以TPPA檢測結(jié)果作為梅毒特異性抗體診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。分別記錄TPPA檢測結(jié)果，計算TPPA與TP-ELISA不符合率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，以%和n表示計數(shù)資料，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與對照組相比，ANA陽性組、RF陽性組及RF、ANA同時陽性組的TPPA與TP-ELISA不符合率均較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.188、10.432、20.625，P=0.000、0.000、0.000)。見表1。

表1 ANA及RF檢測結(jié)果

3 討論

近年來我國梅毒發(fā)病率不斷增長，主要由TP感染而誘發(fā)疾病，其致病機制無準(zhǔn)確定論，但有研究發(fā)現(xiàn)，因老年人身體條件特殊，免疫力低下，且伴有高血壓、糖尿病等合并癥，易感染TP，進而損傷器官組織，促使自身免疫原性成分釋放，進而刺激免疫系統(tǒng)，使其出現(xiàn)免疫應(yīng)答，促使自身抗體形成，加重組織損傷。尤其是老年人隱性梅毒發(fā)病率比較突出，梅毒螺旋體感染者作為唯一感染源，感染性強烈，唾液、乳汁、精液、血液等多種途徑均可傳播，但相當(dāng)一部分梅毒螺旋體感染者無特異性癥狀，其臨床診斷采取合適的實驗室方法尤為重要[6]。

目前，臨床上常用TP-ELISA、TP-SA方法進行檢測，前者適用于大批量檢測，但假陽性較高，后者成本高、時間長，檢測結(jié)果并不理想。本研究采用TPPA檢測作為梅毒特異性抗體診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其檢測特異性強、敏感度高，但不能實現(xiàn)自動化操作和判讀結(jié)果，在大規(guī)模篩查中不適用。而TP-ELISA在多數(shù)情況下?lián)碛锌煽康奶禺愋?、敏感度，而且實現(xiàn)了自動化操作和判讀結(jié)果臨床上應(yīng)用尤為廣泛，但在特殊條件下抗干擾能力較弱。研究結(jié)果顯示，梅毒特異性抗體TP-ELISA有反應(yīng)性的1 043例老年人中，對照組TPPA與TP-ELISA不符合率1.10%，ANA陽性組TPPA與TP-ELISA不符合率8.70%，RF陽性組TPPA與TP-ELISA不符合率5.42%，RF、ANA同時陽性組TPPA與TP-ELISA不符合率8.65%，三組結(jié)果均與對照組有明顯差異，提示TP-ELISA檢測梅毒特異性抗體在存在抗核抗體和類風(fēng)濕抗體時會增加其假陽性率，而臨床診斷中如果僅僅使用TP-ELISA+RPR/TRUST診斷在此人群會有較多誤診現(xiàn)象。另外，相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)，相較于健康人群，老年梅毒感染患者ANA陽性率較高，其原因也可能是老年人身體條件特殊，感染梅毒螺旋體進而損傷器官組織，促使自身免疫原性成分釋放，進而刺激免疫系統(tǒng)，使其出現(xiàn)免疫應(yīng)答，促使自身抗體形成[7-8]。此外，老年患者因自身伴有免疫系統(tǒng)功能異常，在TP感染后，會導(dǎo)致多種非特異成分增加，包括甲胎蛋白、糖尿病自身抗體、嗜異性抗體、治療性抗體等，更易出現(xiàn)自身免疫反應(yīng)。而ANA作為一種自身抗體，可作用于細(xì)胞核內(nèi)的蛋白、DNA、RND等成分，識別多種細(xì)胞核組分，在自身免疫性溶血性貧血、系統(tǒng)性硬化癥、風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種自身免疫性疾病可特征性的形成。因此，在TPPA對TP-ELISA的結(jié)果進行復(fù)查的基礎(chǔ)上，可輔助ANA檢測，以提高臨床診斷符合率，幫助患者早期確診治療。

綜其所述，TP-ELISA檢測梅毒特異性抗體在老年人群特別是有自身抗體存在的人群中假陽性率較高，TP-ELISA+RPR/TRUST在此人群中的應(yīng)用有很大局限性。在TP-ELISA有反應(yīng)性的老年人標(biāo)本中應(yīng)當(dāng)使用TPPA對TP-ELISA的結(jié)果進行復(fù)查確認(rèn)，有條件的最好同時進行ANA檢測，一方面可以提高梅毒感染臨床診斷可靠性，另一方面也可發(fā)現(xiàn)梅毒感染患者的自身免疫性疾病情況，協(xié)助臨床相關(guān)診斷治療。